生/制/发酵何首乌化学成分、药理作用及肝毒性研究进展

何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根。何首乌含有蒽醌类、二苯乙烯苷类、黄酮类、磷脂类等多种类型的活性成分,具有抗衰老、增强免疫功能、降血脂、补血、抗动脉粥样硬化、抗菌等多方面的药理作用。何首乌肝毒性的临床案例报道日渐增多,其安全性备受关注。通过对生/制/发酵何首乌的化学成分、药理作用及肝毒性进行系统综述,为何首乌深度开发利用提供参考。

何首乌炮制后新产生成分的分离和结构鉴定

目的:分离和鉴定何首乌炮制后新产生的化学成分。方法:采用HPLC法确定提取溶剂,用聚酰胺、大孔吸附树脂、ODS柱色谱等方法进行分离纯化,通过理化性质及光谱数据确定化合物结构。结果:新产生的化学成分为5-羟基麦芽酚(Ⅰ)和5-羟甲基糠醛(Ⅱ)。结论:两个化合物为首次从该属植物中分离得到。

何首乌炮制后化学成分的研究

为探讨何首乌炮制前后功效改变的物质基础,对何首乌炮制品的化学成分进行了研究。经提取分离,从中得到14个化合物,通过波谱数据分析分别鉴定为2,3-二氢-3,5-二羟基-6-甲基-4氢-吡喃-4-酮(1),3,5-二羟基-2-甲基-4氢-吡喃-4-酮(2),5-羟甲基糠醛(3),琥珀酸(4),对苯二酚(5),对羟基苯甲醛(6),没食子酸(7),2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(8),ω-羟基大黄素(9),大黄素-8-甲醚(10),ω-羟基大黄素-8-甲醚(11),2-甲氧基-6-乙酰基-7-甲基胡桃醌(12),大黄素(13),大黄素甲醚(14),其中化合物1～5为首次从该植物中分离得到,化合物1～4为炮制过程中产生的糖的麦拉德反应(Maillard Reaction)产物。

降脂冲剂中何首乌与决明子的薄层鉴别

[目的]建立降脂冲剂中何首乌与决明子的薄层鉴别方法。[方法]采用薄层层析法进行鉴别。用氯仿超声提取,以石油醚-甲酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)上层液为展开剂,用氨蒸气熏显色,紫外灯(254 nm)下观察。[结果]供试品色谱中,在与对照品及对照药材色谱相应位置上,分别显示相同颜色的荧光斑点。[结论]该法快速,灵敏,能准确鉴别出何首乌与决明子。

不同采集地制何首乌薄层色谱指纹图谱研究

目的:建立制何首乌薄层色潜指纹图谱。方法:黑豆汁蒸10份不同采集地何首乌样品,用甲醇提取其有效成分并以两种展开系统进行薄层色谱分离分析建立薄层色谱指纹图谱。薄层扫描法对色谱图进行定量扫描,以峰高进行主成分分析和聚类分析。结果:获得的11个共有指纹峰构成了制何首乌葸醌类和二苯乙烯苷类成分薄层色谱指纹图谱。结论:薄层色谱指纹图谱可快速有效地鉴别制何首乌,并评价其质量。

制何首乌多糖的纯度鉴定和理化性质研究

目的对制何首乌多糖进行纯度鉴定和理化性质研究。方法采用水提醇沉法提取制何首乌多糖,经过纤维素和凝胶柱层析纯化后,纯化后的多糖PRPM-1、PRPM-2和PRPM-3分别用Sepha-dexG-100柱层析和紫外吸收光谱检测其纯度;通过物理和化学方法分析多糖理化性质。结果制何首乌多糖为均一多糖。结论该测定方法准确,重复性好。

何首乌高压蒸制法蒸制时间对何首乌抗衰老活性影响的研究

目的通过何首乌高压蒸制和传统炮制对人胚肺二倍体细胞(HEL)抗衰老活性研究,筛选出高压蒸制法炮制何首乌的最佳炮制时间。方法在二倍体细胞的培养液中加入一定溶度的不同炮制时间和传统炮制的何首乌提取物,待细胞传至第25代以后,观察二倍体细胞的状态,检测二倍体细胞数量的变化以及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果 3h制品首乌的抗细胞衰减率为38.04%,其细胞衰亡速率最为缓慢,为各供试样品中抗细胞衰减作用最为显著的炮制时间(P<0.001)。3h制品何首乌组细胞内SOD含量是(71.85±5.04)U.mL-1,显著高于对照组细胞内SOD酶的活性,提示该炮制品可显著提高细胞内SOD酶的活性(P<0.001)。结论 3 h制品何首乌可以显著延缓HEL细胞的衰老速度,提高细胞中SOD的活性,延缓二倍体细胞的老化,可确定为何首乌抗衰老作用最佳的炮制时间。

制首乌对肾阳虚、肾阴虚证大鼠肝线粒体COX及mPTP开放的影响

目的:探讨制首乌对肾阳虚、肾阴虚证大鼠肝线粒体COX及mPTP开放的影响。方法:将90只SD大鼠随机分成9组,即空白组、肾阳虚模型对照组、肾阳虚高、中、低剂量组、肾阴虚模型对照组、肾阴虚高、中、低剂量组,每组10只。空白组予生理盐水。肾阳虚造模给予皮下注射氢化可的松,25 mg/kg,1次/d,连续14 d,肾阴虚造模在肾阳虚证大鼠开始造模后第8天,开始腹腔注射氢化可的松,50 mg/kg,1次/d,连续7 d。肾阳、阴虚造模后模型对照组予生理盐水,其余高、中、低剂量组分别给予制首乌高(24 g/kg)、中(12 g/kg)、低剂量(6 g/kg)灌胃3个月,提取肝线粒体,测定COX活力及mPTP开放。结果:肾阴虚证大鼠肝线粒体COX活力增强,PTP通透性减小。结论:制首乌肝毒性成分可能在肾阴虚证大鼠体内毒性减弱。

生何首乌、制何首乌对大鼠肝微粒体CYP450的影响

目的研究肝微粒体细胞色素P450(CYP450)以及血液生化酶在生何首乌、制何首乌致SD大鼠肝损伤中的作用。方法将SD大鼠分为3组,每日灌胃给药30 g/kg,连续给药90 d,末次给药后处死,称取脏器指数,测定肝脏CYP450、血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)等含量。结果生何首乌组肝微粒体蛋白显著性下降,CYP450含量显著增高(P<0.01),制何首乌组无明显变化;血液生化酶中生何首乌组的血清ALT、AST显著性降低,制何首乌血清ALP显著性升高;生何首乌和制何首乌的血清TP、TG均显著性降低;血清BUN中二者均呈下降趋势,但生何首乌具有显著性;CREA二者均呈显著性下降趋势。结论生何首乌致肝损伤并有CYP450的明显升高。制何首乌对CYP450无影响。生何首乌和制何首乌能够影响血液生化酶,生何首乌减低ALT、AST,制何首乌升高ALP,二者同时降低TG、BUN和CREA,这意味生着何首乌、制何首乌致大鼠肝物质代谢途径的作用机制有所不同。

制首乌对去卵巢大鼠子宫指数和性激素水平的影响研究

目的:研究制首乌对去卵巢大鼠子宫指数和血清性激素水平的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、制首乌高、中、低剂量组、阳性对照组。采用手术建立去卵巢大鼠模型,假手术组摘除双侧卵巢周围等体积脂肪,造模后7d,制首乌高、中、低剂量组分别灌服浓度为0.3 g/m L、0.15 g/m L、0.075 g/m L的制首乌水煎液,阳性对照组灌服浓度为0.018mg/m L的补佳乐,连续给药28d。计算各组大鼠子宫指数,ELISA法测定大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠子宫指数下降,血清中E2含量降低、LH和FSH浓度升高(P<0.05)。与模型组比,制首乌各处理组可不同程度的升高子宫指数和血清E2含量,降低LH、FSH浓度(P<0.05)。结论:制首乌可通过调节子宫指数和性激素来调节生殖轴,说明其具有植物雌激素样作用。

基于高内涵分析的何首乌对肝窦内皮细胞损伤的配伍减毒研究

目的:观察何首乌对肝窦内皮细胞损伤的配伍减毒情况,为其临床合理用药提供参考。方法:采用高内涵分析技术,检测何首乌与茯苓、甘草、三七在肝窦内皮细胞上的配伍减毒情况。结果:何首乌对肝窦内皮细胞的损伤呈剂量依赖性,在IC50的剂量下,分别配伍不同浓度的茯苓、甘草、三七都有显著的减毒作用,且呈剂量依赖性。何首乌配伍茯苓减毒的效果较好,甘草次之,三七稍差。结论:采用高内涵分析方法更加直观、具体地反映何首乌与茯苓、甘草、三七的配伍减毒效果,为临床用药的安全性、合理性提供依据。

制何首乌对成骨细胞的作用及其作用机理的研究

目的:探讨制何首乌单味药含药血清对成骨细胞(Ob)功能的影响,并探讨其作用机理。方法:通过血清药理学制备制何首乌单味药含药血清,采用SD新生大鼠头盖骨分离诱导成成骨细胞,应用CCK-8法、碱性磷酸酶(ALP)法,检测制何首乌含药血清对Ob增殖和分化的功能,同时通过RT-PCR方法检测含药血清对Ob成骨相关基因表达的影响。结果:制何首乌含药血清能促进Ob增殖,浓度10%、20%、30%促增殖作用显著(P<0.01),组间无浓度相关性;5%和10%的含药血清能下调翻译后水平ALP,但高浓度无此作用。同时,制何首乌含药血清上调成骨相关基因(OC、ALP、Cbfα1)mRNA表达(P<0.05)。结论:制何首乌单味药含药血清具有刺激体外培养Ob的增殖作用,其作用机理可能与上调Ob成骨相关基因的表达有关。

多指标综合评分法优选何首乌炮制工艺

目的:比较常压和高压炮制方法对何首乌成分的影响,优选何首乌炮制工艺。方法:何首乌分别以常压下清蒸、黄酒制、黑豆汁制24、32、40、72 h,以高压清蒸、黄酒制、黑豆汁制4、6、8、10 h;以何首乌炮制品中卵磷脂、二苯乙烯苷、多糖、结合型和游离型蒽醌的含量为指标,采用多指标综合评分法优选何首乌的炮制工艺。结果:分析各炮制工艺的综合评分,常压炮制和高压炮制工艺整体效果均是豆制>清蒸>酒制,高压豆制优于常压豆制工艺,综合评分最高的炮制工艺为高压豆制4 h,其次为高压豆制6 h。结论:用综合评分法能较好的评价何首乌的炮制工艺,建议可采用高压豆制(4 h)工艺炮制何首乌。

HPLC法测定制何首乌中大黄素的含量

目的:建立用HPLC法测定制何首乌中大黄素含量的方法。方法:Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水-冰醋酸(60:40:1);检测波长:437 nm;流速:1.0 ml·min-1;柱温:35℃。结果:大黄素在0.06～0.70μg范围内线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率100.5%,RSD为1.6%(n=9)。结论:本方法专属性强,灵敏度高,重现性好,适用于制何首乌的质量控制。

复方土茯苓胶囊的薄层色谱研究

目的:建立复方土茯苓胶囊的薄层色谱鉴别方法。方法:采用薄层色谱法对复方土茯苓胶囊中制何首乌、山豆根、当归进行定性鉴别。结果:制何首乌、山豆根、当归的薄层色谱图均斑点清晰,阴性无干扰。结论:本方法简便、可靠,可用于复方土茯苓胶囊的质量控制。

生血宝合剂中二苯乙烯苷的含量测定

目的 建立测定生血宝合剂中君药制何首乌的有效成分二苯乙烯苷（2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷）含量的高效液相色谱（HPLC）法,为生血宝合剂的质量控制提供依据。方法 Waters alliance高效液相色谱仪,色谱柱为Suntek Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-水（20∶80）,流速为1.0 mL/min,检测波长320 nm。结果 二苯乙烯苷在0.054 60~1.092 00μg范围内与峰面积积分值线性关系良好（R2=0.999 9）。结论 该方法灵敏度高、定量准确、方法简便、重现性好,能有效控制生血宝合剂的质量。

高效液相色谱法测定安神益脑丸中大黄素的含量

目的建立安神益脑丸中大黄素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Lichrospher ODS柱(4.6×250mm,5μm)分析柱,流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(85∶15),检测波长为254nm,流速为1.0mL.min-1,柱温为30℃。结果本法精密度高,稳定性好,大黄素进样量在0.21～1.05μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9998),平均加样回收率为99.59%,RSD=1.32%(n=9)。结论本方法简便,准确,重现性好,可作为该制剂的含量测定方法。

何首乌活性成分二苯乙烯苷对肝细胞脂质合成、分解及转运的调节作用研究

目的何首乌是具有良好的降脂活性的重要云药,二苯乙烯苷(TSG)是其主要活性成分,阐明二苯乙烯苷调节脂代谢的机制,为何首乌进一步更深层的研究奠定基础。方法采用含医用脂肪乳的培养液诱导肝L-02细胞48 h,建立肝细胞脂肪变性模型,给予二苯乙烯苷不同浓度刺激液进行培养,采用洛伐他汀、非诺贝特为阳性对照。24 h后测定肝细胞内甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)及其体内合成、分解途径中关键酶及蛋白含量。结果二苯乙烯苷可将脂肪化肝L-02细胞中甘油三酯含量降低约40%,胆固醇含量降低约55%;可使甘油三酯合成关键酶(DGAT)、胆固醇合成关键酶(HMG-Co A还原酶)含量降至正常细胞水平;可升高胆固醇分解关键酶(CYP7A)含量约50%,能将甘油三酯分解关键酶(HTGL)含量提升近8倍;同时可明显降低游离脂肪酸在体内的结合蛋白(L-FABP)、转运蛋白(FATP-4)的表达量,进而限制体内甘油三酯合成的原料供应。结论何首乌主要活性成分二苯乙烯苷对甘油三酯、胆固醇的合成、分解及转运的多个关键酶或关键蛋白均有良好的调控作用,具有较好的降脂活性。

基于中医药古籍的何首乌安全性及风险因素分析

中药何首乌Polygoni Multiflori Radix为蓼科植物何首乌Polygortum multiflorum Thunb.的干燥块根,临床应用记载首见于唐代,历代本草文献对何首乌的基原、功效、毒性、炮制、使用禁忌等多有论述。近年来,随着公众健康意识的增强,何首乌及其成方制剂在治疗和预防疾病中的使用更为广泛,涉及何首乌肝损伤的文献报道也逐渐增加,何首乌的安全性问题日益引起社会的关注。该文对历代本草中记载的何首乌毒性及用药风险因素进行了归纳分析,提出在安全性研究中应重点关注种植、炮制方法等对何首乌的成分和毒性的影响,为进一步的研究提供了线索。

制首乌提取液毒理学研究

目的研究制首乌提取液急性毒性及长期毒性。方法应用最大耐受量(MTD)测定法,对制首乌提取液进行小鼠急性毒性实验;大鼠长期毒性实验采用连续26周灌胃给药,分别于13和26周每组处死10和20只动物,其余动物停药进行恢复期观察4周,观察大鼠饮食、活动、体重、进食量、外观体征等情况,并进行血液、生化、病理学等检查。结果急性毒性实验未见动物死亡,MTD为144 g/kg,相当于人临床剂量(0.1 g/kg)的1440倍;长期毒性实验结果显示,制首乌提取液高剂量动物出现腹泻及肝毒性,中、低剂量组动物未出现严重中毒表现,各脏器无病理性变化。结论在本试验条件下,长期大剂量服用制首乌提取液对胃肠道具有一定影响,可导致大便稀软,并对肝脏有一定损害,但停药后可恢复。