Study on Processing Technology for Aconiti Kusnezoffii Radix by Bean Curd

[Objectives] The aim was to explore the best parameters for processing Aconiti Kusnezoffii Radix by bean curd. [Methods] Orthogonal test( L_(16)(4~3)) was designed to investigate the optimal soaking time,decocting time and bean curd proportion for processing Aconiti Kusnezoffii Radix by bean curd. The contents of monoester alkaloids and diester-alkaloids were measured as the evaluation indexes. [Results]The contents of monoester alkaloids were 0. 11%,0. 07%,0. 062% and 0. 048% respectively under the four levels of soaking time,were0. 081%,0. 066%,0. 074% and 0. 067% respectively under the four levels of decocting time,and were 0. 070%,0. 072%,0. 080% and0. 073% respectively under the four levels of bean curd proportion. The content of diester-alkaloids was all below 0. 034%. The influence intensity of the three factors on the content of monoester alkaloids ranked as soaking time > decocting time > bean curd proportion. Under any of the above conditions,the content of diester-alkaloids was below the limit of Chinese Pharmacopoeia. The content of diester-alkaloids was reduced obviously with the increased use of bean curd. [Conclusions] The optimum processing conditions for Aconiti Kusnezoffii Radix were A_3B_3C_2,i. e.,soaking time of 6 d,decocting time of 5 h and bean curd proportion of 25%.

基于全叶绿体基因组分析的栽培黄草乌基源研究

为探究云南伤科用毒性药材黄草乌(Radix Aconitum Vilmoriniani)栽培品质量的影响因素,该研究利用Illumina HiSeq 4000高通量测序平台对来自10个不同栽培基地黄草乌样品的叶绿体基因组展开测序,经过对测序数据的组装、注释,利用生物信息学工具对其叶绿体基因组特征展开分析并构建系统发育树。结果表明:(1)10个栽培品的叶绿体基因组全长155 744~155 937 bp,大单拷贝区和小单拷贝区分别为86 363~86 548 bp、16 921~17 007 bp,反向重复区大小为26 170~26 236 bp,均注释到131个基因。(2)序列鉴定出60~73个SSR位点,基因组比较分析发现,10个栽培品叶绿体基因组显示出一定的扩张,并在其中发现了trnK-UUU-trnQ-UUG等变异热点区域。(3)基于2个数据集的系统发育分析均表明,JS-1-4、QJ-1-2、LX-1-3、LJ-3-2与黄草乌(Aconitum vilmorinianum)亲缘关系较近;LQ-1-3、GJ-1-3、NL-1-3、DC-2-2和滇南草乌(A.austroyunnanense)关系较近;基于全叶绿体基因组序列构建的系统进化树中LJ-4-3与马耳山乌头(A.delavayi)亲缘关系近,LJ-1-2与宾川乌头(A.duclouxii)的亲缘关系较近;而基于蛋白质编码基因序列构建的系统进化树中,LJ-4-3与西南乌头(A.episcopale)亲缘关系近,LJ-1-2则与苍山乌头(A.contortum)关系较近。综上认为,黄草乌的栽培种植存在种源混杂的客观问题,主要有黄草乌和滇南草乌两种植物,个别栽培基地还掺混了乌头属(Aconitum)的其他物种,这可能是黄草乌栽培品质量不稳定的因素之一。

生附片与炮天雄煎煮过程中生物碱溶出行为研究

目的 探讨生附片和炮天雄在不同时间煎煮过程中酯型生物碱的含量动态变化规律。方法 采用Agilent Eclipse XDB C_(18)(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,流动相C为乙腈-四氢呋喃混合溶液,体积比为25∶15,流动相D为0.1 mol·L^(-1)醋酸铵溶液(每100 mL加0.05 mL冰醋酸),梯度洗脱,检测6种单、双酯型生物碱的含量;采用滴定法测定总生物碱的含量。结果 两种药材中双酯型生物碱均在2 h内分解完全,生附片与炮天雄残渣中单酯型生物碱含量呈递减趋势。生附片可检测出3种单酯型生物碱与2种双酯型生物碱,炮天雄可检测出2种单酯型生物碱与1种双酯型生物碱,生附片中双酯型生物碱显著高于炮天雄水煎液。经过24 h煎煮,生附片与炮天雄粉末总生物碱溶出率分别为44.38%和52.24%。结论 附子与炮天雄煎煮后均能降低有毒成分含量,最佳煎煮时间为2 h。

附子、川乌、四逆汤表观药动学参数的测定

本文以LD50补量法测定中药附子、川乌及四逆汤的体存量,从体存量的经时性变化判断药物在体内的衰减模式并计算表观药动学参数。结果所测药物均符合二室动力学模型,消除相半衰期分别为17.0h.12.1h 及5.8h。

草乌提取物乌头碱和新乌头碱的透皮速率测定

目的:测定草乌提取物中乌头碱、新乌头碱的透皮速率。方法:用改良Franz扩散池法收集草乌提取物的透皮接受液,用高效液相色谱法测定其中乌头碱、新乌头碱的透皮速率。结果:在促透剂氮酮和丙二醇各为4%的条件下,浓度为600mg/ml的草乌提取物中乌头碱、新乌头碱24h的累积渗透量分别为165.819和487.747μg/cm2;透皮速率常数分别为18.391和78.805μg·cm-2·h-1。结论:草乌提取物中乌头碱、新乌头碱在氮酮和丙二醇的促透作用下能较好地透过大鼠皮肤,透皮吸收过程符合Higuchi方程。

草乌中乌头类生物碱提取方法比较研究

目的优化草乌中乌头类生物碱提取方法,比较草乌、附子生品及市售炮制品中乌头类生物碱的含量,为相关中药中生物碱的测定和临床应用提供参考。方法分别用7种提取方法提取附子中乌头类生物碱,比较各方法对3种双酯型生物碱的提取效率,并测定乌头类生药及其炮制品中乌头类生物碱含量。结果10%氨水乙醚冷浸法对3种双酯型生物碱的提取效率最高。炮制品中的乌头类生物碱含量明显低于生药,各种炮制品中乌头类生物碱的含量差别也比较大。结论采用10%氨水乙醚冷浸法,高效液相色谱-紫外光谱(HPLC-UV)法对药材中乌头类生物碱进行提取和含量测定,能真实反映药材中药效和毒性成分。不同的炮制品中各生物碱含量差别较大,临床应用应有差别。

乌头及其炮制品中含糖量的比较分析

用硫酸-苯酚法和硫酸-变色酸法测定了乌头及其炮制品以及它们的粗多糖的含糖量。结果表明:炮制过程中乌头各部分提取液的含糖量均有不同程度的下降。两种方法测得的结果基本接近。

醋的种类对炮制草乌生物碱类成分的影响

目的:探讨醋的种类对醋制草乌生物碱类成分的影响,为筛选炮制辅料用醋提供依据。方法:采用不同类型的米醋炮制草乌,HPLC法测定炮制品中3种双酯型生物碱和3种单酯型生物碱的含量,比较采用不同类型的醋制备的草乌炮制品中生物碱的含量差异。结果:各炮制品中双酯型生物碱的含量:生草乌>食用乙酸制草乌>工业乙酸制草乌>陈醋制草乌≈龙门米醋制草乌>玫瑰醋制草乌>药典法制草乌;单酯型生物碱的含量:药典法制草乌>食用乙酸制草乌>龙门米醋制草乌≈工业乙酸制草乌>陈醋制草乌≈玫瑰醋制草乌>生草乌。结论:醋制草乌可以达到炮制减毒的效果,食用醋比乙酸的减毒效果更佳。

附子煎煮与配伍应用中乌头类生物碱含量的变化及意义

目的:对比研究水浴和微波加热条件下附子中乌头类生物碱的水解规律,检测与不同中药配伍煎煮后附子中乌头类生物碱的含量变化。方法:分别以水煎煮和微波加热的方法提取附子药材,采用高效液相色谱法(HPLC)分别对其中的3种双酯型生物碱及其水解产物进行含量测定;同时检测与不同中药配伍煎煮后,附子中乌头类生物碱减少程度的差异。结果:附子水煎煮30min后,中乌头碱和次乌头碱的含量分别变为峰值的10.5%和41.9%,乌头碱完全检测不到;附子微波加热150s后中乌头碱、乌头碱和次乌头碱含量分别为峰值的59.2%、41.4%和86.6%。与生附子单煎煮比较,生附子与大黄、干姜或甘草共煎后,乌头类生物碱总含量均明显下降,分别降至附子单煎煮时的52.8%、66.2%和53.4%;与人参或白芍共煎煮后略有下降,分别为附子单煎煮时的79.5%和83.7%。结论:附子中乌头类生物碱在水煎煮和微波加热过程中有不同的水解规律;生附子与大黄、干姜、甘草、人参或白芍共煎后乌头类生物碱含量均有下降。

附子6种生物碱在比格犬体内药动学研究

目的:研究口服附子后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱在比格犬体内的药动学特征。方法:口服给予比格犬附子煎煮液后,采用固相萃取法处理血浆样品,应用UPLC-MS/MS方法对乌头类生物碱进行定量,采用ESI正离子模式,多反应监测方式检测,色谱柱为WATERS ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以甲醇-0.2%甲酸水溶液为流动相,以0.25 mL/min的流速进行梯度洗脱;内标法定量,检测乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱在各时间点内的血药浓度。采用DAS 2.1药代动力学程序计算主要药动学参数。结果:乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱的药动学曲线经拟合均符合口服给药的一室模型。结论:本实验同时对附子所含6种生物碱进行药动学研究,可以很好应用与监测口服附子后有效浓度的变化情况,从而达到增效减毒的作用,为附子的临床治疗及安全应用提供参考依据。

RP-HPLC法同时测定中药关白附中关附甲素、关附壬素和关附辛素含量

目的:建立同时测定关白附中3种二萜生物碱———关附甲素、关附壬素和关附辛素的RP-HPLC分析方法。方法:色谱柱:Zorbax Eclipse XDB-C8柱(2.1 mm×150 mm,5μm),流动相:庚烷磺酸钠缓冲液(加入0.2%三乙胺,磷酸调至pH 3)-乙腈(梯度洗脱),柱温:25℃,流速:0.2 mL.min-1,检测波长:205 nm。结果:3种生物碱的相邻色谱峰分离度大于1.5,关附壬素、关附甲素和关附辛素质量浓度分别在0.100～0.502、0.100～0.498和0.100～0.500 g.L-1的范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),其平均加样回收率(n=9)分别为97.29%、101.46%、102.33%。结论:本法分离效果和重复性好,简便易行,可用于关白附药材中3种生物碱的同时定量分析及药材质量控制。

UPLC法同时测定草乌中6种单酯和双酯型生物碱

目的：建立草乌中单酯及双酯型生物碱成分的超高效液相色谱定量方法。方法：草乌粉末用氨试液浸润2 h后,以异丙醇-醋酸乙酯（1∶1）混合液浸泡12 h,超声处理30 min,提取液蒸干后溶于乙腈中,经微孔滤膜滤过后进行UPLC分析。UPLC分析采用BEH shield RP18（2.1 mm×50 mm,1.7μm）色谱柱,以乙腈（0.2%三乙胺）-水为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 m L·min-1,检测波长为235 nm,柱温35℃。结果：草乌中6种单酯型和双酯型生物碱分离良好,各成分含量与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系（r〉0.999）,精密度高,重现性好,平均加样回收率为98.64%~100.32%,6 min完成1次进样测定,工作效率高。结论：建立UPLC同时测定草乌中6种单酯型和双酯型生物碱含量的方法,该方法稳定准确,简便快速,为草乌药材质量控制及进一步开发利用奠定基础。

附子不同炮制方法比较分析

目的:采用高效液相色谱法分析附子不同炮制品中6个生物碱的含量,研究《中国药典》炮制法、蒸制法、炒制法之间的差异。方法:采用《中国药典》2010年版附子含量测定项下方法检测;运用SPSS17.0统计分析软件进行数据处理。结果:各成分分离良好;蒸附片、炒附片、黑顺片、白附片、淡附片、炮附片中双酯型生物碱的量都得到有效降低,但蒸附片和炒附片中单酯型生物碱的含量明显增加。结论:蒸制法、炒制法与《中国药典》炮制法一样,具有相同的炮制减毒能力,但蒸制法和炒制法又能增加毒性小、疗效好的单酯型生物碱类的量,优于《中国药典》炮制法。

乌附经方预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的观察含乌头、附子、半夏、栝楼的乌附经方对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用,探讨含有十八反药物的方剂用于特定病理状态的可行性。方法雄性Wistar大鼠50只随机分为5组,即:假手术对照组(SH组)、心肌缺血再灌注模型对照组(I/R组)、乌附经方低剂量组(I/R+JFL组)、乌附经方中剂量组(I/R+JFM组)及乌附经方高剂量组(I/R+JFH组),每组10只。乌附经方低、中、高剂量组分别以0.75、1.50、3.00mL/100g体质量的剂量灌胃14天,浓度500g/L;除SH组外,其他各组结扎冠状动脉左前降支,使心肌缺血30min,再灌注120min。透射电镜观察心肌线粒体的超微结构改变;一步法脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)检测各组缺血心肌细胞凋亡;RT-PCR法测B细胞白血病/淋巴瘤-2基因(B-cell leukemia/lymphoma2,Bcl-2)、与Bcl-2相关的x蛋白(Bcl-2 associated x protein,Bax)的mRNA表达;ELISA检测血清乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)活性,并测定心肌梗死面积的大小。结果与I/R组比较,乌附经方各组均能降低血清中LDH、CK的释放量(且随着剂量的增加LDH、CK的释放量递减),减小心肌梗死面积、降低凋亡指数(P<0.05);经方组凋亡基因Bcl-2表达水平上升,Bax表达水平下降,Bcl-2/Bax比值升高。结论乌附经方预处理可能通过减少细胞凋亡,对心肌缺血再灌注损伤产生保护作用。说明"十八反"不是绝对的,而是相对的,含有相反中药的复方制剂可用于缺血性心肌病等特定的病理状态。

南阳野生乌头整株植物不同部位的生物碱和多糖含量比较研究

目的:比较野生南阳乌头整株植物不同部位的生物碱和多糖含量差异,探究南阳野生乌头地上部分和须根的药用价值。方法:采用HPLC法检测南阳野生乌头、南阳野生附子、须根、地上部位中3种单酯型生物碱、3种双酯型生物碱含量;采用蒽酮-浓硫酸法分光光度法检测南阳野生乌头、南阳野生附子、须根、地上部位中多糖含量。结果:南阳野生乌头整株植物4个部位中,3种单酯型生物碱含量由高到低依次为:南阳野生乌头>南阳野生附子>须根>地上部分(P <0.05),3种双酯型生物碱含量由高到低依次为:南阳野生附子>须根>南阳野生乌头>地上部分(P <0.05),总生物碱含量由高到低依次为:南阳野生附子>须根>南阳野生乌头>地上部分(P <0.05),多糖含量由高到低依次为:南阳野生附子>南阳野生乌头>地上部分>须根(P <0.05)。结论:本实验对南阳野生乌头、南阳野生附子、须根、地上部分生物碱和多糖成分进行检测,为须根和地上部分的药用价值提供了科学依据。

醋的用量对炮制草乌生物碱类成分的影响

目的:探讨醋的用量对醋制草乌生物碱类成分的影响。方法:采用不同用量的米醋炮制草乌,HPLC法测定炮制品中3种双酯型生物碱和3种单酯型生物碱的含量,比较生草乌、药典法制草乌、不同用量醋制草乌中生物碱的含量差异。结果:醋制草乌可以使双酯型生物碱水解,生物碱含量的变化与醋的用量有一定相关性;醋制草乌中单酯型生物碱的含量明显高于药典法制草乌。结论:醋制草乌可以作为一种新的草乌炮制方法,但应减少临床用量。

ICP-AES法测定道地中药材川乌头不同器官和炮制品矿质元素含量

[目的]为进一步研究开发州产道地中药材川乌提供参考。[方法]采用硝酸一高温灰化对道地中药材乌头根、茎、叶及炮制品黑顺片、白附片、黄附片中的矿质元素进行消解，用电感耦合等离子原子发射光谱法测定消解液中矿质元素的含量。[结果]样品中K、Fe、Zn的含量较为丰富，其中，乌头根中Cu含量最高，为349．8μg／g，茎中K、M、Zn含量最高，分别为23920．0,8．7、500．5μg／g，叶中Mn、Fe含量最高，分别为29．7、40375．0μg/g；黑顺片中Mo、Sr含量最高，分别为1．2、1981．0μg/g，黄附片中Cr含量最高，为95．5μg/g。所用测定方法的加标回收率为92．00％～109．40％，相对标差为0＋29％～3．42％，具有良好的精密度和准确度。[结论]道地中药材川乌头不同器官及炮制品中矿质元素含量差别较大。

酸性染料比色法测定乌头属不同药材中乌头生物碱含量

目的:测定毒性中药附子、川乌、草乌、雪上一枝蒿的乌头生物碱含量,对这4种药材的临床用量进行控制。方法:用酸性染料比色法,测定制附子、川乌、草乌中雪上一枝蒿的乌头生物碱含量。结果:附子中生物碱含量为0.2403 mg/g,川乌为1.0412 mg/g,草乌为2.1149 mg/g,雪上一枝蒿为0.6702 mg/g。结论:本实验中建立的酸性染料比色法测定乌头生物碱含量,可作为评价毒性药材质量的根据。

消骨增贴的薄层色谱鉴别研究

目的:提高消骨增贴质量标准,建立消骨增贴中四味中药的鉴别方法。方法:采用薄层色谱鉴别法对消骨增贴中制川乌、附子、三七和血竭等中药进行了定性鉴别。结果:处方中制川乌、附子、三七和血竭的薄层色谱具有鉴别特征。结论:薄层方法简便、可靠、专属性强,可作为消骨增贴质量控制方法。

不同产地生附子在破格救心汤中双酯型乌头碱含量差异研究

目的研究不同产地生附子在破格救心汤中双酯型乌头碱质量分数的差异。方法采用高效液相色谱法,以Technologies Athena C_(18)-WP(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,甲醇(0.1%三乙胺)-水(体积比70∶30)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为235 nm。对13个不同产地生附子组成的破格救心汤中双酯型乌头碱的质量分数进行检测,比较不同产地生附子在破格救心汤中毒性成分质量分数的差异。结果 13个不同产地生附子组成的破格救心汤水煎液中3种毒性双酯型乌头碱的质量分数具有明显差异,以四川江油产地的附子总双酯型乌头碱质量分数为标准,与其相近的为陕西汉中、江苏常州的样品;质量分数较高的为云南腾冲、辽宁大连、四川凉山的样品,其中云南腾冲样品约为四川江油的3倍;质量分数较低的为河北石家庄、河南南阳、广西百色的样品。结论本文可为临床应用破格救心汤时,附子产地选择、剂量使用、安全性评价及临床安全用药提供科学依据。