辐射诱发支气管癌变细胞中p14^(ARF)、p16^(INK4a)及BUB3基因甲基化分析

背景与目的肿瘤抑制基因的甲基化是发生肿瘤的重要机理之一,本研究通过检测p14ARF、p16INK4a及BUB3基因在辐射诱发的人支气管上皮细胞癌变株中的甲基化情况,探讨辐射诱发癌变的机理。方法用甲基特异性的PCR(MSP)分析基因启动子区CpG岛的甲基化情况,用RT-PCR检测细胞的基因转录水平及DNA纯化、转化、测序。结果p14ARF基因在正常细胞中没有甲基化,但在其辐射诱发的癌变细胞中发生了甲基化。RT-PCR结果进一步显示p14ARF基因的转录水平显著下降。与p14ARF基因共用2个外显子的p16INK4a基因则没有发生甲基化;BUB3基因在正常细胞及辐射诱发的癌变细胞中均没发生甲基化,并经测序证实。结论在辐射诱发的人支气管上皮细胞恶性转化中,共用两个外显子、与细胞周期调节有关的两个基因p14ARF与p16INK4a的甲基化不同步,甲基化的p14ARF基因出现转录抑制,而与有丝分裂检测点相关的BUB3基因没有发生甲基化。

α-粒子诱发BEP2D细胞恶性转化中DNA修复基因DNA-PK的表达和突变分析

目的 :研究α 粒子诱发人支气管上皮细胞 (BEP2D)恶性转化中DNA修复基因DNA PK的结构和表达变化。方法 :用Northernblot杂交检测基因转录水平 ,聚合酶链式反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)分析基因编码序列结构变化。结果 :癌变细胞中DNA修复基因Ku70 (XRCC 6 )的编码碱基发生突变 ,第 114 8～ 115 3位点由AGGATC突变为GAGTAC ,致使编码的氨基酸由RI变为EY ;细胞恶性转化过程中 ,DNA修复基因DNA PKcs(XRCC 7)的表达发生改变 ,在恶性转化早期即α 粒子照射后第 2 1代就已被抑制 ,但发生癌变 (第 35代 )后 ,部分细胞克隆的该基因表达又重新上调。结论 :DNA修复基因DNA PK的结构和表达的变化 ,导致细胞DNA修复能力缺陷 ,基因组不稳定性增加 ,是α 粒子癌变的分子机制之一。