鳐鱼硫酸软骨素提取工艺优化及其性质表征

以孔鳐加工的副产物软骨为原料,利用响应面方法优化鳐鱼硫酸软骨素提纯工艺,并对获得的鳐鱼硫酸软骨素进行质量及结构的表征。结果表明,最优提取工艺为碱液浓度2.3%、提取温度43℃、酶添加量0.7%时,硫酸软骨素提取率为43.32%。提取的鳐鱼硫酸软骨素符合国药标准,其重均分子量、数均分子量和多分散系数分别为40 752、38 257和1.065 2,经红外光谱分析,鳐鱼硫酸软骨素与鲨鱼硫酸软骨素具有相同结构组织,均由β-1,3糖苷键连接的β-D-葡萄糖醛酸和N-乙酰基-β-D-氨基半乳糖组成,该研究结果不仅可大幅度增加鳐鱼加工产业的附加值,也可为硫酸软骨素的工业生产提供一定的技术支持。

孔鳐硫酸软骨素的制备

采用增大碱浓度、复合酶水解及乙醇沉淀的方法提取制备孔鳐硫酸软骨素,并进行工艺条件的探讨,得到硫酸软骨素为白色粉末,其纯度达93.6％,收率为2.82％。

两种软骨鱼血红蛋白不与人胎儿血红蛋白相互作用及其进化意义

目的:研究两种软骨鱼——条纹斑竹鲨、孔鳐的血红蛋白成分与人胎儿血红蛋白的相互作用。方法:淀粉 -琼脂糖混合凝胶交叉电泳。结果:条纹斑竹鲨、孔鳐的血红蛋白成分不与人胎儿血红蛋白相互作用。结论:与前面所 进行的其它脊椎动物血红蛋白与人血红蛋白及人胎儿血红蛋白相互作用的研究对照比较,进一步验证了脊椎动物血红 蛋白与人血红蛋白相互作用的分界线可能位于爬行纲动物,丰富了血红蛋白的进化理论。

响应面法优化孔鳐软骨抗氧化多肽的酶解工艺

[目的]探讨酶解法制备孔鳐鱼软骨抗氧化肽的最佳工艺。[方法]以孔鳐软骨为试验材料,以DPPH自由基清除率为考察指标,采用双酶复合法酶解制备抗氧化多肽,通过响应面分析优化为最佳酶解工艺参数。[结果]采用胰蛋白酶与碱性蛋白酶复配(1∶3)组合制备酶解物的抗氧化性最好,酶解的最优工艺条件为:p H 8.5,加酶量6.25%,料液比2.1%,温度50.19℃,预测的DPPH自由基清除率为34.45%。[结论]通过响应面设计优化确定了孔鳐软骨抗氧化多肽的酶解工艺,为软骨鱼类高值化利用提供技术支持。

孔鳐胰脏单层细胞的制备和外源基因的表达

采用机械法、酶消化法和灌注冷消化结合机械法对孔鳐胰脏细胞进行分散，并以台盼蓝染色法测定活细胞率，评价细胞分散后的生长状态。在细胞分散后对孔鳐胰脏细胞用腺病毒载体和阳离子多聚物进行外源基因的转染。实验结果表明，灌注冷消化结合机械法可以获得较高的活细胞率，胰脏细胞可以正常生长并表达外源基因。

鱼纲动物孔鳐血红蛋白自身不相互作用的研究及其进化意义

目的:研究一种软骨鱼系动物(孔鳐)自身血红蛋白成份的相互作用。方法:淀粉-琼脂糖混合凝胶交叉电泳。结果:孔鳐自身血红蛋白成份不相互作用。结论:本实验完善了研究室所作的“各种脊椎动物血红蛋白自身相互作用的系列研究”。同前面所进行的各种脊椎动物血红蛋白分别与人血红蛋白、胎儿血红蛋白相互作用的研究对照比较,进一步验证脊椎动物血红蛋白与各种蛋白分子在电场中的相互作用的分水岭可能位于爬行纲动物,丰富了血红蛋白分子进化理论。

胰蛋白酶酶解制备孔鳐软骨蛋白寡肽及其抗氧化活性

以孔鳐软骨为材料,采用盐酸胍抽提、丙酮分级沉淀,制备孔鳐软骨蛋白;以DPPH·和HO·清除活性为导向,采用胰蛋白酶酶解、膜超滤、DEAE-52阴离子交换层析、Sephadex G-15凝胶层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)等技术,制备抗氧化肽,并对其活性进行系统评价。结果显示,孔鳐软骨蛋白经胰蛋白酶酶解和分离纯化得到2个抗氧化肽RCPE-A和RCPE-B,经氨基酸序列分析确定其序列分别为Gly-Glu-Glu-Gly-ProArg-Gly (GEEGPRG)和Gly-Glu-Glu-Gly-Thr-Met-Gly-Leu (GEEGTMGL),质谱(ESI-MS)测定其分子量分别为700.71和792.87 u。体外自由基清除实验结果显示,RCPE-A与RCPE-B对DPPH·(EC50 2.94和1.16 mg/mL)、HO·(EC_(50) 0.34和0.54 mg/mL)、ABTS^+·(EC_(50) 0.34和0.10mg/mL)和O_2^-·(EC_(50) 0.11和0.03 mg/mL)具有良好的清除作用,RCPE-A与RCPE-B亦显示出较强的脂质过氧化抑制作用。研究表明,孔鳐软骨蛋白酶解物及制备多肽可用于抗氧化相关的功能食品开发,也可以用作抗氧化剂延长相关产品的货架期。

微波辅助提取孔鳐抗氧化和血管生成抑制活性软骨多糖的研究

目的:对微波辅助碱液提取孔鳐软骨多糖的方法及其抗氧化和血管生成抑制活性进行研究。方法:采用微波辅助碱液提取与木瓜蛋白酶水解相结合的加工工艺,以正交试验法优化提取工艺参数。通过还原力、DPPH·和·OH清除实验对多糖抗氧化能力进行测定。采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型对其血管生成抑制活性进行评价。结果:微波辅助碱液提取最佳工艺参数是:微波功率650W、提取温度60℃、碱质量分数15%、液料比35:1、提取时间7min。木瓜蛋白酶脱蛋白精制孔鳐软骨多糖的最佳条件是:酶解温度50℃,pH7.0,酶解时间2h,酶量1.0%。在此条件下精制的多糖为白色粉末,得率13.77%,纯度88.75%。在相同浓度下精制孔鳐软骨多糖抗氧化能力均大于粗提多糖。精制多糖的血管生成抑制活性与硫酸软骨素(CS)相当,并且呈剂量依赖关系。结论:微波辅助碱液提取和木瓜蛋白酶脱蛋白所得精制多糖具有很好的抗氧化和血管生成抑制活性。