乙型肝炎病毒HBsAg检测假阳性原因分析

目的我国人群乙型肝炎病毒(HBV)感染率高,HBV感染血清学标志物是临床实验室最主要的检测项目之一。本实验分析ELISA法检测HBV标志物s抗原(HBsAg)出现假阳性的原因并探讨应对措施。方法 ELISA法检测HBsAg阳性时,应用MEIA法复检。结果 156例样品用MEIA法复检HBsAgELISA法HBsAg阳性标本,结果4例阴性,ELISA法阴性误检率为2.56%。结论 ELISA法本实验室试剂存在HBsAg假阳性。在日常工作中,对ELISA法测定的HBV标志物5项指标HBsAg阳性的样品,严格多家试剂联合复检HBsAg是非常必要的。

献血者HBsAg阴性NAT可疑结果标本乙肝感染状况的调查分析

目的了解献血者应用ULTRIO PLUS核酸检测(NAT)后,初始反应性,鉴别实验阴性(NAT可疑结果)标本HBV DNA感染情况,分析其血清学和分子生物学特征,提高输血安全性。方法本中心2017年1—12月的97 577人(份)无偿献血者标本经常规和NAT检测后,收集HBsAg ELISA(-)/HBV DNA可疑标本,进行乙肝两对半检测与HBV DNA大容量提取,采用巢氏PCR方法扩增BCP/PC和S区基因序列,并对所得序列做基因型分析,同时采用实时荧光定量PCR检测(qPCR)和分析。结果 97 577(人)份献血者标本,通过ELISA和NAT初筛检出205(0.21%)份NAT可疑标本,经血清学、巢氏PCR和qPCR检测,93/205(45.4%)确证HBV DNA阳性, 92/93(98.9%)为隐匿性乙肝感染(OBI)标本。病毒定量范围(5—65.2)IU/mL,中位数为8.1 IU/mL。在可分型的35例标本中,HBV基因型B型18例(51.4%)、C型17例(48.6%)。结论 NAT可疑标本中仍能检出近半数标本为HBV DNA阳性,应提高目前NAT检测灵敏度,确保输血安全。

PreS1、HBV-DNA、HBeAg反映乙肝病毒复制的临床应用研究

目的比较PreS1、HBV-DNA、HBeAg反映病毒复制的临床应用价值。方法对疑有HBV病毒复制的乙型肝炎患者血清标本分别采用实时荧光定量PCR检测HBV-DNA、时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)定量检测HBV-e抗原和HBV PreS1抗原。结果PreS1抗原阳性率87.5%(460/526)高于HBV-DNA71.1%(374/526),有显著性差异(χ2=46.3,P<0.001),PreS1抗原阳性率高于HBeAg 37.1%(195/526),有显著性差异(χ2=251.6,P<0.001),HBV-DNA阳性率高于HBeAg(χ2=161.8,P<0.001),有显著性差异。结论TRFIA方法定量检测PreS1抗原,灵敏度高,特异性强,能够准确及时敏感地反映患者体内乙型肝炎病毒的复制情况。

献血者 HBsAg ELISA弱阳性NAT阴性标本的乙肝感染确证研究

目的调查深圳市无偿献血者HBsAg弱阳性NAT-HBV感染情况,分析血清学和分子生物学特征,探讨形成的分子机制。方法收集HBsAg弱阳性NAT阴性标本,用雅培化学发光微粒子免疫法(CMIA)和中和试验检测HBsAg,用罗氏电化学发光免疫法(ECLI)检测乙肝两对半,采用大容量提取巢式PCR扩增病毒BCP/PC和S区,分析HBV序列。同时进行病毒载量qPCR测定。结果109 752份血样中有104(0.095%)份HBsAg弱阳性NAT阴性血液标本参与本研究。由CMIA和ECLI确证为HBsAg+的有33例(31.7%),包括30例(90.9%)HBV DNA+。HBsAg阳性浓度与HBV DNA载量间成很弱相关性(R^2为0.4187)。在18个可分型的标本中,B型占88.9%,C型和D型仅检出1例(5.6%)。在S基因区发现Q129H,M133L/S/T,T143M、L175S和V177A影响HBsAg检测的高频变异。结论献血者HBsAg弱阳性NAT阴性标本中确有一定比例为乙肝病毒感染。有必要在血液筛查中应用灵敏度更高的HBsAg和NAT检测方法。

HBeAb光激化学发光免疫分析试剂盒的研制

目的研制光激化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)建立人血清乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的快速检测试剂盒。方法采用中和抑制法建立HBeAb AlphaLISA试剂盒。结果自制HBeAb试剂盒灵敏度为0.003NCU/ml,可测范围为0.003-16NCU/ml。批内与批间的精密度分别为5.3%和6.8%,与HBcAb无交叉反应。使用自制试剂与罗氏化学发光试剂盒同时检测136份临床血清样本,结果具有相关性(r=0.961)。结论自制HBeAb AlphaLISA试剂盒的各项性能指标能够达到临床检测要求,可用于临床血清样本HBeAb浓度的测定。

3种HBV DNA荧光定量PCR试剂检测结果比较

目的比较及评价3种HBV-DNA荧光定量PCR试剂检测结果的差异。方法同时用3种HBV-DNA荧光定量PCR试剂对已知结果的质控血清、标准品及本院79份HBsAg阳性的临床标本进行检测,并对检测结果进行比较分析。结果试剂A、B、C检测阳性率分别为41.77%(33例)、45.57%(36例)和41.77%(33例)。3种方法结果一致者66例,总符合率83.54%。试剂A、B与试剂C检测结果相比差异有统计学意义(P<0.05),试剂A与B检测结果相比差异无统计学意义(P>0.05)。试剂A与C的灵敏度、特异性均为77.78%、88.37%;试剂B灵敏度为89.66%、特异性80.00%。结论试剂A与B总体性能优于试剂C,适于临床检测与筛查。实验室必须选择质量好且符合自己实验室要求、与本实验室仪器相匹配的试剂以保证检验质量。

化学发光免疫分析法和时间分辨免疫荧光法定量检测不同浓度HBsAg的对比分析

目的以雅培全自动化学发光免疫分析法(CMIA法)为标准,探讨时间分辨免疫荧光法(TRIFA)检测血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的准确性和可行性,以便基层医院普遍开展此项目,为抗病毒个体化的策略及疗效的预测提供依据。方法分别用CMIA法和TRIFA法对157份乙型肝炎病毒(HBV)感染患者的血清进行检测,对于HBsAg滴度超过检测上限的样本,采用稀释液手动稀释后,再进行定量分析。将HBsAg水平分为4组:≤100 IU/mL、101~1 000 IU/mL、1 001~20 000 IU/mL、>20 000 IU/mL,分析两种方法阳性标本定量相关性。结果两种方法的直线回归方程为:Y=2.323X-896.3,相关系数r=0.943,P<0.001。以CMIA法检测值为参考,分为4组进行分析,结果显示在检测低浓度HBsAg样本时,TRIFA数值较CMIA法偏低,而高浓度样本以CMIA法检测值偏高。两种试剂在检测不同浓度的HBsAg均有较好的一致性(均P<0.05),其中以浓度在1 001~20 000 IU/mL时相关性最好。结论两种试剂在HBsAg定量检测上的准确性基本相当,定量相关性以检测值在1 001~20 000 IU/mL之间最佳。TRIFA成本低廉、易操作,更适于基层医院使用,具有广泛的应用前景。

乙肝病毒标志物与PCR-HBV定量水平的关系

目的 研究乙型肝炎病毒标志物定量检测结果与其HBV -DNA含量的临床关系。方法 采用时间分辨免疫定量和荧光定量 -PCR技术 ,对HBV -M和HBV -DNA含量进行检测。结果 在HBsAg/HBeAg/HBcAb ,HB sAg/HBeAb/HBcAb ,HBeAg/IC及单纯HBcAb阳性的 4个组中 ,HBV -DNA阳性率分别是 97 17% ,30 5 6 % ,10 0 %和 2 5 % ;在HBsAg ,HBeAg ,HBeAb、HBcAb定量检测高、低值两组HBV -DNA含量对比中 ,HBV -DNA阳性率分别为 76 92 % ,5 8 14 % ;10 0 % ,97 2 6 % ;2 0 0 0 % ,11 4 2 % ;6 4 6 2 %和 2 7 6 3%。结论 HBV -DNA比HBV -M更能及时准确反映乙型肝炎病毒感染者的病程情况。

献血者中低水平HBsAg乙肝病毒感染者分子生物学特征研究

目的了解核酸检测初筛阴性献血者中低水平乙肝表面抗原(HBsAg)乙肝病毒(HBV)感染情况并探讨其分子生物学特征。方法从本中心2017~2018年100363(人)份无偿献血者血样中,收集HBsAg酶联免疫试验(ELISA)阳性核酸检测(NAT)阴性献血者标本,用化学发光微粒子免疫法CMIA复检HBsAg,用电化学发光免疫法(ECLI)定量检测乙肝两对半,再做NAT单人份复检,采用巢式聚合酶链反应(PCR)扩增病毒BCP/PC和S区,用荧光定量PCR(qPCR)测定病毒载量。结果本中心2017~2018年HBV DNA(-)的低水平HBsAg献血者(标本)的检出率0.054%(60/100363),其中HBsAg ELISA试剂1检出比例90%(54/60),试剂2检出比例95%(57/60);60例中有33个可做HBV基因分型的标本,B型占87.9%(29/33),其中3.4%(1/29)为血清型ayw1、96.6%(28/29)血清型adw2;C型占12.1%(4/33),均为血清型adqr+。巢式PCR扩增:在B型S基因区发现影响HBsAg检测Q101R、Q129H、T131I、M133L/T、F134L、G145R、V168A、L175S和V177A变异株,在BCP/PC区发现减少HBV复制的高频突变C1799G(87.5%,21/24)。qPCR测得病毒载量中位数49.6(0~628)IU/ml。结论ELISA检测低水平HBsAg且NAT阴性献血者标本中存在少数未能被目前ELISA方法检出的HBV。在献血者血液筛查中应用灵敏度和特异性更高的HBsAg和NAT检测方法可提高检出HBV突变株的能力。

乙肝表面抗原双试剂阳性HBV-DNA核酸检测阴性结果分析

目的通过分析献血者乙肝表面抗原检测双试剂阳性而核酸检测阴性的结果,探讨1遍血清学联合1遍核酸检测的新检测策略对血液安全的意义。方法对2017—2019年献血者标本中乙肝表面抗原血清学双试剂阳性的标本,无论核酸检测系统采取的是混样模式还是单检模式都同时进行核酸检测。阴性的标本使用原检测系统再进行重复检测。结果 2017—2019年献血者检测标本共计25.8万人份,乙肝表面抗原双试剂阳性标本共计195份,核酸HBV DNA阳性标本172份,阴性标本23份,其中核酸单检系统阴性标本8份,核酸混检系统阴性标本15份。单检系统的8份标本再次进行检测,至少有1次为阳性的标本有5份,混检系统的15份标本再次进行检测,至少有1次为阳性的标本有9份。结论无论单检核酸检测系统还是混检核酸检测系统都会出现乙肝表面抗原双试剂阳性而核酸检测阴性的结果,其中混检系统较单检系统的标本数量要多近1倍。重复检测结果为阳性标本的比例约为60%,为低浓度标本的机会性检出。因此采取1遍血清学联合1遍核酸进行乙肝检测的新检测策略,无论是核酸检测系统还是血清学检测系统都应进行系统的评估,比较与实验室原有检测策略的差异,避免漏检的发生,减低输血传播疾病的风险。

乙型肝炎病毒HBeAb和HBcAb双阳性的实验分析

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)表面标志物HBeAb和HBcAb双阳性的实验结果。方法用ELISA法检测HBV表面标志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb,筛查出HBeAb和HBcAb双阳性标本100例,采用化学发光免疫分析仪重测HBV表面标志物。结果 ELISA法检测HBeAb和HBcAb双阳性的100例标本中,化学发光法检测出HBsAg阳性者60例,HBsAb阳性17例。ELISA和化学发光法所得出的HBeAb和HBcAb的阳性符合率分别为97%和99%。结论化学发光法敏感度高、重复性好。ELISA法出现HBeAb和HBcAb双阳性者建议用化学发光免疫分析进行HBsAg和HBsAb复检,以区分患者处于HBV感染期或康复期,帮助临床诊断。

HBV DNA免提取核酸荧光定量PCR检测法应用评价

目的评价乙型肝炎病毒核酸免提取荧光定量PCR方法(一步法)对不同病毒载量时检测性能。方法评价试剂为圣湘公司HBV DNA荧光定量PCR检测免提取试剂盒,对照试剂为匹基公司、科发公司、达安公司3家煮沸核酸提取法试剂盒。将4种试剂盒按各自要求对配套的不同浓度标准品、阴性、临界值的反应曲线考核其线性和灵敏度。另检测1份已知浓度质控品、5份未知浓度样本血清考核其准确性、可比较性。检测仪器为瑞士罗氏公司Light Cycler荧光定量仪。结果一步法、匹基公司、科发公司、达安公司4家标准品浓度相关性R2分别为0.992、0.998、0.999及0.963,线性均满意。4个不同浓度标准品扩增曲线图形:一步法曲线比其他3家更为光滑,呈间距均匀的S形抛物线,2次结果重复曲线更趋重迭。对已知定值为(1.5E+06)IU/mL的质控品检测:一步法、匹基公司、科发公司、达安公司相应结果为(1.16E+06)、(5.27E+05)、(4.32E+05)及(4.90E+06)IU/mL,一步法最接近靶值。5份血清结果显示:4种试剂盒除P公司对2号样本结果为低于检出下限外,其他对1号、2号、3号、5号检出结果均与其他3家接近,可为临床接受。4号样本为一个低值临界范围,出现低于报告限、低值及临界追踪值3种结果现象。结论 4家HBV DNA荧光定量PCR检测检测试剂线性结果均满意,对中、高浓度样本检测结果较接近,但在低浓度临界范围检测报告可能会对临床诊断带来误导,需追踪复查。HBV PCR一步法检测技术免除了核酸高温裂解提取步骤,操作简便,人为误差减少,性能稳定,有利提高检测灵敏度、结果准确性。

TRFIA技术定量检测HBV-M两对半的临床应用分析

目的探讨时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术在定量检测乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)感染者的血清学标志物(HBV-M)乙肝两对半的临床应用价值。方法采用WallacVICTOR2-1420型多标记分析仪对539份乙肝患者血清标本进行乙肝两对半定量测定。为方便表述,以数字序号1、2、3、4、5分别代表乙肝两对半中的HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb,并以检出阳性项目的序号为该模式的代码。结果本文病例乙肝两对半的标记模式根据临床应用的实际可分为大三阳(135)组,小三阳(145)组,其他阳性的少见模式组和恢复期组,全部病例共检出18种模式。其中"135"组和"145"组占全部病例的48.40%;恢复期组以"25"和"245"模式为主,占全部病例的29.9%。结论血清HBV标志物乙肝两对半的表现模式较为复杂,除了检验误差外,产生少见模式的检出主要是TRFIA这种灵敏度高,特异性强和重复性好的技术,可以检出血清低水平阳性的HBsAg、HbsAb,有助于乙肝患者疾病的早期诊断、避免漏诊、临床合理用药、动态综合评价疗效,提供可靠的依据,值得在临床推广。

HBV-M定量检测与HBV-DNA含量水平关系的初步探讨

目的 研究乙型肝炎病毒标志物定量检测结果与其HBV -DNA含量的临床关系。方法 采用时间分辨免疫定量和荧光定量 -PCR技术 ,对HBV -M和HBV -DNA含量进行检测。结果 在HBsAg/HBeAg/HBcAb ,HB sAg/HBeAb/HBcAb ,HBeAg/IC及单纯HBcAb阳性的四个组别中 ,HBV -DNA阳性率分别是 97 17%、30 5 6 %、10 0 %和 2 5 % ;在HBsAg ,HBeAg ,HBeAb ,HBcAb定量检测高、低值两组HBV -DNA含量对比中 ,HBV -DNA阳性率分别为76 92 %、5 8 14 % ;10 0 %、97 2 6 % ;2 0 0 0 %、11 4 2 % ;6 4 6 2 %、2 7 6 3%。结论 HBV -DNA比HBV -M更能及时准确反映乙型肝炎病毒感染者的病程情况。

电化学发光法和酶联免疫吸附法对HBSAg和HBSAb测试结果的评价

目的:探讨电化学发光法(ECLIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)在乙型肝炎病毒血清标志物检测中的差异。方法:分别使用ECLIA和ELISA法对2013年1-12月广州医学院荔湾医院收集的标本进行HBV-M检测,分析两种检测方法的差异及临床应用价值。结果:两种检测方法测定HBs Ag的阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05),有较好的一致性(Ka Pp=0.96)。ELISA法测定HBs Ab的S/CO比值>11.0者156例,其中152例ECLIA法测定值>100 mlU/mL,一致性达97.4%。结论:ELISA法测定HBs Ag与ECllA法测定结果一致;与ECLIA相比,ELISA测定的HBs Ab具有肯定的免疫保护作用的S/CO比值>11.0;不具有免疫保护作用的S/CO比值<5。

国产放射免疫试剂与Abbott放射免疫试剂检测乙型肝炎病毒感染指征的比较

本文报告了国产乙型肝炎病毒(HBV)RIA和Abbott RIA诊断试剂盒检测质量的比较研究。表明两试剂滴定HBsAg、抗-HBs、抗-HBc阳性血清的敏感性相似,抗-HBs mIU/ml定量检测结果相符。证明国产RIA试剂质量是可靠的。但是,国产试剂S/N值曲线的陡度和标本的阳性检出率较Abbott试剂为高,可能与试剂出厂后周转期短有关。适当提高国产试剂阳性判定标准后,与Abbott试剂的检测符合率可达90％以上。

两种国产化学发光系统检测HBsAg和HBeAg的效果分析

目的探讨两种国产化学发光免疫分析系统用于检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)的性能与主流进口检测系统的符合性,为国产系统的使用提供依据。方法用一种主流进口系统(美国雅培公司,ARCHITECT SYSTEM i2000SR,简称S1)分别检测HBsAg(n=492)和HBeAg(n=464)为阳性或阴性的标本,使用两种国产系统(迈克生物,Maccura i3000,简称S2;迈瑞生物,Mindray CL6000i,简称S3)对上述标本进行复测,并分析几种系统间定量和定性结果的符合性。结果(1)S2、S3分别与S1相比,对HBsAg的定性结果差异均有统计学意义(均P=0.012);S2、S3对HBsAg的定性结果与S1的定性总符合率均为97.76%、阳性符合率均为96.58%、阴性符合率均为99.50%,定性结果一致检验均为Kappa值=0.954(P<0.001);15例定性结果不符的标本,均来自S1 HBsAg<1.00 IU/mL的标本;于HBsAg各定量区间,S2和S3检测的HBsAg定量水平与S1的相对偏倚均在-50%左右。(2)S3检测HBeAg的定性结果与S1检测结果的总体符合率、阳性符合率、阴性符合率分别为96.77%、99.20%、93.93%,一致性检验为Kappa值=0.936(P<0.001);S2检测HBeAg的定性结果与S1检测结果的总体符合率、阳性符合率、阴性符合率分别为97.84%、98.40%、97.20%,Kappa值=0.957(P<0.001);S3检测HBeAg的定性结果与S1差异有统计学意义(P=0.007);S2检测HBeAg的定性结果与S1差异无统计学意义(P=0.754)。结论两种国产化学发光免疫分析系统检测HBsAg和HBeAg的结果与主流进口系统具有较高的一致性。

MEIA检测低水平血清HBsAg及结果分析

目的 了解低水平血清乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的人群分布及其相关乙肝病毒血清标志物模式特征。方法 微粒子酶免疫分析技术（microparticle enzyme immunoassay，MEIA）测定8089例非肝炎病区住院患者血清HBsAg及其表面抗体（抗-HBs）、乙肝病毒e抗原及其e抗体（HBeAg、抗-HBe）和乙肝病毒核心抗体（抗-HBc）；根据定值参比血清和样本的HBsAg荧光速率值／阴性对照荧光速率值之比值（S/N值），并结合中和试验结果，确定浓度在5μg/L以下的HBsAg阳性例数，并分析相关乙肝病毒（HBV）血清标志物模式。结果 共检出HBsAg阳性816例，HBsAg浓度在5μg／L以下的有189例，占总数的2．34％，占HBsAg阳性人群的23．16％，其中，HBsAg浓度在1μg/L以下的有84例（44．04％）；1～2μg／L的有33例（17．5％）；2～5μg／L的有72例（38．10％）。对上述低水平HBsAg人群的5项HBV血清标志物检测获得8种模式，以“HBsAg、抗-HBc、抗-HBe阳性”，“HBsAg和抗-HBs阴性”模式为主（74．60％）；累计HB—sAg和抗-HBc同时阳性者占94．17％；HBsAg与HBs同时阳性只出现在HBsAg 1μg／L以下人群中（6．45％）。结论 低水平血清HBsAg人群不容忽视，提高HBsAg检测灵敏度有重要意义；同时检测相关HBV血清标志物，对于确定上述人群有帮助。

国产化学发光法检测HBsAg弱反应性样本的应用价值

目的探讨国产化学发光法在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)弱反应性样本检测中的临床应用价值。方法对202例电化学发光法(ECLIA)检出的HBsAg弱反应性样本采用国产化学发光法进行平行检测,将129例国产化学发光法检出的HBsAg弱反应性样本进行中和确证试验,并对结果进行分析。结果国产化学发光法与ECLIA法检测弱反应性HBsAg结果的总符合率为83.7%,其中1.0~<2.0、2.0~<3.0、3.0~<4.0、4.0~<5.0、5.0~<10.0和10.0~<15.0 COI水平的符合率分别为56.0%、76.9%、83.3%、93.8%、97.7%和100.0%。国产化学发光法弱反应性HBsAg经确证试验确认总阳性率为98.4%,其中0.05~<0.10、0.10~<0.20、0.20~<0.30、0.30~<0.40和0.40~<0.50 IU/mL的确认阳性率分别为96.4%、97.6%、100.0%和100.0%、100.0%。结论国产化学发光法检测灵敏度低于ELICA法,检测值小于0.20 IU/mL的弱反应性样本存在假阳性情况,需进一步进行确认。

不同技术应用于乙肝病毒血清学检验中的价值研究

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光酶免疫分析法(CLIA)检测技术应用于乙型肝炎(以下简称“乙肝”)病毒血清学检验中的价值。方法选取2022年1—12月六盘水市人民医院收治的高度怀疑乙肝感染患者5836例纳入研究,所有患者均接受实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)、ELISA、CLIA检测。比较两种检测技术与qPCR检测的检测结果、诊断效能、对乙肝病毒标志物阳性检出率。结果5836例高度怀疑乙肝感染患者经qPCR检测后,确诊为阳性者3033例、阴性2803例。经CLIA检测诊断为阳性2903例、阴性2933例,其中仅有2790例确诊为乙肝感染患者;经ELISA检测诊断为阳性2921例、阴性2915例,其中仅有2731例确诊为乙肝感染患者。与ELISA相比,CLIA检查的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值及对乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)的阳性检出率均较高,差异有统计学意义(P<0.05),两种检测方式乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝e抗体(HBeAb)、乙肝核心抗体(HBcAb)的阳性检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论相较于ELISA,CLIA应用于乙肝病毒血清学检验中的效能更佳,且能够有效提升HBsAg、HBeAg阳性检出率,诊断价值更高。