RAC1基因多态性对Rac1-GTP蛋白表达水平的影响

目的:考察RAC1基因多态性与Rac1-GTP蛋白表达水平的相关性。方法:选择182例健康汉族志愿者,经Taq Man-MGB探针等位基因分型技术测定RAC1基因中的4个标签单核苷酸多态性(tag single nucleotide polymorphism,tagSNPs)位点的基因型,采用酶联免疫吸附法测定其血浆中的Rac1-GTP蛋白表达水平。分析Rac1-GTP蛋白表达水平的分布特点;对RAC1基因4个tag-SNPs不同基因型间Rac1-GTP蛋白表达水平进行比较。结果:Rac1-GTP蛋白表达水平在健康汉族人群中呈现正偏态分布,女性中的表达水平高于男性(P<0.05);随着年龄的增加有降低的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。Rac1-GTP蛋白表达水平在位点rs702482和rs10951982基因型间存在显著性差异(P<0.05),但在位点rs702483和rs6954996基因型间无统计学差异(P>0.05)。结论:在健康汉族人群中RAC1基因多态性存在影响Rac1-GTP蛋白表达水平的SNP位点。

透骨消痛胶囊对凋亡软骨细胞Rac1和Cdc42表达的影响

背景:透骨消痛胶囊治疗早、中期骨性关节炎有较好疗效,但作用机制尚未完全阐明。小GTP酶Rho能够抑制软骨细胞肥大分化,促进软骨细胞的凋亡。目的:观察透骨消痛胶囊对体外培养凋亡大鼠关节软骨细胞Rac1和Cdc42的影响,并初步探讨其防治骨性关节炎的作用机制。方法:采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立稳定的软骨细胞体外培养体系,采用甲苯胺蓝染色法对第3代软骨细胞进行鉴定。用20μg/L的肿瘤坏死因子α诱导体外培养软骨细胞的凋亡,诱导成功后,给予透骨消痛胶囊(500,100,20 mg/L)孵育24 h后,分别用MTT法检测各组软骨细胞的存活率,用流式细胞仪检测各组软骨细胞的线粒体膜电位情况,Western Blot检测各组软骨细胞Rac1,Cdc42,Bcl-2及Bax蛋白表达。结果与结论:透骨消痛胶囊能够减少肿瘤坏死因子α所致的软骨细胞凋亡,提高线粒体膜电位,提高细胞的存活率,同时能够下调Rac1,Cdc42,Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白表达,差异均有显著性意义(P<0.05)。提示透骨消痛胶囊可能通过下调Rac1,Cdc42和Bax蛋白表达,增加凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达,从而抑制软骨细胞的凋亡,而起到治疗骨性关节炎的疗效。

Rac1在垂体腺瘤组织中的表达及意义

目的探讨Rac1蛋白及mRNA在垂体腺瘤组织中的表达情况。方法应用免疫组化技术、RT-PCR方法检测82例垂体腺瘤标本中Rac1蛋白及mRNA的表达情况,包括29例侵袭性垂体腺瘤和53例非侵袭性垂体腺瘤。结果免疫组化结果显示:垂体腺瘤Rac1标记指数(LI)为3.34%～53.7%,其中侵袭性垂体腺瘤LI平均为33.5%,非侵袭垂体腺瘤LI平均为8.2%,两者差异具有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR显示:Rac1mRNA灰度比侵袭性垂体腺瘤为0.891±0.172,非侵袭性垂体腺瘤为0.372±0.181,两者差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 Rac1与垂体腺瘤的侵袭能力密切相关,Rac1过表达可增强垂体腺瘤的侵袭能力并导致临床预后不良。

RAC1基因遗传多态性研究进展

Ras相关的C3肉毒素底物1(ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)是Rho GTP酶超家族里Rac亚家族中的一员,是细胞内重要的信号转导分子,参与众多的生理活动并其重要的调控作用。机体内RAC1基因被激活的水平具有个体差异性,因而研究体内RAC1基因的表达水平及其对某种疾病的易感性或者对某类药物的反应具有重要意义。研究RAC1基因的多态性有助于从序列信息预测蛋白质结构,进而理解蛋白质功能,从而能在基因水平上预测疾病发展和实施个体化医疗。本文将就RAC1基因突变及其上单核苷酸多态性与疾病的联系方面介绍相关研究进展。

p120-catenin和Rac1的协同表达与非小细胞肺癌恶性程度相关性的研究

背景与目的在肺癌组织中,p120-catenin(p120ctn)与smallGTP酶家族中的主要成员Rac1的表达是否具有相关性,至今尚不清楚。方法本研究应用S-P免疫组化、Western Blot、RT-PCR方法观察138例肺癌标本及2种具有不同侵袭转移能力的同源肺癌细胞系中p120ctn和Rac1的表达。结果在肺癌组织中p120ctn的蛋白和mRNA表达水平均明显低于正常肺组织,而Rac1在肺癌组织中的表达明显高于正常肺组织,p120ctn的异常表达与Rac1的过表达有较好的相关性(Correlation coefficient=0.720,P<0.001),并与肺癌的分化(P=0.022),分期(P=0.010)和淋巴结转移(P=0.009)相关。同时,在肺癌细胞系中我们还观察到p120ctn表达下降和Rac1的过表达现象在具有高转移能力的BE1细胞系中尤为突出。结论肺癌中p120ctn的异常表达与Rac1的过表达有关,并与肺癌的恶性程度相关。

Rac1和WAVE2蛋白在高脂饮食C57BL/6J幼鼠肾小球中的表达及意义

目的探讨Rac1和WAVE2蛋白在高脂饮食诱导的C57BL/6J幼鼠肾小球中的表达及意义。方法 32只3周龄雄性C57BL/6J幼鼠随机分为正常饮食组和高脂饮食组,每组16只。分别给予标准饲料(脂肪含量10%)与高脂饲料(脂肪含量60%)喂养4周。HE染色和PAS染色观察小鼠肾脏的病理形态学改变;应用免疫组织化学技术及蛋白免疫印迹技术检测Rac1和WAVE2蛋白的表达。结果与正常饮食组相比,高脂饮食喂养的C57BL/6J幼鼠出现了肾小球系膜基质轻度增生以及渗出等病理改变。同时高脂饮食组小鼠肾小球Rac1和WAVE2蛋白的表达明显增强。结论 Rac1和WAVE2蛋白可能共同参与了高脂饮食诱导的C57BL/6J幼鼠肾小球的损伤。

Rac1在内皮细胞韦伯潘力氏小体释放中的作用

目的 探讨人主动脉内皮细胞 (HAEC)韦伯潘力氏小体 (Webel Paladebody ,WPB)释放的信号传导机制。方法 假设小G蛋白Rac1和活性氧自由基 (ROS)介导内皮细胞WPB的释放。通过使用腺病毒介导的Rac1基因的充分表达 ,观察HAEC产生和清除ROS的过程 ,以及对WPB释放的影响。结果 凝血酶 (1单位 ,30min)介导WBP释放增加 (较基础值增加了 3倍 )的同时 ,使Rac GTP结合活性及ROS分别增加了 3 5倍和 2 4倍。与对照组比较 ,阴性突变的腺病毒Rac N17转染使凝血酶处理和未处理组HAEC中WPB的释放分别减少了 77%和 6 4 % ,使ROS分别降低了 83 6 %和6 5 5 %。而且 ,抗氧化剂过氧化氢酶和N 乙酰半胱氨酸分别使WPB的释放较对照组下降了 34%和79 %。同时 ,证实Rac1位于ROS调节WPB释放途径的上游。结论 小G蛋白Rac1介导HAEC凝血酶诱导的WPB的释放。WPB的释放机制是Rac1依赖的ROS调节过程。

人Rac1基因shRNA表达质粒的构建及鉴定

目的构建人Rac1基因shRNA表达质粒,为提高卵巢癌放化疗的敏感性奠定基础。方法根据GenBank中登录的人Rac1基因序列,应用shRNA设计软件设计并合成用于构建shRNA表达质粒的oligo DNA,构建shRNA重组质粒。将阳性Rac1基因shRNA重组质粒经脂质体介导转染卵巢癌Skov3细胞,48 h后经RT-PCR筛选有效的shRNA重组质粒。结果经限制性内切酶BamHⅠ和PstⅠ酶切鉴定出阳性Rac1基因shRNA重组质粒,序列比对分析结果与理论序列完全一致。RT-PCR检测显示,转染pGPU6/GFP/Rac1-524的Skov3细胞Rac1基因mRNA的转录水平下降。结论已成功构建人Rac1基因shRNA表达质粒,并筛选出有效的干扰质粒pGPU6/GFP/Rac1-524。

阻断Rac1对转化生长因子-β诱导视网膜色素上皮细胞行为改变的作用研究

目的 观察转化生长因子β1（TGF-β1）诱导视网膜色素上皮（RPE）细胞间质样转分化（EMT）过程中Rac1在其细胞学行为改变中的作用.方法 人RPE-19细胞分为空白组、TGF-β1组、TGF-β1＋NSC23766组、NSC23766组.所有实验于加入TGF-β1前2h给予NSC23766以封闭Rac1受体.免疫荧光、蛋白免疫印迹法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达;细胞划痕、侵袭及凝胶收缩实验,观察NSC23766对细胞迁徙、侵袭、凝胶收缩作用.结果 TGF-β1组细胞中α-SMA荧光表达较空白组、TGF-β1＋ NSC23766增强,差异有统计学意义（F=825.314,P=0.003）;细胞划痕实验结果显示,TGF-β1组细胞间距小于TGF-β1＋ NSC23766组,差异有统计学意义（P24h=0.04,P48h =0.001）;与空白组细胞间距比较,差异无统计学差异（P=0.278）.细胞侵袭实验结果显示,TGF-β1组穿过纤维膜的细胞数与空白组、TGF-β1＋ NSC23766组、NSC23766组穿过纤维膜的细胞数比较,差异无统计学意义（F=0.371,P=0.055）.凝胶收缩实验结果显示,TGF-β1组能明显增加细胞的促凝胶收缩能力,组间差异有统计学意义（F=40.473,P=0.014）,TGF-β1组相对TGF-β1＋ NSC23766组,差异有统计学意义（P=0.022）.结论 Rac1在TGF-β1诱导RPE细胞凝胶收缩改变中发挥作用;NSC23766可通过调控Rac1活化抑制RPE细胞学行为的改变.

FAP促卵巢癌侵袭和迁移的细胞内途径

目的:明确FAP发挥促增殖、侵袭和迁移作用的细胞内传递途径。方法:Transwell实验和迁移实验检测FAP、RhoA/ROCK、Rac1-GTP对卵巢癌细胞系HO-8910PM的增殖,侵袭和迁移的影响。结果:迁移和侵袭实验证实用Y-27632抑制RhoA/ROCK途径能促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭,与FAP联合作用时可使促进作用增强。迁移和侵袭实验证实NSC23766可抑制Rac1迁移和侵袭,与FAP联合作用可使FAP的促进作用减弱。结论:FAP不是通过细胞内RhoA/ROCK,而是通过Rac1-GTP信号通路在HO-8910PM细胞发挥促增殖、迁移和侵袭作用的。

Rac1在糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用:与线粒体自噬的关系

目的评价Rac1在糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其与线粒体自噬的关系。方法SPF级健康成年雄性SD大鼠,8周龄,体重250~280 g,腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病模型。糖尿病模型制备成功大鼠48只,采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血再灌注+慢病毒抑制Rac1组(I/R+shRac1组)和缺血再灌注+阴性慢病毒组(I/R+NC组)。I/R组采用阻塞大脑中动脉90 min,再灌注24 h的方法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型。I/R+shRac1组和I/R+NC组分别于模型制备前7 d,经右侧脑室注射Rac1 shRNA慢病毒载体或慢病毒阴性对照载体10μl。于再灌注24 h时断头取脑,确定脑梗死体积;采用Western blot法检测BNIP3、P62、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ表达,并计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果与sham组比较,余3组脑梗死体积增加(P<0.05);与I/R组比较,I/R+shRac1组脑梗死体积降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,BNIP3表达上调,P62表达下调(P<0.05或0.01),I/R+NC组各指标差异无统计学意义(P>0.05);与I/R+NC组比较,I/R+shRac1组脑梗死体积降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,BNIP3表达上调,P62表达下调(P<0.05或0.01)。结论抑制Rac1可减轻糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤,其机制与增强线粒体自噬有关。

RAC1基因多态性对其mRNA转录和表达的影响

目的:探讨RAC1基因上4个单核苷酸多态性(SNPs)对其mRNA转录和表达的影响,为进一步研究RAC1基因多态性与相关疾病及药物反应性之间的关系做铺垫。方法:实时荧光TaqMan-MGB探针等位基因分型技术被用来测定242例湖北地区健康志愿者的RAC1基因上4个SNPs位点的基因型,同时采用Trizol法提取总mRNA并用RTQ-PCR进行定量分析。结果:本研究所选4个SNPs位点均符合Hardy-Weinberg平衡,且各SNP位点相互独立。4个SNPs的等位基因、基因型分布频率在不同性别间没有差异(P>0.05)。RAC1基因转录的mRNA的表达量与性别和年龄不相关(P>0.05)。携带rs702482-TT基因型者的RAC1 mRNA比携带其他两种基因型的人RAC1 mRNA表达量低,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RAC1基因转录的mRNA的表达量与性别和年龄无关(P>0.05),但受rs702482-TT基因型的影响而表达下调。

Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)的研究进展

Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)是Rho GTP酶家族的Rac亚家族中的一员。该家族编码的蛋白质因分子量只有20~30 ku而被称为小G蛋白,具有GTP酶活性,在多种细胞反应中具有开关作用。Rac1有多种生物学功能,可调控细胞极性、吞噬作用、细胞迁移、囊泡的转运以及调节肌动蛋白骨架的形成等。从研究概况、作用机制、生物学功能等方面,对Rac1基因的研究进展进行了综述,以期为进一步阐明Rac1的生物学功能及其作用机理提供理论依据。

七氟烷麻醉诱发新生大鼠远期学习记忆能力障碍与PSD-95/Kalirin-7/Rac1信号通路的关系

目的评价七氟烷麻醉诱发新生大鼠远期学习记忆能力障碍与突触后致密蛋白95(PSD-95)/Kalirin-7/Ras相关的C3肉毒杆菌毒素底物1(Rac1)信号通路的关系。方法SPF级雄性Wistar大鼠60只,7日龄,体重12~18 g,采用随机数字表法为分为5组(n=12):对照组(C组)、1%七氟烷麻醉2 h组(S1组)、1%七氟烷麻醉4 h组(S2组)、2%七氟烷麻醉2 h组(S3组)和2%七氟烷麻醉4 h组(S4组)。麻醉后第4、8和12周行Morris水迷宫实验。末次Morris水迷宫实验完成后,处死大鼠,取海马组织,HE染色观察病理学结果,TUNEL染色计算神经元凋亡率,分别采用Western blot法和qRT-PCR法检测PSD-95、Kalirin-7和Rac1及其mRNA的表达。结果与C组比较,麻醉后第4、8和12周S1组、S2组、S3组、S4组逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,目标象限停留时间缩短,海马神经元凋亡率升高,磷酸化Rac1/Rac1比值降低,PSD-95、Kalirin-7及其mRNA表达下调(P<0.05);与S4组比较,S1组、S2组、S3组逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增多,目标象限停留时间延长,海马神经元凋亡率降低,磷酸化Rac1/Rac1比值升高,PSD-95和Kalirin-7及其mRNA表达上调(P<0.05),海马组织病理改变程度减轻。结论七氟烷麻醉诱导新生大鼠远期学习记忆能力障碍的机制可能与抑制海马PSD-95/Kalirin-7/Rac1信号通路活性有关。