柴胡葛根有效部位对脂多糖诱导家兔发热模型的解热作用研究

目的研究柴胡、葛根药对有效部位分用、合用对脂多糖诱导雄性家兔发热模型的解热作用。方法采用水提-壳聚糖澄清-大孔树脂纯化法,制备了葛根总黄酮有效部位;采用醇提-大孔吸附树脂纯化法和水蒸气蒸馏法从柴胡中提取柴胡总皂苷和柴胡芳香水;将36只雄性家兔随机分为模型组、葛根总黄酮组、柴胡有效部位组、柴葛合用组、对乙酰氨基酚(阳性对照)组及柴胡注射液组,采用脂多糖0.5μg/kg耳缘静脉注射建立家兔发热模型,研究葛根总黄酮及柴胡有效部位配伍前后的退热作用。以平均发热曲线及体温反应指数为指标,观察葛根总黄酮及柴胡有效部位配伍前后的退热作用。结果柴葛合用时,退热效果显著(与模型组比较,P<0.01),持续时间长(与柴胡组比较,P<0.05)。结论柴胡葛根有效部位合用时解热效果佳。

葛根-石膏药对不同配伍比例中有效成分含量变化研究

[目的]通过建立超高效液相色谱(UPLC)法测定葛根-石膏药对中葛根素和大豆苷的含量,并通过此法探讨有效成分随葛根石膏配比变化的溶出规律。[方法]不同比例葛根石膏配伍,水煎提取,采用超高效液相色谱(UPLC)法,色谱柱:Acqioty UPLC C18,2.1 mm×100 mm,1.7μm,检测器:二极管阵列检测器,工作站:Empower 3,流动相:乙腈-甲醇-1.5‰磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长:254 nm。[结果]葛根配伍石膏,葛根素和大豆苷煎出量均比葛根单煎高。以葛根-石膏(1∶2)时葛根素、大豆苷的煎出率最高。[结论]说明葛根配伍石膏有利于葛根素和大豆苷的煎出,从而增加有效成分的溶出。

黄芪葛根配伍对糖尿病大鼠脂肪组织AMPK信号通路的影响

目的探讨黄芪与葛根配伍对糖尿病脂肪中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的作用,明确其调控血糖血脂机制。方法将86只SPF级SD雄性大鼠按照随机数字表分成6组:正常组、模型组、金芪降糖组、黄芪组、葛根组、黄芪葛根配伍组,正常组11只,其余各组15只大鼠。一次性腹腔注射2%STZ(46 mg/kg)造模,同日各组分别予金芪降糖混悬液1.47 g/kg、黄芪2.7 g/kg、葛根1.35 g/kg、黄芪葛根汤4.05 g/kg灌胃,给药30 d。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测脂联素(APN)、葡萄糖转运体4(GLUT-4),实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测脂联素受体1(AdipoR1)、脂联素受体2(AdipoR2)、AMPK、GLUT-4、过氧化物酶增殖体激活受体-α(PPARα)、PPARγmRNA。结果与正常组比较,模型组大鼠APN、GLUT-4水平降低,AdipoR1、AdipoR2、AMPK、GLUT-4、PPARα、PPARγmRNA表达减少(P<0.05)。黄芪、黄芪与葛根配伍能升高模型大鼠APN、GLUT-4水平(P<0.05);黄芪、葛根及两药配伍能增加AdipoR1(葛根、黄芪与葛根配伍除外)、AdipoR2、AMPK、PPARα(葛根除外)、PPARγ、GLUT-4mRNA表达(P<0.05),黄芪促进AdipoR2、PPARαmRNA表达的作用优于两药合用,黄芪与葛根配伍调节AMPK、PPARγ、GLUT-4mRNA表达的作用优于单一用药(P<0.05)。结论黄芪、葛根及其配伍调节血糖血脂与调控糖尿病大鼠脂肪组织AMPK信号通路有关,黄芪葛根配伍调控血糖、血脂作用优于单一用药,可能与其促进APN、AMPK、GLUT-4、PPARγmRNA表达有关。

基于网络药理学探讨“丹参-葛根”药对治疗缺血性脑卒中的机制

目的:探讨“丹参-葛根”药对治疗缺血性脑卒中的成分、靶点、活性、通路,为探讨中药药对的分子作用机制提供科学依据。方法:通过网络药理学平台,分析“丹参-葛根”药对的活性成分、作用靶点及通路,探讨中药药对的分子作用机制。结果:预测到关键成分16个,相关核心靶标28个,相关通路30个,药对发挥作用的成分有丹参环庚三烯酚酮、柳杉酚、弥罗松酚、齐墩果酸、刺五加苷A、琥珀酸、熊果酸、黄芩苷、花生油酸、鼠尾草酚、胡萝卜(甾醇)苷、葛根皂醇B甲酯、大豆素、染料木素、刺芒柄花素、槐花皂苷Ⅲ等;核心靶标主要集中在COX family,ATP family,PTGS2等,涉及的主要通路有趋化因子信号通路、Toll受体信号通路、氧化磷酸化、cGmp-pkg信号通路等,显示“丹参-葛根”治疗缺血性脑卒中可能与抗氧化、抗炎保护等有关。讨论:“丹参-葛根”所含成分可能通过抑制炎性反应、抗氧自由基等来治疗缺血性脑卒中。

黄芪葛根配伍对糖尿病大鼠脂肪组织胰岛素信号通路的影响

目的探讨黄芪葛根配伍对糖尿病大鼠脂肪组织胰岛素信号通路的影响,明确其对血糖调控机制。方法将86只大鼠随机分为6组,除正常组11只外,其余各组15只大鼠予一次性腹腔注射2%STZ(46 mg/kg)造模。同日正常组、模型组予蒸馏水蒸馏水10 mL/kg,各给药组分别予金芪降糖片混悬液1.47 g/kg,黄芪2.7 g/kg,葛根1.35 g/kg,黄芪葛根汤4.05 g/kg,给药30 d。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测脂肪组织中胰岛素(Ins)、Ins受体(InsR)、葡萄糖转运体4(Glut-4)的水平,实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测脂肪组织中Ins底物(IRS)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB/AKT)mRNA相对表达。结果与正常大鼠比较,模型大鼠Ins、InsR、Glut-4水平降低,IRS、PI3K、AKT mRNA表达减少(P<0.05)。与模型大鼠比较,黄芪、葛根及其配伍能够升高糖尿病大鼠Ins(葛根、黄芪与葛根配伍除外)、InsR、Glut-4(葛根除外)水平(P<0.05),在调节InsR、Glut-4时,黄芪优于两药合用;黄芪、葛根及两药配伍能够增加IRS(葛根、黄芪与葛根配伍除外)、PI3K(葛根除外)、AKT mRNA表达(P<0.05),黄芪促进PI3K mRNA表达的作用优于两药合用,黄芪与葛根配伍调节AKT mRNA表达的作用优于单一用药。结论黄芪、黄芪与葛根配伍能够调节糖尿病大鼠脂肪组织胰岛素信号通路,黄芪作用效果佳。

RP-HPLC法测定葛根药对中四种黄酮类药效组分的含量

目的:建立并测定葛根四组功效主治不同的药对中黄酮类药效组分的含量。方法:以葛根不同功效主治的药对为载体,采用RP-HPLC法梯度洗脱测定葛根不同药对中黄酮类药效组分3'-羟基葛根素-葛根素-大豆苷-大豆苷元的含量。结果:葛根解表药对葛根-麻黄、葛根生津止渴药对葛根-天花粉、葛根透疹药对葛根-升麻、葛根升阳止泻药对葛根-黄芩黄连中,葛根药效组分3'-羟基葛根素-葛根素-大豆苷-大豆苷元的含量比例分别为:2.67:5.22:1.34:1、2.05:4.27:1.12:1、2.09:5.07:1.10:1、2.67:5.22:1.09:1。结论:该方法同时测定葛根药对中的四种药效成分,准确、快速、重现性好,适合测定葛根药对中药效组分的含量。

基于析因设计探讨黄芪葛根配伍对糖尿病大鼠骨骼肌Ins/APN/LEP及其受体的影响

目的:通过析因设计考察糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素(Ins)与胰岛素受体(InsR)、脂联素(APN)与脂联素受体(AdipoR)、瘦素(LEP)与瘦素受体(ObR)变化,探讨黄芪葛根配伍对糖尿病大鼠骨骼肌糖代谢的调控作用与机制。方法:按照随机血糖将66只大鼠分为6组。除正常组外,其余各组均腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液诱导为糖尿病模型。检测糖尿病大鼠血糖;应用酶联免疫吸附测定法检测骨骼肌Ins、InsR、APN、AdipoR、LEP、ObR水平。结果:黄芪组、葛根组及黄芪葛根配伍组均能降低随机血糖;黄芪葛根配伍组能增加Ins、InsR、APN、AdipoR、LEP、ObR水平。结论:黄芪、葛根均具降糖之效。黄芪葛根配伍能够有效调节糖代谢,其机制可能与Ins、APN、LEP及其受体的表达变化相关。

基于PI3K/Akt信号通路探讨黄芪葛根配伍对糖尿病大鼠骨骼肌糖代谢的影响

目的:基于PI3K/Akt信号通路中胰岛素(Ins)、胰岛素受体(InsR)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt2)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)以及葡萄糖转运体-4(GLUT-4)的变化,探讨黄芪葛根配伍对糖尿病大鼠骨骼肌糖代谢的影响。方法:66只大鼠随机分为6组,除正常组外,其余各组均腹腔注射链脲佐菌素溶液诱导为糖尿病模型。检测大鼠随机血糖,并应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测骨骼肌Ins、InsR及GLUT-4水平,以及应用实时荧光定量PCR技术检测骨骼肌IRS-2、PI3K、Akt2、GSK-3β、GLUT-4mRNA的表达。结果:黄芪组、葛根组及黄芪葛根配伍组随机血糖均降低,且配伍组血糖下降最明显。黄芪葛根配伍组InsR、GLUT-4、IRS-2mRNA、PI3KmRNA、Akt2mRNA、GLUT-4mRNA表达升高,GSK-3βmRNA表达减低。在调节骨骼肌Ins、InsR及PI3KmRNA方面,黄芪与葛根有交互作用。结论:黄芪、葛根均具有降低血糖之效,其降糖机制可能与Ins、InsR、IRS-2、PI3K、Akt2、GSK-3β、GLUT-4的表达变化相关。

黄芪葛根配伍对糖尿病大鼠肝组织PI3K/AKT信号通路影响

目的基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路探究黄芪葛根配伍降低糖尿病大鼠血糖、血脂的作用机制。方法SD大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,随机分为模型组、阳性对照(金芪降糖片)组(1.47 g/kg)、黄芪组(2.7 g/kg)、葛根组(1.35 g/kg)、黄芪葛根汤组(4.05 g/kg),各15只,另设正常组11只,造模同日灌服相应药物或蒸馏水10 mL/kg,连续30 d。检测血糖、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO),实时荧光定量PCR法检测肝组织胰岛素受体底物-2(IRS-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT2)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、肝X受体(LXRα)、固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)mRNA相对表达量。结果与正常组比较,模型组大鼠治疗30 d后血糖、CHO、TG水平明显升高,IRS-2、PI3K、AKT2、LXRαmRNA表达降低,GSK3β、SREBP-1 mRNA表达增加(P<0.05)。黄芪组、葛根组及其配伍组能降低模型组大鼠血糖及CHO、TG水平;提升IRS-2、PI3K(葛根组除外)、AKT2(葛根组除外)、LXRαmRNA表达,但两药间无交互作用;同时能降低GSK3β、SREBP-1 mRNA表达,黄芪、葛根二者配伍降低GSK3βmRNA表达的效果优于单用,而降低SREBP-1 mRNA表达的效果不如单用。结论黄芪降糖、降脂作用可能与提升IRS-2、PI3K/AKT、LXRαmRNA表达,降低GSK3β、SREBP-1 mRNA表达有关。葛根降糖、降脂作用可能与提升IRS-2、LXRαmRNA表达,降低GSK3β、SREBP-1 mRNA表达有关。黄芪葛根配伍降低糖尿病大鼠的血糖血脂可能与刺激肝组织IRS-2,激活PI3K/AKT信号通路,调节下游信号分子GSK3β、LXRα、SREBP-1的活性有关。

基于含量分析探讨黄芪-葛根药对不同配比的差异

目的探究不同配比的黄芪-葛根药对水煎液中葛根素的含量,验证经方黄芪葛根汤和玉液汤配伍比例的合理性,为临床用药提供参考。方法设置不同剂量配比的黄芪-葛根药对(0∶1、1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、1∶2、1∶3、1∶4),以Sino Chrom ODS-BP(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,甲醇-0.1%磷酸(35∶65)为流动相,流速为0.5 m L/min,检测波长250 nm,进样量20μL,测定不同配比药对水煎液中葛根素含量。结果葛根素在5~300μg/m L浓度范围内呈良好的线性关系,回归方程为Y=66 449.269 1X-175 665.663 1(r=0.999 6),重复性、稳定性和回收率良好。黄芪与葛根的比例为0∶1、1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、1∶2、1∶3、1∶4的混煎液中葛根素含量分别为(2.506 7±0.025 8)%、(2.526 7±0.071 2)%、(2.863 3±0.086 4)%、(2.956 7±0.119 6)%、(2.835 0±0.078 7)%、(2.480 0±0.072 4)%、(2.530 0±0.064 8)%、(2.183 3±0.128 9)%。结论黄芪-葛根药对配伍比例为2∶1、3∶1、4∶1时,水煎液中葛根素含量最高,证实经方中两者的配比合理,可作为临床选用的最优配比。

黄芪葛根配伍调节糖尿病大鼠血糖血脂炎症的作用与机制

目的：考察黄芪葛根配伍对糖尿病大鼠血糖、血脂及炎症的调节作用与机制,分析黄芪葛根配伍在降糖降脂抗炎过程中的交互作用。方法：66只大鼠随机分为6组,除正常组外,其余各组采用链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病模型。正常组、模型组灌服蒸馏水（10 mL·kg^-1）,阳性药组灌服金芪降糖片混悬液（1.47 g·kg^-1）,黄芪组、葛根组、黄芪葛根汤组分别灌服黄芪水煎液（2.7,1.35,4.05 g·kg^-1）,连续给药30 d后处死。酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测肝组织胰岛素（Ins）,胰岛素受体（InsR）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测肝组织脂联素受体1（AdipoR1）,腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）,葡萄糖转运体-4（GLUT-4）,过氧化物酶增殖体激活受体α（PPARα）,脂肪酸转运蛋白4（FATP4）,p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）mRNA相对表达量。结果：与模型组比较,黄芪、葛根及其配伍（黄芪葛根汤）能升高糖尿病大鼠肝脏Ins（葛根组除外）,InsR水平,增加AdipoR1,AMPK（葛根组除外）,GLUT-4,PPARα,FATP4mRNA表达,降低TNF-α（葛根组除外）水平,减少p38 MAPK mRNA表达（P〈0.05）。在调节InsR,PPARαmRNA,TNF-α水平时,单用黄芪作用比两药合用效果好。结论：黄芪葛根配伍在调节血糖血脂炎症过程中各有侧重,其机制与升高肝脏Ins水平、增加GLUT-4,FATP4 mRNA,降低p38 MAPK mRNA有关。

基于基线等比增减设计法优选葛根-黄连抗消渴最佳配比

目的:通过不同配比葛根-黄连(葛-黄)对不同模型糖尿病小鼠血糖影响,对链尿佐菌素(STZ)复合高脂饲料喂养致糖尿病小鼠模型血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量的影响,探索葛根-黄连伍用抗消渴的最佳配比方案。方法:雄性SPF级小鼠,对正常小鼠血糖影响实验随机分为空白组、二甲双胍组(0.5 g·kg-1)、葛-黄0∶10,8∶3,6∶5,3∶8,10∶0组(4 g·kg-1);对四氧嘧啶和STZ所致糖尿病小鼠实验,造模72 h后尾尖取血测定小鼠空腹血糖(FBG),成模小鼠随机分为空白组、模型组、二甲双胍组、葛-黄10∶0,8∶3,6∶5,3∶8,0∶10组,给药后7,14 d分别观察不同配比葛-黄对正常小鼠及四氧嘧啶致糖尿病小鼠FBG的影响,对STZ复合高脂饲料致糖尿病小鼠FBG,TC,TG的影响。结果:葛-黄10∶0,8∶3,6∶5,3∶8,0∶10这5组均能明显降低四氧嘧啶致高血糖小鼠模型和STZ复合高脂饲料喂养致糖尿病小鼠模型空腹血糖,降低STZ复合高脂饲料致糖尿病小鼠模型血清TG,TC含量,同时降低正常小鼠空腹血糖,其中降糖、降低TG,TC效果葛-黄3∶8组疗效突出(P<0.01),黄连单味药次之。结论:葛根、黄连单用及伍用抗消渴疗效确切,能明显改善糖尿病相关生化指标,伍用后药效优于单味药且存在最佳配比。

基于入血成分-靶点-通路策略探索丹参-川芎-葛根角药配伍对脑心同治的科学内涵

目的:基于入血-成分-靶点-通路的策略,初步探析角药配伍丹参-川芎-葛根(简称“通脉方”)治疗缺血性心、脑血管疾病相关中医药理论“理、法、方、药”及“脑心同治”之内涵,为临床合理应用提供科学依据。方法:大鼠灌胃丹参-川芎-葛根水提物,采用UPLC-MS法,检测鉴别代谢入血成分,根据实测提取物、入血成分及通脉方成分分析相关文献,筛选通脉方活性成分的范围,通过本草组鉴(HERB)、Swiss Target Prediction、GeneCards等数据库检索活性成分所对应的靶点以及缺血性心、脑血管疾病相关靶点;获取成分与疾病的交集靶点,采用STRING平台和Cytoscape可视化软件构建丹参-川芎-葛根活性成分-靶点网络及蛋白互作(PPI)网络;经拓扑学条件过滤,筛选核心靶点网络;运行R语言脚本对PPI网络进行差异基因富集分析,获得富集排名前列的基因和信号通路;采用AutoDock Vina软件将高连接度的活性成分与核心靶点进行分子对接。结果:在丹参-川芎-葛根水提物中检测到14种成分,大鼠给药后血浆中检测到11个入血原型成分,有大豆苷元、染料木素、3′-甲氧基大豆苷元、芒柄花素、隐丹参酮、等,同时也是核心靶点所映射的成分。分子对接结果显示这些成分与靶蛋白受体具有较强的结合能力(结合能<-7.0 kcal/mol)。通脉方“脑心同治”机理涉及的“脑”、“心”共同点包括:缺血性心、脑血管疾病各自的成分-靶点调控网络中,有多个共同的靶基因和靶基因映射相连的通脉方成分;由22个核心靶点构成的核心蛋白互作网络(PPI)中,其中21个为共同靶点,与核心靶点相映射的通脉方成分相同(23个);差异基因富集分析中,有9项共同的生物过程(BP),8项共同的分子功能(MF),15条显著影响的共同信号通路,其中基因占比最高的通路均为PI3K/AKT信号通路;心、脑疾病核心靶点调控网络映射的入血成分(11个)相同。结论:本研究发现丹参-川芎-葛根角药对心脑血管的作用与其入血大豆苷元、染料木素、3′-甲氧基大豆苷元、芒柄花素、隐丹参酮、等成分密切相关,缺血性心、脑血管疾病具有共同的病理基础和密切的内在联系,“脑心同治”理论具有合理性,从物质基础和可能的作用机理揭示了丹参-川芎-葛根角药配伍的理、法、方、药的科学性与合理性,其详细作用机理有待进一步深入研究。

葛根-麻黄药对不同比例配伍对葛根素溶出量的影响

目的:探讨葛根-麻黄药对不同比例配伍对葛根素溶出量的影响。方法:采用HPLC测定葛根素含量,流动相甲醇-水(25∶75),检测波长250 nm,建立葛根-麻黄药对中葛根素的含量测定方法。考察葛根-麻黄药对不同比例(3∶1,2∶1,4∶3,1∶1,1∶2,1∶3)配伍对葛根素溶出量的影响。结果:建立的含量测定方法稳定可行,平均加样回收率99.67%,RSD 2.2%。葛根-麻黄按4∶3配伍时葛根素溶出量最多(2.408 g·L-1),与葛根水煎液(2.455 g·L-1)最接近,而葛根-麻黄按2∶1配伍时溶出量最少(2.254 g·L-1)。结论:不同配伍比例的麻黄对葛根中葛根素的溶出量具有一定影响。

葛根芩连汤抑制TNF-α诱导的Caco-2细胞氧化损伤配伍规律研究

目的探讨葛根芩连汤缓解肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人结肠癌Caco-2细胞氧化应激损伤作用及其配伍规律。方法将Caco-2细胞随机分为对照组、TNF-α(80μg/L)组、小檗碱(6.73μg/mL)组及葛根芩连汤配伍组(全方组、去甘草组、去葛根组、葛根甘草组和黄芩黄连组,18.75μg/mL)。除对照组外,其余各组细胞给予TNF-α预处理2 h,再给予相应药物处理24 h。MTT检测Caco-2细胞活力;流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;比色法检测细胞中总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;qRT-PCR和Western blotting分别检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、还原型辅酶I/II醌氧化还原酶1[NAD(P)H quinine oxidoreductase 1,NQO1]和血红素氧合酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)m RNA和蛋白表达;荧光显微镜观察Nrf2蛋白入核情况。结果5.0~25.0μg/mL的含药培养基和10~80μg/L的TNF-α对Caco-2细胞活性无明显影响。与TNF-α组比较,各给药组Caco-2细胞ROS水平显著降低(P<0.01);除去葛根组和黄芩黄连组外,其余各组MDA水平显著降低(P<0.01),GSH水平明显升高(P<0.01);除去葛根组外,其余各给药组Nrf2基因表达明显升高(P<0.01),全方组和去甘草组NQO1基因表达明显升高(P<0.05、0.01),全方组和葛根甘草组HO-1基因表达明显升高(P<0.05、0.01);除黄芩黄连组外,其余各组Nrf2和HO-1蛋白表达显著升高(P<0.01);除去葛根组和黄芩黄连组外,其余各组NQO1蛋白水平显著升高(P<0.05、0.01),Nrf2蛋白入核明显增加(P<0.05、0.01)。结论缺少葛根对葛根芩连汤抑制Caco-2细胞氧化应激损伤有较大影响。

反相离子对-高效液相色谱法同时测定葛根芩连汤中13种有效成分及其在配伍机制研究中的应用

目的研究葛根芩连汤不同组方中活性成分含量的差异,揭示其药效物质的变化规律,进而从化学层面探究葛根芩连汤的配伍规律。方法采用反相离子对-高效液相色谱法测定葛根芩连汤不同组方配伍中13种有效成分(葛根素、大豆苷元、黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素、小檗碱、巴马汀、药根碱、黄连碱、甘草素、异甘草苷、甘草酸和甘草次酸)的含量。色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为3.5 mmol/L庚烷磺酸钠溶液(含体积分数0.1%甲酸)-乙腈(含体积分数0.1%甲酸),梯度洗脱,体积流量为1 mL/min;检测波长为270 nm;柱温35℃;进样量为20μL。结果葛根芩连汤中13种有效成分均基线分离、峰形对称,经方法学验证各项效能指标均符合定量分析要求。不同组方配伍中活性成分的含量变化规律:葛根与黄芩、黄连配伍时,葛根中的葛根素与大豆苷元以及黄芩中的黄芩苷含量均显著增加;黄芩、黄连与炙甘草配伍时,其中的黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素和小檗碱等有效成分均有增加,同时甘草中的甘草酸亦有显著增加;全方配伍时各有效成分均有不同程度增加。结论所建立的方法可用于葛根芩连汤及其组方的配伍规律研究。葛根芩连汤全方配伍对葛根与黄芩、黄连及炙甘草中有效成分的溶出均起到促进作用。其中,臣药黄芩、黄连能显著促进君药葛根中有效成分的溶出,起到辅佐君药的作用;而佐使药炙甘草不仅可促进臣药中有效成分的溶出,同时可在一定程度上增强臣药对君药的辅佐作用,起到协调全方、增效减毒的作用。

利用网络药理学方法探讨针对新型冠状病毒肺炎以ACE2为治疗靶点的5味中药的作用机制和组分配伍

目的探讨针对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)以人血管紧张素转换酶II(ACE2)为治疗靶点的5味中药的作用机制。方法通过传统中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)筛选针对以ACE2为药物靶点的潜在中药,并进一步使用TCMSP平台分别查询潜在中药所含的相关成分及各自对应的药物靶点,利用STRING在线数据库对上述蛋白靶点进行蛋白互作分析并下载相关数据,进而通过Cyto Scape 3.2.1软件中的MCODE插件筛选处于PPI网络体系中的核心子网络模块。使用在线富集分析软件DAVID v6.8进行基因本体(GO)功能富集分析和基于京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,预测5味中药的药理作用机制,并在中医理论体系下验证并探讨候选药物配伍及临床应用的可行性。结果通过TCMSP平台筛选出了5味以ACE2为治疗靶点并具备多重治疗作用的中药,即柴胡、葛根、葛花、川牛膝、萱草根。它们共包含42个潜在活性成分和240个药物作用靶点。这些靶点的GO生物功能和KEGG通路富集分析结果表明上述5种中药能够影响炎性反应、细胞凋亡与增殖等生物学过程,并与PI3K-Akt、TNF、Fox O和MAPK等信号通路密切相关。传统中医理论中柴胡、葛根药对是治疗传染性热病的经典药对;柴葛解肌汤在古今临床中亦大量应用于外感发热疾病并取得良好临床疗效,其主治的发热性疾病为六经辨证中的三阳合病,符合此次新型冠状病毒感染早期轻症患者的中医临床辩证,可予牛膝、萱草根加减化裁使用。结论上述5种中药在COVID-19治疗方面具备有多靶点、多功能、多途径的药理作用,结合中医理论分析及既往临床经验,建议可探索性应用柴葛解肌汤加减或柴胡、葛根药对配伍治疗COVID-19。