猫爪草提取物对临床分离结核分枝杆菌蛋白质组表达的影响

猫爪草已经临床治疗耐药结核病,但其作用机理和有效成分尚不清楚。为研究其可能的作用靶标,采用双向电泳技术比较分析猫爪草提取物作用前后结核分枝杆菌临床分离株的全细胞蛋白表达差异。发现22个蛋白质斑点具有明显差异,对其中3个表达明显下调的蛋白质斑点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析,获得了肽质量指纹图谱。数据库检索分析确定这3个点代表的蛋白质分别为硫代硫酸硫转移酶,延长因子Ts和热休克蛋白X,分别参与厌氧硫代谢、蛋白质翻译和蛋白质折叠分泌、转录调控等过程。这有助于深入研究猫爪草对结核分枝杆菌的作用机理,也为发现新的抗结核病治疗药物靶标提供了线索。

猫爪草提取物对结核分枝杆菌临床分离株的可能作用靶标

利用双向电泳技术,对猫爪草提取物作用前后的结核分枝杆菌临床分离株的全细胞蛋白表达图谱进行差异比较和分析,发现其中22个蛋白质斑点的浓度具有差异,利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱技术,对其中4个表达明显下调和1个明显上调的蛋白质斑点进行分析鉴定,获得5个明确的肽质量指纹图谱.通过数据库检索,确定这5个蛋白质分别为S-腺苷甲硫氨酸合成酶、吲哚-3-甘油磷酸合酶、烯酰-CoA水合酶、琥珀酰辅酶A合成酶和60 kD的分子伴侣2.其中前4个分子是首次报道参与结核分枝杆菌的重要生理活动.该结果有助于了解猫爪草提取物对结核分枝杆菌生理的影响,为进一步确定中药猫爪草提取物对结核分枝杆菌的作用靶标和机理提供了基础.

mfn2基因在猫爪草皂苷、红三叶异黄酮治疗乳腺癌中的作用机制研究

目的:研究mfn2基因在猫爪草皂苷、红三叶异黄酮抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖及诱导其凋亡中的作用。方法:采用不同浓度的猫爪草皂苷和红三叶异黄酮分别处理MCF-7细胞24,48及72h,进行体外细胞培养,用实时荧光定量PCR法检测mfn2基因的相对表达情况。结果:高浓度的猫爪草皂苷(100 mg·L^(-1))作用MCF-7细胞48h后,明显促进mfn2基因的表达,并且随时间延长更加明显;红三叶异黄酮在作用MCF-7细胞48,72 h后,显著抑制mfn2基因的表达。结论:高浓度的猫爪草皂苷可能是通过促进mfn2基因的表达,来抑制MCF-7细胞增殖及诱导其凋亡,红三叶异黄酮的作用机制有待于进一步研究。

中药猫爪草的研究进展

目的:介绍猫爪草的研究概况,展望其开发前景。方法:采用文献追踪法,对猫爪草的化学成分、药理作用以及临床应用等方面进行介绍。结果和结论:猫爪草化学成分丰富,有确切的抗结核和抗肿瘤的作用,其有效成分有待深入研究,有望将猫爪草开发成抗结核及肿瘤的新型药物。

中药猫爪草化学成分及质量控制研究进展

目的:探讨猫爪草化学成分及质量控制研究进展,为建立和完善猫爪草的质量标准提供参考。方法:查阅资料,分析整理。结果:猫爪草的化学成分研究取得了重要的进展,质量控制研究仍比较薄弱。结论:中药猫爪草在质量控制方面,有待进一步的系统研究。

猫爪草对肺结核患者外周血淋巴细胞颗粒裂解肽表达及其T淋巴细胞杀菌能力的影响

目的研究猫爪草对肺结核患者外周血淋巴细胞颗粒裂解肽表达的影响及其对肺结核患者机体细胞毒性T淋巴细胞杀菌能力的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测猫爪草对外周血淋巴细胞作用的最适浓度;Real-time PCR方法检测最适剂量的猫爪草对结核病人外周血淋巴细胞颗粒裂解肽mRNA表达水平的影响。结果 MTT结果显示,当猫爪草的作用浓度为100mg·L^(-1)时,有很明显的诱导作用,能诱导结核菌表达,外周血淋巴细胞颗粒裂解肽(GLS)的表达升高,进而感染结核病人体内的结核菌;当药物浓度浓度为200 mg·L^(-1)时能高效诱导结核休眠菌活化,外周血淋巴细胞GLS mRNA的表达持续升高,对结核菌的杀伤能力更强。结论猫爪草可能通过提高颗粒裂解肽的表达,增强机体对致病菌的杀伤作用,从而达到治疗效果。

猫爪草提取物离子敏感型原位凝胶肺部药物释放及局部安全性初步评价

目的对制备的猫爪草提取物离子敏感型原位凝胶（RTRE-ISG）进行肺部滞留性、安全性及局部药物浓度的评价。方法以海藻酸钠作为辅料,猫爪草提取物（70%乙醇）作为溶剂,在室温下磁力搅拌使其充分溶胀,制备得到RTRE-ISG。大鼠通过气管介入给药后,测定肺部灌洗液中的炎症因子和致纤维化因子水平,筛选出相对安全的处方;再采用Cy5.5作为荧光染料,借助小动物活体成像系统对RTRE-ISG肺部滞留性进行评价;最后运用改良肺泡灌洗技术,对大鼠肺部进行灌洗,测定局部药物浓度。结果 1%海藻酸钠RTRE-ISG在肺部安全性较好,荧光活体成像技术显示其可在肺部滞留120~144 h,肺部局部药物浓度的测定显示1%海藻酸钠RTRE-ISG在5 h释放达到峰值为5.24μg/m L,144 h药物浓度为0.08μg/m L。结论 RTRE-ISG在肺部可滞留120 h以上,可为中药治疗肺结核提供一种新型的缓释制剂。

猫爪草多糖对小鼠腹腔巨噬细胞活力的调节作用

此次研究旨在探讨猫爪草多糖对体外培养的正常状态下的原代小鼠腹腔巨噬细胞活性的调节作用,以及小鼠腹腔巨噬细胞在体外培养条件下的活力变化情况。以原代培养的小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,设对照组(加入100μL DMEM培养基)和实验组(分别加入25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL, 200μg/mL,400μg/mL的猫爪草多糖),分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、CCK-8法、乳酸脱氢酶释放法和中性红吞噬实验检测不同浓度的猫爪草多糖对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞活力的调节作用;同时设置24 h、36 h、48 h、60 h和72 h的不同培养时间,观察在体外培养条件下,小鼠腹腔巨噬细胞活力的变化情况。结果表明:与对照组相比,不同浓度的猫爪草多糖均能增强小鼠腹腔巨噬细胞的活力,且猫爪草多糖浓度在100~400μg/mL的细胞活力极显著增强(p<0.01)。此外,各处理组的巨噬细胞在体外培养24~72 h不更换培养液的条件下,48 h处活性最佳。体外培养条件下,一定浓度的猫爪草多糖可以激活小鼠腹腔巨噬细胞,通过猫爪草多糖激活巨噬细胞,可能是猫爪草发挥提升机体免疫力的作用机制之一。此外,体外培养的巨噬细胞虽能存活长达一个月,但仍有一个最佳活力时间。