实时荧光定量RT-PCR在麻疹和风疹病毒检测中的应用

目的探讨实时荧光定量RT-PCR在麻疹和风疹病毒检测中的应用效果。方法选取2021年12月—2022年12月盘锦市疾病预防控制中心接收的麻疹与风疹患者76例为研究对象,入院后所有研究对象均接受酶联免疫吸附试验法和实时荧光定量RT-PCR法检测,以检测患者恢复期血免疫球蛋白G(IgG)抗体水平(相对急性期是否4倍升高)为麻疹诊断金标准,对比两种检测方法的检测准确率、不同检测时间的阳性检出率。结果实时荧光定量RT-PCR法总诊断准确率为97.37%;酶联免疫吸附试验法中总诊断准确率为88.16%,比较两种方法的诊断准确率差异有统计学意义(P<0.05)。第1d,实时荧光定量RT-PCR法阳性检出率高于酶联免疫吸附试验法,差异有统计学意义(P<0.05)。第5d,实时荧光定量RT-PCR法阳性检出率低于酶联免疫吸附试验法,差异有统计学意义(P<0.05)。第2d、第3d、第4d实时荧光定量RT-PCR法和酶联免疫吸附试验法阳性检出率对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论实时荧光定量RT-PCR对麻疹、风疹检测有一定诊断作用,可以有效提高检测准确率,同时操作简单,灵敏性较高,值得在麻疹与风疹病毒检测中推广。

RT-PCR和酶切方法区分猪瘟疫苗毒与野毒的研究

建立了套式RT-PCR与限制性内切酶酶切相结合的区别猪瘟兔化弱毒疫苗株与猪瘟病毒田间分离株的诊断方法。通过对猪瘟兔化弱毒疫苗株与猪瘟石门株E2基因主要抗原编码区序列进行限制性内切酶酶切位点分析,分别找出猪瘟兔化弱毒疫苗株与猪瘟石门株各自独有的限制性内切酶酶切位点,结果二者分别有10和16个独有的限制性内切酶的酶切位点;分别对17株猪瘟病毒E2基因主要抗原编码区序列进行这26个限制性内切酶酶切位点分析,结果表明有3个限制性内切酶(HgaI、Hin8I及Hsp92I)的酶切位点在HCLV株序列是独有的;利用HgaI限制性内切酶分别对HCLV、HCVSM及5株不同基因群的猪瘟病毒田间分离株进行酶切鉴定,结果只有HCLV株能够被HgaI酶切成2个片段,而其它的毒株则不能被切开。同时测定了套式RT—PCR方法的敏感性及特异性,结果其敏感性可达到0．2MLD,而对BDV以及BVDV均不能特异扩增。本方法的建立无疑对猪瘟在我国的控制和消灭具有重要的意义。

RT-PCR与兔体交叉试验检测猪瘟病毒感染的相关性研究

对猪瘟RT PCR诊断方法与兔体交叉试验诊断方法的相关性进行了研究。通过计算机软件设计了猪瘟病毒E2基因保守区的 1对引物 ,建立了猪瘟病毒RT PCR检测方法 ,同时应用兔体交叉试验进行对比 ,对 7份临床送检病例进行了检测。结果表明 ,二者的符合率为 10 0 % ,但RT PCR可大大降低检测所用的时间 ,更便于猪瘟的快速诊断。

RT-PCR对新城疫病毒强弱毒株的快速鉴定

根据新城疫病毒(NDV)F蛋白基因结构的特点及强、弱毒株F蛋白基因裂解位点的序列差异设计了4条引物,并将其配成3对引物,采用RT-PCR试验对来自鸡和七彩山鸡的9株NDV野毒分离株,F48E8和LaSota 2株标准强、弱毒株进行了快速鉴定;并将RT-PCR鉴定结果与NDV常规致病性试验结果进行了比较。结果表明,RT-PCR试验能够快速将11个参试毒株区分为强毒株和弱毒株,其结果与传统致病性试验测定结果基本一致,该方法可以用于ND的快速诊断和强、弱毒株的快速鉴定。

猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒A多重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为对引起腹泻症状的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒A(PRoVA) 3种病毒同时快速地鉴别检测,本研究对GenBank中登录的TGEV的S基因、PEDV的S基因、PRo VA的NSP基因进行序列分析,分别设计了针对3种病毒的特异性引物和用3种荧光基团标记的核酸探针,通过条件优化建立了针对这3种病毒的多重荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能够特异性检测PEDV、TGEV和PRo VA,而与其它病原无交叉反应;对TGEV、PEDV和PRo VA的最低检测量分别为1.12拷贝/μL、39拷贝/μL和25拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于5%;该方法与商品化的试剂盒检测结果符合率达100%。该方法快速、敏感,检测结果准确可靠,为猪病毒性腹泻疾病的流行病学调查和分子生物学快速诊断奠定了基础。

RT-PCR法与血凝抑制法鉴定流感病毒的比较

目的比较逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)与血凝抑制法在流感病毒鉴定中的优劣,以期建立能快速、特异地从临床标本中检测并鉴定流感病毒的新方法。方法用常规细胞培养法增殖病毒后,分别用RT-PCR反应法和常规血凝抑制法进行流感病毒鉴定。结果在13份发生细胞病理变化的标本中RT-PCR阳性标本为9份,其中甲型7份(6份甲3亚型、l份甲l亚型),乙型2份;而用血凝抑制法鉴定阳性标本仅6份。结论RT-PCR法快速、特异、灵敏,在流感病毒鉴定中具有较大的应用价值。

多重套式RT-PCR检测患者凝血块中登革病毒RNA(英文)

目的建立简便、灵敏、适合于全部血清型登革病毒核酸检测的多重套式RT-PCR体系,检测临床样品中登革病毒RNA,作为实验室辅助诊断的依据。方法利用登革病毒标准株核酸,建立多重RT-PCR检测方法。提取患者凝血块总RNA,分别用一步法RT-PCR及多重套式RT-PCR检测。结果通过对检测体系进行优化,多重RT-PCR能够同时检测4种血清型登革病毒核酸。采用多重套式RT-PCR方法,从8例登革热患者凝血块中有4例检测到病毒RNA,而其它核酸检测方法仅检出1例阳性。结论多重套式RT-PCR的方法能够从临床凝血块样品中检测到登革病毒核酸,并同时进行血清学分型,简化了登革病毒核酸检测步骤,有利于对临床样品开展病毒核酸检测。

H9N2亚型禽流感病毒RT-PCR鉴定方法的应用

为了对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)进行快速鉴定,试验根据H9N2亚型禽流感病毒的HA和NA基因分别设计引物,初步建立H9N2亚型禽流感病毒的RT-PCR检测方法;同时为了检验该检测方法的可靠性,对送检的264份疑似禽流感病鸡的病料进行处理,接种SPF鸡胚,分别采用RTPCR和血清学试验两种方法检测收集的尿囊液。结果表明:两种方法均检出有14个样品为H9N2亚型禽流感病毒阳性,符合率达100%。说明建立的RT-PCR检测方法可用于鉴定H9N2亚型禽流感病毒。

RT-PCR与兔体交叉试验检测猪瘟病毒比较研究

应用RT-PCR技术对扩增出500bp的片断进行测序,利用DNA Star软件与推导的氨基酸序列进行同源性比较分析,结果表明,同源性均为97.3%,证明为猪瘟病毒。同时与兔体交叉试验进行了比较。结果表明,2种方法的符合率为100%。

Real-time TaqMan RT-PCR快速检测犬瘟热病毒方法的研究

按照犬瘟热(CDV)N基因序列,设计合成了特异性引物和探针,经各反应条件的优化,建立了Real-time荧光定量RT-PCR技术,对细胞培养物、肝脏、肺脏、脑、脾脏、淋巴结以及鼻腔拭子等组织病料中的CDV进行了特异性检测和敏感性试验。同时,利用建立的Real-time荧光定量RT-PCR方法与常规RT-PCR以及韩国BIOINDIST生产的BIT RAPID CDV检测试剂盒对57份临床样品进行了检测。结果:用20pmol/mL的引物浓度各1uL和20pmol/mL的探针浓度0．3uL,获得的荧光信号最强,曲线平滑。敏感性高,可检测到1．24×10—3ng/uL的病毒RNA;特异性强,与NDV、AIV、NiPV等RNA病毒不发生交叉反应。试验重复性的变异系数(CV)分别为2．3%、2．5%和4．2%;与常规RT-PCR和BIOINDIST生产的BIT RAPID CDV检测试剂盒相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量,并可同时检测大量样品等优点。

基于RT-LAB的柔性直流配电保护系统的硬件在环测试

基于PSCAD/EMTDC等纯数字仿真软件对柔性直流配电保护系统进行的研究不能真实模拟保护装置的响应特性、也不便于保护方案的开发和扩展。鉴于此,通过实时数字仿真器RT-LAB以及保护装置的无缝连接,在国内首次搭建出基于深圳典型四端柔性直流配电网的硬件在环测试平台。该平台采用独有的e HS技术解决了实时模拟高频直流变压器的难题,可显著提升测试的时效性和实用性,具有较高的置信度。利用该平台对柔性直流配电网的三种典型故障进行了硬件在环故障测试,验证了所配置保护策略的性能。结果表明:所配置的保护方案功能全、性能好,在故障时动作准确可靠,无死区;实验结果可以直接应用到一次动模实验中,可为柔性直流配电工程的建设研究提供参考。

基于RT-lab的电池硬件在环模拟器研究

随着混合动力汽车和纯电动汽车的发展,能量存储装置对汽车的安全性和可靠性的影响越来越受到重视。电池管理系统(BMS)是提高车辆安全,延长电池寿命,减少能量损耗的关键。如何对BMS的软件和硬件进行开发和验证变得非常重要。使用实际的电池进行相关的研究,会带来极大的不便之处,如实验耗时长、可重复性差、故障注入危险以及难以复现等;而单纯的软件模型不具备实时性也没有硬件的连接,可验证的功能非常有限。为了克服这些困难,使用RT-lab平台针对BMS构建了一个硬件在环测试平台,具有很好的可调性、实时性、灵活性和普适性,可以全面地对BMS进行测试,节省成本和时间。

犬瘟热病毒RT-PCR检测方法的建立与临床应用

犬瘟热(CD)发病率近年来在我国呈明显上升趋势,对早期CD诊断方法的发展和完善,有利于指导临床及时治疗,对于控制CD的蔓延有重要意义。根据GenBank中CDV核衣壳蛋白(N)基因序列,设计合成一对特异性寡聚核苷酸引物,提取CDV疫苗株的总RNA进行反转录和PCR,建立RT-PCR检测方法,并应用于临床病例的诊断,同时和CDV抗原快速诊断试纸进行比较。结果显示:RT-PCR有很好的敏感性和特异性,适合对CDV进行早期快速诊断和流行病学调查。

KH-RT模型对高压喷雾特性仿真影响的研究

用FIRE软件中的KH-RT二次油滴破碎模型对高压共轨喷油器在不同喷射压力和背压下的燃油喷雾过程进行了数值模拟,建立了喷雾闪光测试台架,对油束宏观特性及其喷油规律进行了测试。通过将喷雾贯穿距的计算值与试验值进行对比,对模型中两个主要参数C2和C4对油束喷雾特性的影响进行了研究。研究结果表明,C2对喷雾仿真结果影响较大,在不同的喷射背压下有不同的设置,与喷射压力关系不大,并总结出了C2与喷射环境密度的关系式,C4值对计算结果的影响较弱。通过本研究,可提高CFD软件预测高压燃油喷雾过程的精度。

RT-Thread及Cortex-M4在智能气密性检测仪上的应用

通过对现有气密性检测仪进行分析,结合其优缺点,设计出一种基于RT-Thread及Cortex-M4处理器的智能化方案。使用BP神经网络建立各个因素之间的模型,处理检测数据,弥补了直压法在精度上的不足;使用Cortex-M4作为硬件核心,完成气路、数据采集及输出等模块的硬件设计;移植RT-Thread作为软件平台,使用多线程技术完成系统应用软件的开发。该设计方案和数据处理算法使该设计具有智能化、稳定可靠、精度高、人机接口良好、成本低等特点。

1553B总线RT有效性测试方法研究

1553B总线是美国制定的一种串行总线标准,具有较高的可靠性和安全性,因而在航空、航天、军事等领域得到了广泛的应用;在1553B多路传输数据总线网络中,要想保证1553B网络正确可靠的通讯,必须保证各个远程终端系统能够满足MIL-STD-1553B规定的各项功能、性能以及协议等要求,所以对远程终端(RT)进行有效性测试变得非常重要;在充分研究1553B通讯协议的分层结构基础上,提出了1553B远程终端系统测试方案,并指出在通用1553B接口板平台上该方案的实现方法,按照该方法对RT进行测试时,可以正确测试出被测RT是否满足1553B协议要求。

体外溶栓试验确定急性脑梗死治疗中rt-PA用量的研究

目的 应用体外溶栓试验确定急性脑梗死重组组织型纤溶酶原激活剂（rt-PA）溶栓剂量,了解个体化rt-PA治疗的有效性及安全性。方法 对发病6h内的急性脑梗死（ACI）患者,根据体外溶栓试验中处于溶栓状态的rt-PA剂量作为个体化溶栓治疗剂量,进行溶栓治疗,监测患者溶栓前及溶栓后24h自然状态体外血栓长度、湿质量,并于溶栓前和溶栓后2h、24h、10d进行临床神经功能缺损评分,监测并发症,并与非溶栓组比较。结果 不同患者应用rt-PA溶栓治疗剂量不同,介于0.6~0.8mg;不同浓度rt-PA状态下体外血栓长度不同,随浓度增加呈逐渐缩短趋势（P〈0.05）;溶栓后24h体外血栓长度、湿质量与溶栓前相比均降低（P〈0.05）;2组患者治疗前NIHSS评分差异无统计学意义（P〉0.05）,治疗后NIHSS评分均呈下降趋势,溶栓组溶栓后各时间点NIHSS评分均低于非溶栓组（P〈0.05）;全部病例均无出血并发症发生。结论 应用体外溶栓试验确定rt-PA用量行急性脑梗死个体化溶栓治疗安全有效。

猪瘟病毒RT-LAMP检测方法的建立及初步应用

为建立猪瘟病毒(CSFV)可视化逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测方法,从GenBank下载不同基因亚型CSFV分离株全基因序列,通过引物设计,RT-LAMP反应体系优化,建立了检测CSFV的RT-LAMP方法。该方法特异性和敏感性好,对CSFVcDNA最低检测限量为1.0×10^-7ng/μL,不能检测到非目标病毒核酸。对临床送检的100份疑似CSFV感染样品进行检测,检出13份CSFV阳性,其中10份和RT-PCR检测结果一致,另外3份的RT-PCR检测结果呈阴性,同时对比发现RT-LAMP方法的敏感性比常规RT-PCR方法高100倍。本研究为CSFV检测提供了可供选择的方法。

RT-LAB在通用仿真与测试设备中的应用

介绍了RT-LAB软件及其特点,并利用其API接口函数设计了RT_STP仿真与测试平台,该平台集可视化建模、编译处理、试验控制、实时监控与数据分析等功能于一体,同时详细叙述了使用RT_STP平台开发RT-LAB应用的流程与方法。最后,将这种设计方法应用在通用仿真与测试设备的研制中,为先进飞控系统试验验证设计了一套完善的开环测试与闭环仿真、验收试验的通用试验环境。实践表明,基于RT-LAB的应用系统开发方便,实时性好,能够进行复杂的并行运算,而且具有通用性和型号无关性。

ELISA法抗-HCV阳性献血者分片段试剂和RT-PCR法检测结果分析

目的观察无偿献血者标本中ELISA法抗-HCV检测的假阳性问题以及ELISA法对HCV不同抗原片段的反应性。方法留取本站无偿献血者中抗-HCV阳性(两种试剂检测阳性)样本56份和可疑样本(单试剂检测阳性)90份,分别使用抗-HCV分片段试剂和RT-PCR试剂进行检测,对使用分片段抗-HCV试剂检测单片段和两个以上片段(≥2个片段)阳性的样本再进行RT-PCR的确证检测。结果56份抗-HCV阳性的样本中分片段试剂两个片段以上阳性45份(80.4%),RT-PCR阳性19份(42.2%);单试剂抗-HCV检测阳性样本90份中分片段抗-HCV双片段以上阳性12份(13.3%),RT-PCR阳性0份(0%);单试剂抗-HCV检测阳性样本90份中分片段抗-HCV单片段阳性20份(22.2%),RT-PCR阳性1份(1.1%);154份阴性样本分片段抗-HCV试剂单片段阳性3份,RT-PCR检测全部阴性。结论目前采用两种抗-HCV试剂对献血者进行抗-HCV筛选,能够保证血液安全;抗-HCV试剂检测的假阳性率偏高,导致一些献血者的检测结果被误判;单试剂抗-HCV检测存在一定的漏检率,对献血者进行抗-HCV进行检测时应选择恰当的配伍试剂。