RP-HPLC双波长法同时测定熟地黄中4种成分的含量

目的建立RP-HPLC双波长同时测定熟地黄中4种成分含量的方法。方法色谱柱为WatersSunfire C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-体积分数0.2%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长为λ1=210 nm和λ2=330 nm;流速为1.0 mL.min-1;柱温为30℃。结果梓醇、麦角甾苷、吉奥诺苷B1和马替诺皂苷质量浓度分别在125.0～2 000.0 mg.L-1(r=0.999 9)、11.0～176.0mg.L-1(r=0.999 9)、15.0～240.0 mg.L-1(r=0.999 9)和7.5～120.0 mg.L-1(r=0.999 8)内与峰面积呈良好的线性关系。加样回收率在97.5%～101.3%内。结论该方法灵敏,操作简便,结果可靠,可用于熟地黄药材的质量控制。

熟地黄多糖对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠的免疫调节作用研究

【目的】研究熟地黄多糖对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠的免疫调节作用,为熟地黄多糖用于临床治疗免疫低下疾病或开发相关保健食品提供科学依据。【方法】选用36只昆明系小鼠,随机分为6组:空白对照组、免疫抑制模型组、黄芪多糖组及熟地黄多糖低、中、高(分别灌胃熟地黄多糖50、100、200 mg/kg)剂量组(PRRPL、PRRPM、PRRPH),每组6只。除空白对照组外,其余各组小鼠均腹腔注射80 mg/kg环磷酰胺,建立免疫抑制模型。造模后各组小鼠分别灌胃相应药物,1次/d,连续15 d,测定小鼠体重、腹腔巨噬细胞吞噬能力、免疫器官系数、脾淋巴细胞增殖及细胞周期、血清细胞因子含量,观察脾脏和胸腺组织形态学、肠道派氏节数目等免疫指标。【结果】与空白对照组相比,模型组脾脏指数极显著升高(P<0.01),脾脏红髓、白髓界限不清,脾淋巴细胞数量减少;胸腺指数降低,皮质、髓质不清,结构破坏;脾淋巴细胞增殖能力、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力及血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、γ-干扰素(INF-γ)水平均显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01);脾淋巴细胞滞留在G0/G1期。与模型组相比,熟地黄多糖能极显著降低小鼠的脾脏指数(P<0.01),缓解环磷酰胺造成的脾脏组织损坏,熟地黄多糖各剂量组对脂多糖(LPS)诱导的脾淋巴细胞增殖具有极显著的促进作用(P<0.01),熟地黄多糖各剂量组能显著或极显著提高免疫抑制小鼠血清IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、INF-γ水平(P<0.05;P<0.01),缓解淋巴细胞周期滞留,且高剂量组熟地黄多糖能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能(P<0.05)。造模前后及熟地黄多糖对肠道派氏结数量均无显著影响(P>0.05)。【结论】熟地黄多糖能提高免疫抑制小鼠的免疫功能,可用于治疗免疫低下类疾病药物和保健品的开发。

百合地黄汤药理作用研究进展

百合地黄汤始载于《金匮要略》,由鲜百合七枚、生地黄汁一升组成,为治疗百合病之主方,具有养阴清热、补益心肺之效。百合地黄汤发挥药理作用的物质基础主要涉及百合甾体皂苷、百合多糖、地黄梓醇等,具有抗抑郁、抗焦虑、镇静催眠、抗肿瘤等作用。参考文献41篇。

生地黄与熟地黄中5个苷类成分和总多糖的含量比较

建立测定地黄中梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷及总多糖含量的方法,比较生地黄与熟地黄中成分含量的差异。采用HPLC法同时测定了生地黄和熟地黄中梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量。采用UV法测定了生地黄和熟地黄中总多糖的含量。结果表明,生地黄炮制成熟地黄后,梓醇、地黄苷D、益母草苷和毛蕊花糖苷的含量均出现不同程度的降低,而异毛蕊花糖苷和总多糖的含量增加。本文所建立的同时测定梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷含量的方法及总多糖的含量测定方法,可用于控制生地黄和熟地黄的质量。不同炮制方法对熟地黄中上述成分的含量产生一定影响。

熟地多糖提取物对小鼠免疫活性影响

目的从熟地黄中提取出多糖，并对其免疫活性进行研究。方法采用水提醇沉法提取熟地多糖，苯酚-硫酸分光光度法测定多糖的含量。分别用绵羊红细胞（SRBC）和卵清蛋白为抗原给小鼠注射后，将熟地多糖分为3个剂量[50，100，200mg／kg·d）]灌服小鼠7d，加强免疫后，检测相应抗体生成水平和血清中自细胞介素-2（IL-2）生成水平，评价其免疫活性。结果熟地多糖的含量为1．45％，回收率为98．53％，相对标准偏差（RSD）为2．28％，线性范围为5～40μg／ml。中剂量实验组SRBC抗体水平（P〈0．05）和卵清抗体水平显著高于对照组（P〈0．01），IL-2激发水平显著高于对照组（P〈0．05）。结论熟地多糖对正常小鼠机体免疫有增强作用。

熟地黄粗多糖对血虚模型小鼠胸腺和脾脏组织形态的影响

目的:探讨熟地黄粗多糖对血虚模型免疫器官形态的影响。方法:以放血与环磷酰胺并用致小鼠血虚模型为研究对象,将模型动物分为5组,在造模的同时给药,分别灌服大、中、小剂量的熟地黄粗多糖溶液、当归补血口服液和同体积生理盐水,另设一组空白对照组,每天给药1次,连续给药10 d,实验结束时取胸腺和脾脏作病理切片。结果:熟地黄粗多糖组可显著对抗造模所致动物胸腺和脾脏的萎缩,显著增加模型动物胸腺皮质厚度和皮质细胞数,显著增加脾小结大小和皮质细胞数。结论:怀熟地黄多糖可拮抗血虚模型小鼠胸腺及脾脏的萎缩。

熟地黄多糖对H_(22)、S180荷瘤小鼠抑瘤作用及存活时间的影响

目的:探讨熟地黄多糖对H22腹水瘤、S180肉瘤小鼠抑瘤作用及生存时间的影响。方法:观察熟地黄多糖对H22、S180荷瘤小鼠的抑瘤率、生命延长率、肝/体比、脾脏指数等指标的影响。结果:与模型组比较,熟地黄多糖组抑瘤率、生命延长率、肝/体比、脾脏指数明显改善(P<0.05)。结论:熟地黄多糖能明显地抑制H22、S180肿瘤生长,延长荷瘤小鼠存活时间,并能保护小鼠的肝脏、脾脏和体质量。

熟地黄多糖对荷瘤小鼠肿瘤组织Cyt-C及Caspase-3基因表达的影响

目的:探讨熟地黄多糖对荷瘤小鼠肿瘤组织细胞色素C(Cytochrome C,Cyt-C)及天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinases,Caspase-3)基因表达的影响。方法:采用Real-time PCR法检测肿瘤组织中Cyt-C m RNA及Caspase-3 m RNA的表达情况,采用Western blot法检测Cyt-C及Caspase-3蛋白质的表达情况。结果:熟地黄多糖低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性对照组和联合用药组肿瘤组织中Cyt-C和Caspase-3 m RNA的表达量分别是模型对照组的0.46、0.76;4.82、1.26;0.43、0.60;13.91、4.65;20.17、9.23倍。Cyt-C和Caspase-3蛋白质的表达量分别是模型对照组的0.31、0.90;1.82、1.46;0.62、0.87;2.60、1.54;2.80、1.60倍。结论:熟地黄多糖能促进肿瘤组织中Cyt-C和Caspase-3基因的表达。

熟地黄多糖对H22荷瘤小鼠细胞色素C和Caspase-3蛋白的影响

目的:探讨熟地黄多糖对H22荷瘤小鼠线粒体凋亡途径中细胞色素C和Caspase-3的作用机制。方法:用H22肝癌腹水瘤株接种小鼠右侧腋下构建实体瘤模型,随机分组为模型组、环磷酰胺组、熟地黄多糖组,连续灌胃给药8 d。剥离肿瘤组织,应用免疫组化法分别检测肿瘤组织中细胞色素C与Caspase-3的表达情况。结果:熟地黄多糖可使H22瘤小鼠肿瘤组织中细胞色素C和Caspase-3的表达水平明显增高,与模型组比较差异显著(P<0.01)。结论:熟地黄多糖能上调H22荷瘤小鼠肿瘤内细胞色素C和Caspase-3的表达,其机制可能是促进线粒体释放细胞色素C及其Caspase-3的激活,启动线粒体凋亡途径,从而诱导肿瘤细胞凋亡来发挥抗肿瘤作用。

熟地黄多糖对环磷酰胺诱导小鼠的抗突变作用研究

目的:探讨熟地黄多糖的抗突变作用。方法:采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠骨髓细胞染色体畸变试验、小鼠骨髓细胞姐妹染色单体交换试验方法评价熟地黄多糖的抗突变作用。结果:熟地黄多糖对环磷酰胺诱导的小鼠微核率、染色体畸变率、姐妹染色单体交换率具有抑制作用。结论:熟地黄多糖具有抗突变活性。

基于古法特色炮制前后的地黄饮片及其多糖对衰老模型大鼠的抗氧化作用比较

目的:比较地黄特色炮制过程中鲜地黄、干地黄、熟地黄及其炮制前后多糖对衰老模型大鼠的抗氧化作用差异,为地黄的加工炮制提供参考。方法:按照古法特色炮制方法制备熟地黄样品,保留加工过程中鲜地黄、干地黄样品,并采用水提醇沉法提取鲜地黄和熟地黄中的粗多糖。将96只大鼠分为空白组(水)、模型组(水)、阳性对照组[维生素C,100 mg/(kg·d)]、鲜地黄组[700mg/(kg·d)]、干地黄组[135 mg/(kg·d)]、熟地黄组[135 mg/(kg·d)]、鲜地黄多糖组[1 400 mg/(kg·d),以鲜地黄质量计]和熟地黄多糖组[270 mg/(kg·d),以熟地黄质量计],每组12只。除空白组外,其余各组大鼠均于颈背部皮下注射D-半乳糖[125 mg/(kg·d)]复制亚急性衰老模型,并于造模同时灌胃给药,每日给药1次,连续给药56 d。末次给药后,测定大鼠肝、脑、肾、脾、心脏、胸腺指数,并测定其血清和肝、脑、肾组织中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、过氧化氢酶(CAT)活力、丙二醛(MDA)含量。结果:与空白组比较,模型组大鼠各脏器指数以及血清和脑、肝、肾组织中T-AOC和SOD活力、CAT活力均显著降低(P<0.05或P<0.01),MDA含量均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,鲜地黄组大鼠脑、肝、肾指数以及血清和肾组织中SOD活力升高不显著(P>0.05);干地黄组大鼠肾指数以及血清和脑组织中T-AOC,血清和肝、肾组织中SOD活力升高不显著(P>0.05);鲜地黄多糖组大鼠肾指数以及血清和脑组织中T-AOC,血清中SOD活力升高不显著(P>0.05);其余各组大鼠脏器指数,血清和组织中TAOC、SOD、CAT活力均显著升高(P<0.05或P<0.01);各给药组大鼠血清及脑、肝、肾组织中MDA含量均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与鲜地黄组比较,干地黄组大鼠血清中T-AOC显著降低(P<0.01),其余测定指标差异无统计学意义(P>0.05);熟地黄组大鼠肾、脾指数显著升高(P<0.05),肾组织中T-AOC,血清和脑、肾组织中SOD活力,脑、肝组织中CAT活力均显著升高(P<0.05或P<0.01),脑、肝组织中MDA含量显著降低(P<0.01);熟地黄组大鼠脑和肝组织中CAT活力显著高于阳性对照组(P<0.01)。与鲜地黄多糖组比较,熟地黄多糖组大鼠脾、肾指数显著升高(P<0.05或P<0.01),血清和脑、肝、肾组织中T-AOC、SOD活力、CAT活力均显著升高(P<0.05或P<0.01)并且其脑、肝、肾组织中T-AOC和CAT活力均显著高于阳性对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:在提高衰老模型大鼠脏器指数以及增强其血清和脑、肝、肾组织中抗氧化酶活力方面,熟地黄优于鲜地黄和干地黄,熟地黄多糖优于鲜地黄多糖。古法特色炮制地黄过程中多糖的改变提高了其抗氧化能力。

三物黄芩汤组分(群)配伍在大鼠肝微粒体孵育模型中的相互作用

目的研究三物黄芩汤组分(群)配伍在大鼠肝微粒体孵育模型中的相互作用。方法以高丽槐素和麻黄碱为内标,HPLC法分别同时测定7个时间点(0、15、30、45、60、90、120 min)全方组分(群)配伍及单味药材部位(群)中黄芩总黄酮(黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A)和苦参总生物碱(氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱)的含有量,并计算其体外代谢率。结果在全方组分(群)配伍中,黄芩苷、汉黄芩苷含有量先升高(0~0.5 h)后降低(0.5~2.0 h),黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A含有量呈升高趋势(0.5 h内更明显);各生物碱代谢稳定平缓,在20 min内达到平衡。结论三物黄芩汤中黄芩总黄酮与苦参总生物碱、地黄总多糖配伍后,可改善其生物利用度,增强其药效。

酶-超声提取地黄多糖及其抗氧化性研究

选用市售地黄为原料,利用纤维素酶解法结合热水浴提取法研究了提取温度、提取时间、提取液pH以及液料比对多糖提取量的影响.通过单因素试验得出地黄多糖提取工艺在液料比1∶30的条件下的最佳参数为:提取温度40℃,提取时间25 min,提取液pH为6.0,纤维素酶添加量为3.00%.在最佳参数组合下,多糖提取率为21.4%,地黄多糖对.OH的还原率为43.5%,此方法是简单、快捷和高效的提取方法.

地黄炮制前后粗多糖的提取和总糖含量测定

目的:为有效开发和利用地黄中多糖类成分,比较地黄炮制前后其含量的变化。方法:采用水提醇沉法提取地黄多糖,用比色法对粗多糖中总糖进行含量测定。结果:生地黄和熟地黄中粗多糖的提取率分别为17.14%和26.72%,总糖含量分别为44.93%和16.29%。结论:地黄炮制前后多糖含量存在差异。

九蒸九晒熟地黄多糖影响Lewis肺癌荷瘤小鼠细胞凋亡发生机制的研究

目的:探讨九蒸九晒熟地黄多糖(RGP)对Lewis肺癌细胞凋亡的作用机制,为临床治疗提供实验依据。方法:建立Lewis肺癌小鼠模型,给予不同剂量RGP,给药3 w,利用流式细胞术检测凋亡;Western blot检测凋亡蛋白;ELISA检测免疫指标。体外实验RGP以不同浓度作用于Lewis肺癌细胞。流式细胞术检测细胞凋亡;MTT法检测细胞增殖;荧光染色检测线粒体膜电位;Western blot检测凋亡蛋白。结果:动物实验中,与模型组比较,RGP组的凋亡指数、凋亡蛋白(Bax、Caspase)表达以及免疫指标均显著升高(P<0.01),Bcl-2表达显著降低(P<0.01),且呈剂量依赖性。细胞实验中,RGP组细胞凋亡率、凋亡蛋白(Bax、Caspase)表达显著升高(P<0.01);肺癌细胞增殖减少;线粒体膜电位降低,Bcl-2表达显著降低(P<0.01),且呈浓度依赖性。结论:RGP可抑制Lewis肺癌细胞增殖,促进凋亡,这一系列反应可能与诱发凋亡蛋白和增强免疫应答有关。

熟地黄多糖含量测定方法研究

[目的]建立熟地黄中多糖含量的测定方法。[方法]利用苯酚硫酸法、蒽酮硫酸法、3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)分别测定熟地黄中的多糖含量,对检测结果进行比较。[结果]苯酚硫酸法、蒽酮硫酸法、DNS法的平均回收率分别为100.5%、99.8%、100.6%,RSD分别为1.6%、1.6%、1.5%,测得的多糖质量分数分别为14.80、14.66、17.46 mg/g。[结论]苯酚硫酸法的结果更可靠,且操作相对简单易行,可考虑作为熟地黄多糖含量测定的首选方法。

地黄多糖铁(Ⅲ)配合物的合成及一般性质研究

从地黄中提取地黄多糖,尔后与三氯化铁反应合成地黄多糖铁配合物(RPC),并对RPC的一般理化性质进行测定. RPC是深棕褐色无定型粉末,易溶于水,且水溶液呈中性. RPC在pH值3～12范围内不沉淀,不水解. RPC的水溶液中不存在游离的铁(Ⅲ),且RPC中的铁(Ⅲ)易被抗坏血酸还原成铁(Ⅱ). 结果表明:铁(Ⅲ)与地黄多糖形成了稳定的配合物(RPC),地黄多糖铁配合物有望开发成为理想的口服补铁剂.

熟地黄多糖靶向TNF-α/STAT3通路抑制鼻咽癌增殖转移的机制

目的探讨熟地黄多糖耙向肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)/信号转导及转录活化因子3(activator of transcription 3,STAT3)通路抑制鼻咽癌增殖转移的机制。方法以鼻咽癌CEN1细胞为研究对象,分别以50μg/m L(A组)、100μg/m L(B组)、400μg/m L(C组)和800μg/m L(D组)浓度的熟地黄多糖溶液处理,MTT实验绘制处理前、处理24、48和72 h的CEN1细胞增殖曲线,同期采用RT-PCR测定各组TNF-α、STAT3和Janus蛋白酪氨酸激酶(Janus protein tyrosine kinase,JAK)的mRNA转录水平,并采用Transwell小室体外迁移实验观察处理前和处理72 h CEN1细胞转移能力的变化。结果不同浓度的熟地黄多糖处理,对鼻咽癌CEN1细胞的增殖具有抑制作用,且呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性。不同浓度的熟地黄多糖处理,对鼻咽癌CEN1细胞的转移具有抑制作用,且呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性。不同浓度的熟地黄多糖处理鼻咽癌CEN1细胞,B组、C组和D组TNF-α、STAT3和JAK的mRNA相对表达量随着时间的延长而降低,且其对TNF-α、STAT3和JAK的mRNA转录水平调控效果具有明显的剂量依赖性。结论熟地黄多糖抑制鼻咽癌增殖转移具有一定的时间和剂量依赖性,而下调TNF-α、STAT3和JAK可能为其抑制鼻咽癌增殖转移的机制。

熟地黄多糖的提取及其体外抗氧化活性研究

目的研究熟地黄多糖的最佳提取方法,评估熟地黄多糖的体外抗氧化活性,为进一步的体内活性研究提供依据。方法采用水提醇沉法、微波提取法和超声波提取法提取熟地黄多糖,筛选出得率最高的方法。通过Sevag法除去粗多糖中的蛋白成分,透析法除去小分子,活性炭除色素后,得到精制多糖,苯酚-硫酸比色法测定多糖含量。通过4种不同的抗氧化体系以及细胞水平的实验,检测了多糖的体外抗氧化活性,包括羟自由基、超氧阴离子自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基的清除效果、总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)、对细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH-px)活力以及丙二醛(MDA)水平的影响。结果精制的熟地黄多糖(Rehmanniae Radix Preparata polysaccharides,RGP)清除羟自由基EC_(50)值为1.51 mg/mL,清除超氧阴离子自由基EC_(50)值为3.04 mg/mL,清除DPPH自由基的EC_(50)值为0.26 mg/mL,其总抗氧化活性为18.85±0.80 U/mg。与阳性对照2,6-二叔丁基对甲酚(2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol,BHT)相比,熟地黄多糖具有较好的DPPH自由基清除作用、一定的羟自由基和超氧阴离子自由基的清除能力,并且与多糖浓度呈现出剂量效应。而且熟地黄多糖能够有效提高H2O2所导致的SOD和GSH-px活力降低的情况,以及降低H_(2)O_(2)诱导的MDA水平升高的情况。熟地黄多糖还具有很好的总抗氧化能力。结论传统中药熟地黄的多糖成分具有良好的体外抗氧化活性,具有开发为天然抗氧化剂和食品保健品的潜在价值。

RP-HPLC法同时测定熟地黄中5个核苷类成分的含量

目的:建立同时测定熟地黄中次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷和腺苷5个核苷类成分的RP-HPLC法。方法:采用Dia-monsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.04 mol·L-1磷酸二氢钾溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长254 nm;柱温30℃。结果:次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷和腺苷浓度分别在1.0～16.0μg·mL-1(r=0.9999)、5.0～80.0μg·mL-1(r=0.9999)、1.0～16.0μg·mL-1(r=0.9997)、1.25～20.0μg·mL-1(r=0.9999)、1.0～16.0μg·mL-1(r=0.9999)范围内线性良好。加样回收率为98.1%～101.0%。结论:该方法可以用于熟地黄中次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷和腺苷的含量测定。