MiR-4324通过作用于RacGAP1抑制人RCC细胞的增殖

目的:观察miR-4324对人RCC细胞生长的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测RCC组织和癌旁组织中RacGAP1 mRNA和miR-4324的表达;通过细胞瞬时转染的方式在人RCC细胞中转染miR-4324模拟物和过表达RacGAP1质粒;qPCR检测细胞miR-4324潜在靶基因RacGAP1 mRNA的表达,Western印迹法检测RacGAP1蛋白的表达;采用细胞增殖实验检测细胞增殖能力;采用EdU实验检测细胞增殖活力。结果:qPCR结果显示,与肾小管上皮细胞和正常肾组织相比,RCC细胞和RCC组织中miR-4324表达明显降低,RacGAP1 mRNA表达明显增高;与对照组相比,转染miR-4324分别抑制786-O和CAKI-1细胞中RacGAP1 mRNA的表达,Western蛋白印迹检测结果验证了miR-4324对RacGAP1基因表达的调控;而RCC细胞786-O和CAKI-1细胞中共转染miR-4324模拟物和过表达RacGAP1质粒后,细胞中RacGAP1表达恢复。MTT结果显示,与阴性对照组相比,转染miR-4324模拟物后,细胞增殖能力明显下降;共转染miR-4324模拟物和过表达RacGAP1质粒后,细胞增殖能力逐渐增强。EdU结果显示,与阴性对照组相比,转染miR-4324模拟物的细胞EdU阳性细胞百分比明显减低,表明细胞增殖能力明显下降。双荧光素酶报告基因实验结果显示,在RCC细胞786-O和CAKI-1细胞中miR-4324能够与RacGAP1基因3’UTR特定序列结合从而靶向调控RacGAP1基因的表达。结论:miR-4324能通过靶向结合RacGAP1的3’UTR特定序列抑制其表达,从而显著抑制RCC细胞的增殖。