基于对Klotho表达的调控作用探讨何首乌提取物二苯乙烯苷对慢性肾衰竭大鼠高脂血症的影响

目的:探讨何首乌提取物二苯乙烯苷(TSG)对慢性肾衰竭大鼠肾脏Klotho蛋白表达及血脂变化的影响。方法:40只大鼠随机分为假手术组、模型组、TSG组[20 mg/(kg·d)]、缬沙坦组[55 mg/(kg·d)],每组10只。采用5/6肾脏切除法建立慢性肾衰竭模型,分别灌胃给药4周,假手术组与模型组给予等剂量饮用水灌胃。全自动生化分析仪检测大鼠血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),及24 h尿蛋白定量(24 hUP),计算三酰甘油与高密度脂蛋白胆固醇比值(TG/HDL-C)。肾组织HE染色,光镜观察肾脏病理改变;免疫组化及Western blot检测肾组织Klotho蛋白及TGF-β1(转化生长因子-β1)表达。结果:与假手术组相比,模型组SCr、BUN及24 hUP水平均升高(均P<0.01);与模型组比较,TSG和缬沙坦组以上指标均下降(P<0.05或P<0.01),两给药组之间无明显差异(P>0.05)。模型组TC、TG、LDL-C、TG/HDL-C均明显高于假手术组(P<0.05或P<0.01),TSG组以上指标明显降低,与模型组相比有明显差异(P<0.05或P<0.01),缬沙坦无降低血脂作用。免疫组化和Western blot结果显示,模型组Klotho蛋白表达明显低于假手术组(P<0.01),TGF-β1表达明显高于假手术组(P<0.01);TSG及缬沙坦均可以升高Klotho蛋白表达(P<0.05或P<0.01),降低TGF-β1表达(P<0.05或P<0.01)。结论:TSG能调节慢性肾衰竭大鼠血脂异常,尤其是降低TG水平及TG/HDL-C,保护肾功能,其作用机制可能与升高Klotho蛋白表达相关。

何首乌提取液对犬心肌缺血再灌注损伤的预防作用实验研究

将30只健康犬随机分成三组。Ⅰ组对照组，Ⅱ组再灌注期间用药组，Ⅲ组全程用药组。造成急性心肌缺血再灌注损伤模型，测定静脉血中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性，脂质过氧化物（LPO）含量，心肌梗塞面积和梗塞程度，评估何首乌提取液对犬急性心肌缺血再灌注损伤的预防作用。结果发现，Ⅱ、Ⅲ组SOD，CAT活性升高，Ⅰ组则明显降低，LPO含量呈相反改变。Ⅱ、Ⅲ组心肌梗塞范围较Ⅰ组明显缩小，且程度明显减轻。提示：何首乌提取液对犬急性心肌缺血再灌注损伤具有良好的预防作用，值得进一步研究。

基于转运体的何首乌致肝损伤作用机制探讨

目的:阐明长期给药何首乌醇提物(PME)和水提物(PMW)致大鼠肝损伤的可能机制。方法:分别制备PME和PMW。雄性SD大鼠随机分为对照组、阳性对照异硫氰酸α-萘酯(ANIT 100 mg·kg)组、PMW组(15 g·kg)、PME组(12 g·kg)。PME、PMW组大鼠给药剂量相当于60 g·kg生药量,约为临床最大量的110倍,灌胃给药42 d,每日给药1次。ANIT组于第40天灌胃给药1次。采用试剂盒方法检测大鼠血清生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法检测大鼠肝脏病理变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定给药后大鼠肝脏组织中胆汁酸、胆红素代谢相关转运体有机阴离子转运多肽1a1(OATP1a1)、OATP1b2、多药耐药相关蛋白2(MRP2)、MRP3、胆盐外排泵(BSEP)、Na~+-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、P-糖蛋白(P-gp)mRNA表达水平。结果:与对照组比较,PMW组大鼠血清中AST水平显著降低(P<0.05),ALT和ALP水平显著升高(P<0.05);PME组大鼠血清中AST水平显著降低(P<0.05),ALT、TBA和ALP水平显著升高(P<0.01);PMW组于PME组TBIL水平差异无统计学意义。病理结果显示,PME、PMW给药后均可引起不同程度的肝损伤,并且PME组表现更为严重。qRT-PCR结果表明,PMW和PME可同时影响胆红素和胆汁酸代谢过程中摄取和外排转运体的表达,均可显著下调外排转运体MRP2、BCRP mRNA表达水平,上调摄取转运体OATP1a1、OATP1b2 mRNA表达水平;PME可显著下调BSEP、P-gp、NTCP mRNA表达水平;PMW可显著上调NTCP、BSEP、P-gp mRNA水平;两者对MRP3 mRNA表达水平影响差异无统计学意义。结论:经过长期诱导后,PME、PMW均可引起大鼠肝损伤,其作用机制与影响胆红素和胆汁酸相关转运体相关,PME和PMW引发肝损伤程度存在差异,可能与两者对具体转运蛋白的作用不同相关。

何首乌及首乌藤中二蒽酮类成分研究进展

何首乌和首乌藤分别为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根和藤茎,具有多种药理活性,为传统药用植物,且在我国分布广泛。然而,近年来关于何首乌及首乌藤所引起的肝损伤风险已经引起了国家药品监督管理局的高度关注。目前,何首乌和首乌藤的肝毒性成分尚不明确。文献报道何首乌中首次分离得到的二蒽酮类成分具有潜在的肝毒性,因此从该类成分的提取分离、在线鉴别、毒性评价和含量测定等方面对其进行综述,为该类成分与何首乌肝毒性的相关性研究提供参考。

何首乌中大黄素的提取方法研究

目的 :建立中药何首乌中大黄素的提取方法。方法 :以何首乌中大黄素为指标 ,用高效液相色谱法进行分析测定 ,系统考察不同溶剂、不同提取方式对大黄素提取率的影响 ,并用正交试验法进一步优选提取条件。结果 :用 7倍量 80 %乙醇回流提取 2次 ( 2h/次 )的提取方法可以获得较高的大黄素提取率。结论 :溶剂种类和提取方式对何首乌中大黄素的提取效率有较大影响。

德庆何首乌提取物对成骨细胞增殖的影响

[目的]观察何首乌提取物对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖及量效关系。[方法]在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同浓度的提取物,分别于加药后24、48和72 h用MTT法检测细胞的增殖。[结果]何首乌乙酸乙酯提取物能促进大鼠颅骨成骨细胞的增殖,试验中最佳作用浓度为0.1 mg/ml。[结论]何首乌乙酸乙酯提取物可促进成骨细胞的增值。

均匀设计优选微波辅助萃取何首乌中有效成分的研究

目的 研究微波辅助萃取何首乌的提取工艺。方法 以总蒽醌和 2 ,3,5 ,4′-四羟基二苯乙烯 - 2 - O-β- D -葡萄糖苷 (二苯乙烯苷 )的含量为指标 ,通过均匀设计的方法 ,采用连续微波辐射方法进行微波萃取工艺的优化。结果 微波功率、微波辐射时间、溶剂浓度、溶剂用量、原料浸泡时间对何首乌中有效成分的提取具有交互作用 ,优选出的最佳工艺条件为 :微波功率 340 W、微波辐射时间 10 min、溶剂乙醇浓度 95 %、固液比为 1∶ 5、浸泡时间 1h。结论 通过验证实验表明 ,所建立的数学模型是合理的。

乌龙丹流浸膏质量标准研究

目的:建立乌龙丹的质量控制方法.方法:应用TLC法对首乌、黄芪进行定性鉴别,应用高效液相色谱法测定葛根素的含量.色谱条件:流速1 ml/min,流动相:甲醇∶乙腈∶0.025 mol/L磷酸20∶4∶76,检测波长:250 nm.结果:薄层色谱定性方法简便、灵敏、专属性强;葛根素在0.052 5～0.735μg范围之内呈良好的线性关系,r=0.999 5.平均回收率99.18%,RSD=1.55%.结论:此法简便、准确,可有效控制产品质量.

何首乌炮制工艺的研究

目的:优化何首乌高压炮制工艺,比较其与传统炮制工艺的差异。方法:采用正交设计,以水浸出物、二苯乙烯苷、水溶性糖含量为指标优化何首乌高压炮制工艺;比较高压炮制品与传统炮制品各指标含量、高效液相指纹图谱、不同分子量糖百分含量比的差异。结果:高压炮制何首乌影响因素大小依次为蒸制温度>蒸制时间>干燥温度;高压炮制法和传统炮制法热动力过程不同,所炮制的何首乌无论是醇溶性成分变化还是多糖分子量变化都存在差异。结论:高压炮制法能否代替传统炮制法,需药效学的进一步验证。

超声-微波协同萃取何首乌中大黄素的工艺研究

[目的]研究超声-微波协同萃取法提取何首乌中的大黄素的最佳工艺条件。[方法]采用L9(34)正交试验考察了料液比、乙醇浓度、提取时间、提取功率对大黄素提取率的影响。[结果]超声-微波协同提取何首乌中大黄素的最佳工艺条件为:料液比1∶10(g/ml),乙醇浓度85%,提取时间40 min,提取功率60 W。在最佳工艺条件下,何首乌中大黄素的提取量为2.65 mg/g,该方法的提取加标回收率为96.4%,RSD为4.05%。[结论]利用超声-微波协同萃取何首乌中的大黄素,具有质量稳定、速度快、萃取率高等特点。

何首乌提取物对系膜增生性肾小球肾炎大鼠的治疗作用及对NF-κB表达的影响

目的:探讨何首乌提取物对系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)大鼠的治疗作用及对肾组织中核转录因子κB(NF-κB)表达的影响。方法:将40只Wistar大鼠按体质量随机分为对照组、模型组、何首乌提取物组、洛汀新组4组,每组10只。除对照组外,其余各组进行单侧肾脏切除,连续多次注射OX7抗体诱导MsPGN大鼠模型,何首乌提取物组与洛丁新组于注射抗体4周后分别灌胃何首乌提取物和洛丁新治疗,对照组和模型组给予同等体积的生理盐水灌胃,治疗6周后处死大鼠。测定模型制备前、注射抗体4周后、治疗6周后大鼠的24 h尿蛋白定量水平;收集大鼠血清,测定血清中肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)含量;肾脏切片后HE染色观察组织病理学改变;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测NF-κB p65和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达水平。结果:治疗6周后,与对照组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白定量水平及血清中SCr、BUN含量显著升高,肾组织可见明显的系膜基质增生和系膜细胞增殖,NF-κB p65和MCP-1 mRNA表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,洛汀新组和何首乌提取物组大鼠24 h尿蛋白定量水平及血清中SCr、BUN含量显著降低,肾脏组织病理病变程度减轻,NF-κB p65和MCP-1 mRNA表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:何首乌提取物对MsPGN大鼠有一定的治疗作用,阻断NF-κB信号活化可能是其机制之一。

何首乌提取物大鼠体内组织蓄积比较研究

目的:旨在通过考察何首乌70%乙醇提物(PME)和水提物(PMW)在大鼠体内不同组织的成分蓄积差异,推测何首乌引起不良反应的原因。方法:建立大鼠不同组织中二苯乙烯苷、大黄素和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)定量分析方法;并定量分析连续42 d灌胃PME和PMW后大鼠肝、肾、血浆和胆汁中3个成分的蓄积情况。结果:PME给药组大鼠体内不同组织中相同成分蓄积量明显高于PMW给药组。2个给药组中3个成分选择性蓄积的靶器官基本相同,二苯乙烯苷主要蓄积在肝脏中,大黄素主要蓄积在肾脏中,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷主要蓄积在胆汁中,而血浆中3个成分的含量均较低。结论:何首乌中二苯乙烯苷、大黄素和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷在大鼠体内的蓄积情况具有明显的组织选择性。与PMW给药组相比,PME组大鼠给药后体内蓄积成分含量高,可能是其导致临床不良反应的主要原因。其中,二苯乙烯苷大量蓄积于大鼠肝脏中,成为何首乌引发肝损伤的重要潜在毒性物质;大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷主要蓄积在胆汁中,有引发胆汁淤积的风险;大黄素主要蓄积部位为肾脏,其与肝毒性是否直接相关仍需进一步探讨。

何首乌中大黄素的含量测定

目的 :采用薄层扫描法测定何首乌中大黄素的含量。方法 :用索氏提取法 ,以氯仿为提取溶剂 ,展开剂为正己烷 -醋酸乙酯 -氯仿 -甲酸 (10∶3∶3∶0 25) ,检测波长为440nm。结果 :大黄素在0 1～5 0μg 范围内线性关系良好 (r=0.9995) ,平均回收率为105 73 % ,RSD为2 43 % ,斑点颜色在4h内基本稳定。结论 :本法为控制何首乌的内在质量提供了依据。

大鼠肝微粒体代谢对何首乌水提物肝细胞毒性的影响

目的:研究大鼠肝微粒体代谢对何首乌水提物肝细胞毒性的影响。方法:利用大鼠肝微粒体对何首乌水提物进行体外代谢;将经代谢前后的何首乌水提物溶液冷冻干燥,以不同浓度(相当于生药1.5、3、6、12 mg/m L)分别作用肝L02及Hep G2细胞24h及48 h,MTT法检测其对两种细胞活力的影响;HPLC测定何首乌水提物溶液中3种主要成分(二苯乙烯苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素)的含量变化。结果:何首乌水提物代谢后,随着其剂量的增加,对细胞活力的抑制作用逐渐增强,与何首乌水提物未代谢组相比,浓度为12 mg/m L的何首乌水提物代谢组毒性明显降低(P<0.01)。HPLC测定结果显示,何首乌水提物代谢组上述3种主要成分含量均有所降低。结论:何首乌水提物经大鼠肝微粒体代谢后对肝细胞毒性降低,与其主要成分含量降低之间的关系需要进一步研究。

《中华人民共和国药典》2020年版收载何首乌和制何首乌质量标准【鉴别】项的商榷

目的:讨论完善《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2020年版何首乌及制何首乌的薄层色谱鉴别项。方法:考察超声及加热回流2种不同的样品制备方式,以及用二氯甲烷-甲醇-甲酸、乙酸乙酯-石油醚-甲酸展开系统代替原标准中三氯甲烷-甲醇展开系统的可行性,同时比较了不同显色条件。结果:2种制备方式制得的样品在相同的展开条件下展开结果并没有明显差异,超声提取操作更加简便;以二氯甲烷-甲醇-甲酸(5∶1∶0.3)和石油醚-乙酸乙酯-甲酸(5.0∶1.0∶0.3)代替三氯甲烷-甲醇展开系统后,喷10%硫酸乙醇显色剂并在紫外灯365 nm下检视,薄层色谱板上斑点明显增多且分离效果好,较《中国药典》2020年版何首乌和制何首乌薄层色谱鉴别条件更理想。结论:改进后的方法毒性低、简便易行、可行性良好,为进一步完善《中国药典》2020年版何首乌和制何首乌质量标准提供参考。

制何首乌质量标准的初步研究

用偏光显微镜观察了淀粉粒在何首乌炮制过程中的变化，并结合测定水溶性浸出物含量，能有效地控制何首乌炮制质量。

响应面法优化制首乌多糖提取工艺的研究

目的:确定制首乌多糖的优化提取工艺。方法:以制首乌多糖提取率为指标,在单因素试验基础上选取试验因素与水平,采用响应面分析法优化提取工艺条件,考察料水比、浸提温度、浸提时间三因素对制首乌多糖提取率的影响。结果:制首乌多糖的最佳提取工艺为:料水比1:19.6(W:V),提取温度89℃,提取时间2.51h。在最佳工艺条件下,制首乌多糖的实际1次提取率可达9.306%。结论:该工艺提取率高、操作简便,易于工业化生产。

基于斑马鱼模型的何首乌水提物及其主要成分的肝毒性研究

目的研究何首乌水提物及主要的单体成分对斑马鱼幼鱼的肝毒性。方法选用72 hpf(hours post fertilization)的肝脏转基因斑马鱼幼鱼(lfabp:ds Red)为实验动物,以对乙酰氨基酚(APAP)为阳性药,同时给药不同浓度的何首乌水提物及主要单体成分2 d后,从体视显微镜下对斑马鱼幼鱼生存情况、肝脏形态进行观察,计算肝脏及卵黄囊的尺寸比,荧光显微镜下观察斑马鱼幼鱼肝脏荧光发光情况,并通过与对照组比对判断各成分肝毒性情况。结果 2 mg·mL^(-1)的何首乌水提物、2μg·mL^(-1)大黄素给药1 d后,斑马鱼全部死亡,20μg·mL^(-1)的大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷给药2 d后,斑马鱼全部死亡,其他单体成分及上述成分剩余浓度组斑马鱼未出现死亡;8 mM APAP组及10、20μg·mL^(-1)芦荟大黄素肝脏颜色变暗,且与对照组相比,肝脏尺寸明显减小(P<0.01),卵黄囊保留尺寸明显增加(P<0.01),肝脏的荧光表达减弱。其余各组及1μg·mL^(-1)芦荟大黄素组未见明显影响。结论 10、20μg·mL^(-1)芦荟大黄素对斑马鱼幼鱼具有肝脏毒性,何首乌水提物及其他单体成分在致死剂量下未表现出明显的致肝脏损伤作用。

首乌提取物抑制人血清蛋白糖基化反应研究

[目的]研究首乌提取物对人血清蛋白糖基化的抑制效果。[方法]选择不同浓度的首乌提取物混入人血清蛋白-葡萄糖反应体系中得到不同的糖基化产物。[结果]加入首乌提取物抑制剂的糖基化人血清蛋白的自由氨基含量减少缓慢,空间结构发生改变,疏水基团也不易暴露;从抗氧化性角度而言,ABTS+·、DPPH·、超氧阴离子自由基清除能力和还原能力均降低,说明糖基化后期产物生成量减少。[结论]该研究为首乌提取物在人类医药健康领域的开发利用提供理论依据。

何首乌多糖提取方法的比较研究

目的:比较不同提取方法对生何首乌多糖的影响,同时初步探索了热水提取生何首乌和制何首乌多糖的差异。方法:以何首乌为原料,分别通过热水提取法、超声提取法、微波提取法制得多糖,并对不同提取工艺下多糖的得率、总糖含量、蛋白含量、重均分子量(Mw)、单糖组成和2,2-二苯基-1-苦基肼(DPPH)自由基清除能力进行比较和研究。结果:不同提取方法所得何首乌多糖得率依次为:微波提取法[微波提取何首乌粗多糖(M-PMP)]>热水提取法[热水浸提何首乌粗多糖(H-PMP)]>超声提取法[超声提取何首乌粗多糖(U-PMP)];U-PMP的蛋白含量最高,Mw与其他多糖也有明显差别;单糖组成结果显示,不同提取方法的何首乌多糖中单糖组成相同,主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,但单糖组成的摩尔比有所不同。结论:3种提取方法所得的多糖成分存在一定差异,且不同提取方法得率差异明显,其中M-PMP得率最高;同时发现生何首乌和制何首乌中多糖成分可能存在一定差异,有待进一步验证。