响应面法优化红芪多糖的提取工艺

选用甘肃省道地药材红芪作为试验材料,通过水提醇沉法提取红芪多糖,并以单因素试验与响应面法相结合的方法优化红芪多糖的提取工艺。单因素试验设置提取温度、提取时间、提取次数、液料比和醇沉比5个因素,每个因素设置5个水平。在此基础上以多糖提取率为衡量指标,进行Box-Behnken试验设计,通过回归模型的建立及显著性检验,得到红芪多糖提取工艺的最佳参数,再利用该工艺参数条件进行验证。结果显示,红芪多糖的最佳提取条件为提取温度为80℃,提取时间为3 h,提取次数为4次,液料比为17 mL/g,醇沉比75%。最佳条件下红芪多糖的平均提取率为7.70%,与理论提取率8.01%无显著性差异(P>0.05)。证明所建立的数学模型是合理的,认为采用单因素试验结合响应面法优化红芪多糖的工艺稳定可行,为红芪多糖的有效提取提供理论依据,为进一步分离纯化红芪多糖奠定基础。

红芪醇提物对脓毒症所致大鼠肝损伤的影响

【目的】探讨红芪醇提物对脓毒症所致大鼠肝损伤的影响。【方法】将60只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,红芪醇提物低、中、高剂量组,每组12只,除假手术组外,其余各组大鼠采用盲肠结扎穿孔法复制脓毒症模型。造模结束后,红芪醇提物低、中、高剂量组即刻给予灌胃红芪醇提物1.0、2.0、4.0 g·kg^(-1)·d^(-1),模型组和假手术组大鼠灌胃等体积的生理盐水。连续灌胃2周。末次给药后,应用生化分析仪检测大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL),酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测大鼠血清白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和白细胞介素10(IL-10),末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)染色法测定肝组织细胞凋亡率,免疫组织化学法检测肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达,蛋白免疫分析(Western Blot)法检测肝组织核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)的表达。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠血清AST、ALT、TC、TG、IL-6、MCP-1和IL-10水平明显升高(P<0.05),HDL水平明显下降(P<0.05),肝组织TNF-α表达水平明显升高(P<0.05),pNrf2/Nrf2、HO-1、NQO-1表达水平明显下降(P<0.05),肝组织细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,红芪醇提物中、高剂量组大鼠AST、ALT、TC、TG、IL-6和MCP-1水平明显下降(P<0.05),HDL和IL-10水平明显升高(P<0.05),肝组织TNF-α表达水平明显下降(P<0.05),pNrf2/Nrf2、HO-1、NQO-1表达水平明显升高(P<0.05),肝组织细胞凋亡率明显下降(P<0.05)。【结论】红芪醇提物可以降低脓毒症大鼠血清和肝组织中的炎症因子水平,激活肝组织抗氧化通路Nrf2/HO-1的表达,修复肝功能损伤。

Box-Behnken响应面法优化红芪多糖水提醇沉工艺研究

优化红芪多糖标准提取物的水提醇沉制备工艺参数。采用L_(9)(3^(4))正交试验优选红芪总糖水提工艺,采用Box-Behnken中心组合响应面法优化红芪多糖醇沉工艺,以“化学-生物活性”综合指标进行评价。结果表明,优化得到的红芪多糖水提醇沉制备工艺为:原料药材加水10倍量(首次12倍量),煎煮3次,每次1 h,合并药液,浓缩至与原料药材1∶1,进行醇沉,醇沉浓度77%,醇沉时间10 h,醇沉次数3次。按上述醇沉工艺所得提取物中多糖质量分数为60.52%,相比原药材水提取物中多糖质量分数的23.2%,纯度提高了1.61倍,且工艺稳定;所得提取物具有较好的抗氧化活性及DPPH自由基清除活性。说明该工艺可用于红芪多糖标准提取物的制备及开发利用。

红芪不同提取物对环磷酰胺所致免疫低下小鼠的影响及相关成分含量研究

目的对比研究红芪不同提取物对环磷酰胺(CTX)所致免疫低下小鼠的影响及相关化学成分含量。方法按照体重将昆明种小鼠随机分为空白组、模型组、对照组、醇提物组、水提物组、醇沉物组、残留物组。用CTX 40 mg·kg^(-1)造成免疫低下模型。对照组灌胃参芪颗粒5 g·kg^(-1),其他各组灌胃相应受试样品2 g·kg^(-1),正常组和模型组灌胃等量0.9%Na Cl,每天给药1次,连续15 d。称重计算小鼠脏器指数,腹腔注射5%鸡红细胞悬液(CRBC)测定腹腔巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数,用50%二硝基氯苯(DNCB)丙酮溶液致迟发型超敏反应测定OD值,用5%CRBC致敏测定血清溶血素OD值,尾静脉注射印度墨汁测定网状内皮系统吞噬指数及吞噬系数。用UV法测定多糖、总皂苷含量。结果模型组各指标与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。给药后,正常组、模型组与醇提物组、水提物组、醇沉物组、残留物组的胸腺指数(g·kg^(-1))分别为2.55±0.88,1.04±0.74,1.24±0.79,1.81±0.62,1.97±0.83,1.09±0.75,水提物组、醇沉物组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);水提物组、醇沉物组与残留物组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。这6组的腹腔巨噬细胞吞噬百分率(%)分别为48.58±5.51,28.54±3.15,35.28±6.03,36.99±6.78,39.89±8.33,27.91±8.02,醇提物组、水提物组、醇沉物组的吞噬百分率与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);水提物组、醇沉物组与残留物组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。这6组的迟发型超敏反应OD值分别为0.53±0.16,0.23±0.09,0.30±0.10,0.37±0.10,0.36±0.11,0.28±0.14,水提物组、醇沉物组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。各提取物中多糖和总皂苷含量:醇提物(6.35%;6.57%),水提物(22.64%;7.68%),醇沉物(42.15%;1.86%),残留物(4.33%;5.37%)。结论红芪水提物和醇沉物均能对抗CTX的免疫抑制作用,有一定的增强体液免疫和细胞免疫作用,可增强机体的非特异性免疫和特异性细胞免疫功能。推测多糖是其对抗CTX免疫抑制作用的主要活性部位。