饲料中添加柴胡及其提取物对锦鲤幼鱼生长、生理生化、肝脏抗氧化及抗菌能力的影响

试验旨在研究饲料中添加柴胡及其提取物对锦鲤幼鱼生长、生理生化、肝脏抗氧化及抗菌能力的影响。选取初始体重(21.0±0.5)g的锦鲤幼鱼360尾,随机分为3组,每组3个重复,每个重复40尾锦鲤幼鱼。K组、C组和T组锦鲤幼鱼分别饲喂基础饲料、基础饲料+5‰柴胡生粉和基础饲料+5‰柴胡提取物。试验期14 d。结果显示,锦鲤幼鱼血清中,14 d时,C组的溶菌酶(LZM)和C组、T组的碱性磷酸酶(AKP)活性显著高于0 d,并显著高于K组(P<0.05)。锦鲤幼鱼肝脏中,14 d时C组的LZM、酸性磷酸酶(ACP)和T组的AKP活性显著高于0 d(P<0.05)。14 d时,C组的超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化能力(T-AOC)显著高于0 d(P<0.05),丙二醛(MDA)含量低于0、7 d。攻毒试验中,24 h内K组锦鲤幼鱼的死亡率为41.7%;C组死亡率为18.3%,保护率为56%;T组死亡率为21.7%,保护率为48%。C组锦鲤幼鱼血清中48 h的白细胞介素-13(IL-13)含量显著高于24、96 h(P<0.05);C组、T组48 h的免疫球蛋白M(IgM)含量显著高于24 h(P<0.05)。肝脏中,C组锦鲤幼鱼48 h的白细胞介素-4(IL-4)、IL-13和IgM含量显著高于24 h,IL-13含量显著高于K组(P<0.05)。研究表明,饲料中添加柴胡及其提取物投喂14 d可以有效提高锦鲤幼鱼的生理生化指标和抗维氏气单胞菌能力,但两者的作用时间和作用效果具有差异性,柴胡的作用效果更为突出。

中药柴胡活性成分提取新技术的研究进展

对近年来柴胡化学成分提取新技术研究进行了归纳总结,并对今后柴胡活性成分提取技术进行了展望,为中药柴胡现代化生产技术的发展提供参考。

柴胡药物化学成分提取及活性成分质量分数测定

柴胡为临床常用药材之一,具有解表退热、疏肝解郁、升阳举气之功效。为了探索柴胡中的化学成分,采用试管反应法、纸反应法、显色法等,对柴胡水、75%乙醇提取物中的主要活性成分进行化合物类型预测与质量分数测定。结果表明:柴胡中可能含有皂苷、糖类、氨基酸、黄酮类、甾体、三萜类等化学成分。柴胡水和75%乙醇提取物中皂苷的质量分数分别为9.05%和29.46%,水提物经过大孔树脂和凝胶纯化后得到的均一多糖的质量分数为70%。本试验为深入研究柴胡中药理活性成分与开发利用提供了一定的理论基础。

正交试验法优选柴胡中柴胡皂苷提取工艺

目的:以柴胡中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d含量为评价指标,优选柴胡最佳提取工艺。方法:采用L9(34)正交试验设计对提取方法进行优选,HPLC-ELSD法测定柴胡皂苷a及柴胡皂苷d含量。采用Agilent TC-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(50∶50);流速:0.8mL·in-1;柱温:20℃;ELSD为检测器。结果:最佳提取方法为回流1h,加5%氨水甲醇30mL。结论:优选出的提取方法经方法学考察符合要求,可为柴胡中化学成分的提取提供参考,使分析结果准确、可靠。

柴胡总皂苷提取工艺的优化

目的考察柴胡中总皂苷的最佳提取工艺。方法以柴胡总皂苷提取率为评价指标,采用单因素实验与正交实验设计优选出柴胡中柴胡总皂苷的提取工艺。结果柴胡总皂苷的最优提取工艺为:粉碎粒径<180μm的柴胡粉末在80℃条件下以70%乙醇回流提取3次,每次1 h,每次加乙醇量为柴胡粉末量的8倍。结论验证实验表明优选出的提取工艺稳定可行,适用于柴胡总皂苷的提取。

柴胡及其煎剂中皂苷类成分的高效液相指纹图谱研究

目的利用HPLC指纹图谱技术，全面揭示柴胡煎煮前后皂苷类成分的变化。方法采用Hypersil C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相为乙腈-水，梯度洗脱[0～70min：乙腈-水（22：78）→（50：50）]；流速1．0ml·min^-1；柱温30℃；检测波长210，252nm。结果柴胡煎煮后的指纹图谱中出现了9个药材中不存在的新色谱峰。结论对柴胡煎煮中新出现的皂苷类成分进行深入系统的研究，将有助于从中医角度揭示中药柴胡功效的物质基础。

柴胡提取物对大鼠海马原代培养神经元5-HT_3受体介导离子通道的影响

目的 :探讨柴胡提取物(Radix Bupleuri Extract,RBE)含药血清对抑郁情绪模型大鼠原代培养的海马神经元5-羟色胺3受体(5-HT3R)通道电流的作用。方法:复制抑郁情绪大鼠模型,以柴胡提取物进行药物干预,采用旷场实验和糖水偏好实验评价模型,制备各组大鼠血清并灭活除菌,对原代培养的大鼠海马神经元干预24 h后,采用全细胞膜片钳技术检测各组神经元5-HT_3R通道电流。结果 :与正常组相比,模型组大鼠旷场实验总分显著性降低(P<0.01),糖水偏好系数显著降低(P<0.01),模型组大鼠血清孵育的海马神经元电流密度值明显增加(P<0.01);与模型组相比,柴胡提取物组和氟西汀组旷场实验总得分明显提高(P<0.05,P<0.01),糖水偏好系数均明显增加(P<0.05,P<0.05),柴胡提取物和氟西汀含药血清孵育的海马神经元电流密度值均明显减少(P<0.01,P<0.01)。结论:柴胡提取物能改善抑郁情绪模型大鼠异常的5-HT3R通道电流,这可能是其发挥抗抑郁情绪的中枢机制之一。

柴胡提取物改善慢波睡眠促进动物增高机制的实验研究

目的 ：探讨柴胡提取物调节慢波睡眠促进动物增高的作用机制。方法 ：小鼠灌胃柴胡提取物（0.940 mg/kg）,与空白对照组比较,观察药物是否促进发育期小鼠体长增长,小鼠脑组织5-羟色胺（5-HT）含量变化;同时给予大鼠药物检测慢波睡眠的变化及体内生长激素含量变化。结果：柴胡提取物可以促进发育期小鼠体长增长,灌胃10 d和20 d后用药组体长变化与空白组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,脑组织5-HT含量升高与空白组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。用药组大鼠慢波睡眠延长,与空白组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,同时用药组血清生长激素含量升高,与空白组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,而5-HT选择性抑制剂可以抑制这种趋势。结论：柴胡提取物可以促进动物体长的增长,其作用机制可能是通过提高脑组织5-HT含量升高,延长慢波睡眠时长,从而促进生长激素的分泌引起的。

舒郁胶囊及其主要组份对经前期综合征肝气郁证大鼠海马中Cav1.2介导的CaM/CaMKⅡ信号通路的影响

目的探讨L型钙通道(Cav1.2)下游信号通路中钙调蛋白/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(Ca M/CaMKⅡ)与经前期综合征(PMS)肝气郁证的关系以及舒郁胶囊的干预机制。方法用舒郁胶囊、柴胡提取物、白芍提取物和阳性对照氟西汀+尼莫地平对慢性束缚应激法制备的PMS肝气郁证大鼠进行干预,免疫印迹技术检测各组海马中CaM,CaMKⅡ的磷酸化水平及脑源性营养因子(BDNF)蛋白表达。结果慢性束缚应激可以成功复制PMS肝气郁证大鼠模型。蛋白表达结果显示,模型组大鼠海马中Ca M蛋白的表达量升高(P<0.05),CaMKⅡ磷酸化水平显著升高,BDNF蛋白的表达量显著下降(P<0.01)。与模型组相比,氟西汀+尼莫地平组大鼠海马CaM蛋白表达量显著降低(P<0.05),各给药组海马中CaMKⅡ磷酸化水平显著下降(P<0.01),BDNF的蛋白表达量均显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论海马脑区Cav1.2下游信号通路中CaM/CaMKⅡ的激活与PMS肝气郁证的发生有关,舒郁胶囊及其有效组分可能是通过抑制CaMKⅡ信号通路的激活发挥其治疗作用。

柴胡提取组分抗抑郁作用的研究

目的观察柴胡提取组分(CHB)的抗抑郁作用。方法采用小鼠强迫游泳、悬尾两种"行为绝望"抑郁动物模型和利血平拮抗模型,观察CHB对小鼠游泳不动时间、悬尾不动时间以及利血平诱导的体温降低、眼睑下垂、运动不能的影响。结果 CHB 100,200 mg/kg均能不同程度地缩短小鼠强迫游泳和悬尾不动时间,能拮抗高剂量利血平致小鼠体温下降,改善利血平诱导的小鼠眼睑下垂,并呈现一定的量效关系。结论 CHB具有一定的抗抑郁作用。

南、北柴胡不同组分对小鼠急性毒性试验比较研究

目的探讨南、北柴胡不同组分对小鼠急性毒性的影响。方法分别制备南、北柴胡水提组分和醇提组分,按照经典小鼠急性毒性试验方法,进行南、北柴胡不同组分的小鼠急性毒性试验比较研究,试验数据用公斤体重法计算最大耐受量(MTD)和最大给药量(MLD),连续观察14天。结果南、北柴胡不同组分对小鼠急性毒性强度为:北柴胡醇提组分>南柴胡醇提组分>北柴胡水提组分>南柴胡水提组分。南、北柴胡水提组分没有出现死亡,测得MLD值按含生药量计算分别为181.6g·kg-·1d-1和201.6g·kg-·1d-1,分别相当于临床70kg人每公斤体重日用量的1412.4倍和1568.0倍;南、北柴胡醇提组分无法做出LD50,测得MTD值按含生药量计算分别为46.4g·kg-1·d-1和75.2g·kg-1·d-1,分别相当于临床70kg人每公斤体重日用量的360.9倍和584.9倍。结论北柴胡药材毒性大于南柴胡,且南、北柴胡的醇提组分均大于其水提组分。柴胡皂苷类物质含量高低与其毒性大小有一定相关性,推测柴胡皂苷可能是其主要毒性物质基础。

柴胡、柴胡和黄芩配伍对肝细胞损伤体外作用

目的探讨柴胡、柴胡和黄芩配伍水提液对人肝L-02细胞增殖及对L-02细胞四氯化碳损伤的保护作用及其机制。方法本实验通过体外培养L-02细胞,将柴胡、柴胡和黄芩配伍水提液分别作用于人正常肝细胞及用CCL4损伤后的L02细胞。采用MTT法(体外细胞毒试验)测定柴胡、柴胡和黄芩配伍水提液对L02细胞增殖的影响;采用免疫组化法测定肝细胞中NFKBp65及TLR4蛋白的表达。结果 MTT法发现柴胡水提液对L02细胞有促进增殖作用,同时发现柴胡和黄芩配伍水提液对L02细胞有明显的增殖作用,而且配伍后作用更稳定。免疫组化发现CCL4损伤后L-02细胞中NKFBp65和TLR4蛋白表达增高,柴胡、柴胡和黄芩配伍水提液对肝细胞中的NKFBp65和TLR4蛋白具有抑制作用。结论柴胡水提液对L02细胞有促进增殖作用,柴胡和黄芩配伍水提液对L02细胞增值作用更稳定。且柴胡及柴胡和黄芩配伍可以对CCL4引起的肝损伤起保护作用,其机制可能与下调体内TLR4-NFKB信号通路有关。

提取温度对柴胡药效作用的影响

目的研究了提取温度对柴胡水提取液药效作用的影响。方法采用脂多糖致大鼠发热模型和二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型,分别研究了60℃和100℃时提取制备的柴胡水提取液的药效作用。结果 1)60℃和100℃提取时所得的柴胡水提取液均有一定的解热作用,其中60℃条件制备的柴胡水提取液(B液),在造模后4 h和5 h体温降幅与模型对照组相比差异显著(P<0.05),其作用效果与阿司匹林相当,且解热作用稳定持久;而100℃时所得的柴胡药液(A液)解热作用较差。2)两种制备方法所得的柴胡水提取液均有较好的抗炎作用,耳廓肿胀度与空白对照组相比差异均极显著(P<0.01),60℃时柴胡提取液B的抗炎作用好于100℃时柴胡提取液A的抗炎作用,但差异不显著。结论 60℃时柴胡提取液解热效果更佳,提取温度对柴胡的抗炎作用无明显影响。

柴胡提取物对CVB3m感染小鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的探讨柴胡提取物调节心肌细胞凋亡的作用机制.方法以柯萨奇病毒嗜心肌株(CVB3m)腹腔注射诱导BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型,将实验小鼠分为正常对照组、模型组、柴胡提取物组,柴胡提取物组每天予0.2ml/10g的浓度为2mg/ml的柴胡提取物灌胃,正常对照组、模型组予以等量生理盐水灌胃,于造模后第10天处死,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,采用免疫组化、RT-PCR法检测各组小鼠心肌中Fas、Bcl-2、Caspase3表达.结果正常组小鼠心肌未检测到凋亡的心肌细胞,Fas、Bcl-2、Caspase3均有不同程度表达,模型组可见大量心肌细胞凋亡,且Fas、Bcl-2、Caspase3表达均强于对照组(P＜0.01),柴胡提取物组心肌细胞凋亡明显减少,与模型组比较差异显著(P＜0.01),Fas、Caspase3表达明显降低,Bcl-2表达轻度升高.结论柴胡提取物可以抑制病毒性心肌炎时心肌细胞凋亡,明显下调Fas及Caspase3表达,轻微上调Bcl-2表达.

柴胡黄芩配伍提取物对肉仔鸡生长性能的影响

探讨柴胡黄芩配伍提取物对肉仔鸡生长性能的影响。选择250只健康AA肉仔鸡,随机分成5组,对照组只饲喂基础日粮;试验1组添加金霉素;2组添加100 mg/kg柴胡黄芩配伍提取物;3组添加200 mg/kg柴胡黄芩配伍提取物;4组添加400 mg/kg柴胡黄芩配伍提取物,试验期49 d。结果表明,200 mg/kg组可显著提高肉仔鸡49日龄平均体质量、平均日增重,降低料重比。提示肉仔鸡饲粮中添加适量的柴胡黄芩配伍提取物在一定程度上可以提高肉仔鸡的生长性能,其中200 mg/kg添加量效果较好。

复方柴胡提取物中空栓制备工艺优选及质量控制

本研究选择柴胡提取物和氟尼辛葡甲胺为栓剂主药,采用半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物为基质制备复方柴胡提取物中空栓。以药物与基质的比例(A)、药液温度(B)及脱模时间(C)为考察因素,以外观质量和融变时限为考察指标,采用正交试验优选中空栓制备工艺并对栓剂进行质量控制。正交试验结果选取栓剂制备工艺为A2B2C2,即药粉与基质间比例为1:2,药液温度50℃,脱模时间25 min。验证试验结果表明,栓剂中柴胡总皂苷含量稳定,工艺可行,适合大生产。

柴胡皂苷提取工艺及其含量测定研究

柴胡为我国大宗药材之一,其含有的主要活性成分柴胡皂苷具有抗氧化、抗炎、抗癌等药理作用,被广泛应用于中药方剂配伍和中成药生产中。传统柴胡皂苷提取方法存在时间长、效率低、损失大等问题,大大降低了柴胡原药利用率与生产效率。近年来,基于各种新兴技术与新型仪器的高效提取检测方法具有很大的开发和研究价值。综述了中药材柴胡活性成分柴胡皂苷提取纯化工艺及其成分检测手段的研究进展,为柴胡皂苷的开发应用和进一步研究提供理论依据。

柴胡提取工艺的研究

以柴胡中总皂苷和浸膏率为考察指标 ,应用正交设计优选柴胡的提取工艺 ,乙醇浓度、乙醇用量、回流提取次数、提取时间为影响因素 ,每个因素取三个水平。结果表明 ,最佳提取条件为 :80 %乙醇用量为药材量的 4倍 ,回流提取 4次 ,每次 6 0min ,优选得到的工艺稳定可行。

近红外光谱法快速测定柴胡提取过程中的药效成分

利用近红外光谱(NIRS)技术对柴胡提取过程中的药效成分进行快速定量分析。共收集126个柴胡提取液样品,采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮和多糖的含量,高效液相色谱法(HPLC)测定柴胡皂苷A及柴胡皂苷D的含量,以透射模式采集提取液的近红外光谱,运用偏最小二乘法(PLS)分别建立了近红外光谱与4种药效指标参考值之间的定量校正模型,并采用不同的预处理方法、光谱波段和主因子数对模型进行优化。结果表明,总黄酮、多糖、柴胡皂苷A和柴胡皂苷D 4种定量模型的近红外预测值与参考值之间的拟合性良好,模型预测精度较高,其中预测集相关系数(RP)均大于0.9;预测集误差均方根(RMSEP)分别为3.46μg/mL、0.743 mg/mL、1.53μg/mL、0.406μg/mL;预测集相对偏差(RSEP)分别为1.65%、8.28%、5.74%、7.52%。该研究证实了NIRS结合PLS可成功应用于监测柴胡提取液中药效成分的含量变化,且方法具有快速、准确、无损和环保的特点。

正交实验法确定坤净泡腾胶囊栓最优提取方案

通过正交设计法与紫外可见分光光度法确定坤净泡腾胶囊栓提取的最优方案.采用L9(34)正交实验法设计实验,以柴胡总皂苷的得率为考察指标,以乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取次数作为考察因素,各因素取3个水平进行考察,采用紫外可见分光光度法,以柴胡皂苷d为对照品,在波长543 nm处对样品中的总皂苷进行测定,进行统计分析,筛选最优工艺.最优的提取条件为12倍量80%的乙醇,提取3次,每次0.5 h.优选后的提取工艺柴胡总皂苷的提取效率最高,可增加各处方药材的利用率.