PI3Kδ抑制剂CAL-101对淋巴瘤细胞系Raji和SUDHL-10的作用及其机制研究

目的:探讨PI3Kδ抑制剂CAL-101对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系SUDHL-10和Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的作用及其相关机制,为这类疾病的治疗提供新的思路。方法:用不同浓度的CAL-101处理Burkitt淋巴瘤细胞系Raji和弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系SUDHL-10,以MTT法检测CAL-101对两种细胞系的增殖抑制作用;以Annexin V/PI流式细胞术和DAPI染色法检测细胞的凋亡情况;迁移实验检测淋巴瘤细胞向淋巴瘤基质细胞系HK的迁移比例;Western blot法检测CAL-101处理后淋巴瘤细胞表达磷酸化ERK的变化;MTT法结合Calcu Syn software软件分析检测CAL-101是否可协同硼替佐米抑制淋巴瘤细胞的增殖。结果:5μmol/L及更高浓度的CAL-101对Raji细胞和SUDHL-10细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。5、10、15、20μmol/L CAL-101作用于Raji细胞48 h,细胞增殖抑制率分别为(29.17±1.23)%、(38.15±1.51)%、(46.46±1.78)%、(55.8±2.01)%,空白对照组为(1.15±0.02)%(P<0.05)。作用于SUDHL-10 48 h,细胞增殖抑制率也逐渐增加(P<0.05)。CAL-101可诱导淋巴瘤细胞的凋亡,10、20μmol/L CAL-101作用于Raji细胞24 h,Annexin V-FITC/PI双标法显示其凋亡率分别为(22.69±3.83)%和(49.96±7.36)%,均高于对照组(5.23±2.04)%(P<0.05);作用于SUDHL-10细胞同样得到相似的结果(P<0.05)。CAL-101可显著降低淋巴瘤细胞向基质细胞的迁移,且对Raji细胞和SUDHL-10细胞的迁移率的抑制作用也呈浓度依赖性,差异均具有统计学意义(P<0.05);Western blot检测发现CAL-101处理细胞后磷酸化ERK的表达明显降低;CAL-101与硼替佐具有协同作用,可显著抑制淋巴瘤细胞的增殖,CI<1。结论:PI3Kδ抑制剂CAL-101可抑制淋巴瘤细胞Raji和SUDHL-10的增殖,诱导凋亡,抑制其向淋巴瘤基质细胞的迁移,其机制可能通过阻断ERK信号途径而实现;CAL-101有望为侵袭性淋巴瘤的治疗带来希望。

CHFR基因和PARP-1基因对裸鼠Raji淋巴瘤细胞增殖和凋亡调控的研究

目的CHFR基因是一种抑癌基因,低表达或表达缺失可能促淋巴瘤细胞增殖,PARP-1基因参与其对淋巴瘤细胞增殖的调控,本研究旨在通过过表达CHFR基因及分别沉默CHFR、PARP-1基因,观察其对裸鼠移植瘤Raji细胞的影响,探讨CHFR基因和PARP-1基因调控裸鼠Raji淋巴瘤细胞的增殖和凋亡机制。方法在非霍奇金B细胞裸鼠Burkitt淋巴瘤移植瘤Raji细胞中,用5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)过表达CHFR基因,及用慢病毒介导的shRNA分别沉默CHFR、PARP-1基因,测定各组裸鼠移植瘤的肿瘤的大小及重量;采用实时荧光定量PCR技术测定各组CHFR及PARP-1基因mRNA含量;应用MSP方法检测各组CHFR的甲基化状态;分别通过TUNEL试剂盒和免疫组化监测凋亡指数(AI)和微血管密度(MVD)。结果5-Aza-dC组的裸鼠在非霍奇金B细胞Burkitt淋巴瘤移植瘤Raji细胞能增强CHFR基因mRNA的表达,降低PARP-1基因mRNA的表达;在体内环境中,5-Aza-dC能够促进移植瘤Raji细胞的凋亡,抑制移植瘤的生长(P<0.05),这些结果与shRNA-CHFR组结果相反,与shRNA-PARP-1组结果一致。而且实验中可见5-Aza-dC组的裸鼠移植瘤的CHFR基因发生去甲基化。结论CHFR基因低表达促进肿瘤细胞增殖,PARP-1基因低表达促进肿瘤细胞凋亡,而5-Aza-dC可以去甲基化抑制肿瘤细胞增殖。

酪氨酸磷酸酶抑制剂正矾酸钠对Raji淋巴瘤细胞增殖与凋亡的影响及机制探讨

为了探讨蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPase)通路在淋巴瘤细胞增殖与凋亡中的作用及机制,应用细胞培养结合MTT检测,光镜及电镜形态学观察,DNA凝胶电泳,流式细胞术和RT-PCR研究了特异的酪氨酸磷酸酶抑制剂正矾酸钠(Na_3VO_4)对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的影响。结果:MTT检测及CFU-Raji培养显示Na_3VO_4对Raji细胞呈浓度依赖性抑制作用;倒置显微镜下原位观察发现随Na_3VO_4浓度增加,细胞体积明显缩小,核固缩、核染色质核膜下聚集,呈典型凋亡小体状;细胞胞体出芽,核染色质凝聚、核碎裂,电镜观察出现典型凋亡细胞;膜联蛋白染色显示Na_3VO_4诱导Raji细胞凋亡,线粒体跨膜电位下降,且在一定范围内呈浓度依赖性;DNA凝胶电泳出现DNA梯形条带;流式细胞术及RT-PCR示Na_3VO_4下调Bcl-2蛋白及mRNA的表达;细胞周期分析显示经Na_3VO_4处理的细胞出现G_2-M期阻滞、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)及mRNA的表达下调。结论:PTPase通路信号传导参与了Raji细胞增殖与凋亡过程的调节,加入其特异抑制剂Na_3VO_4可通过下调细胞周期蛋白B1的表达引起G_2-M期阻滞抑制增殖、下调Bcl-2的表达及降低线粒体跨膜电位诱导Raji细胞凋亡。

夏枯草提取物对人淋巴瘤Raji细胞增殖的影响及机制探讨

目的观察夏枯草提取物对人Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法Raji细胞分别加入不同浓度夏枯草提取物进行培养,MTT法检测Raji细胞增殖抑制率,倒置显微镜观察细胞学形态,琼脂糖凝胶电泳观察Raji细胞DNA凋亡情况;流式细胞仪检测Raji细胞凋亡率。结果不同浓度的夏枯草提取物对Raji细胞增殖有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)为(18.01±0.92)μg/ml;随夏枯草提取物作用时间的延长Raji细胞DNA凋亡条带增宽变亮,细胞凋亡率升高。结论夏枯草提取物可抑制Raji细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。

2-甲氧基雌二醇上调Bax/BCL-2比例诱导淋巴瘤Raji细胞凋亡的研究

目的:研究2-甲氧基雌二醇(2-ME2)对淋巴瘤Raji细胞的作用及其作用机制。方法:用不同浓度2-ME2作用于淋巴瘤Raji细胞,CCK8法检测2-ME2对Raji细胞增殖的影响;流式细胞仪FITC/PI双标法检测细胞早期的凋亡;蛋白印迹法检测2-ME2对Raji细胞BCL-2、Bax、Caspase-3、C-myc蛋白表达的影响。结果:2-ME2对Raji细胞的增殖具有明显抑制作用,其抑制率随着药物浓度的增高而增加,随着药物作用时间的延长而显著增高(r=0.9215)。流式细胞仪FITC/PI双染色法结果显示,2.5μmol/L 2-ME2处理24 h组的细胞凋亡率为(33.79±1.63)%,而48 h组的凋亡率高达(51.90±2.72)%,对照组Raji细胞为(7.08±0.36)%。2.5μmol/L 2-ME2处理Raji细胞12 h后,蛋白印迹检测结果显示,Bax蛋白表达上调,BCL-2蛋白下调,而Caspase-3蛋白表达亦上调,C-myc蛋白表达下调,之间均具有时效性关系。结论:2-ME2对淋巴瘤Raji细胞具有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。其对淋巴瘤Raji细胞的作用机制可能与上调Bax/BCL-2比例,激活Caspase-3诱导癌细胞凋亡有关,下调C-myc蛋白表达也参与了凋亡过程。

氨茶碱对淋巴瘤细胞系增殖与凋亡的影响及机制探讨

为探讨磷酸二酯酶 (phosphodiesterase ,PDE)抑制剂在淋巴瘤细胞增殖与凋亡中的作用及机制 ,研究了非选择性PDE抑制剂氨茶碱 (aminophylline,AM)对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的影响。采用MTT检测 ,光学显微术 ,电镜术及膜联蛋白V染色观察细胞增殖、细胞凋亡的形态学变化及凋亡率 ;用流式细胞术和RT PCR技术检测细胞周期 ,周期蛋白B1和Bcl 2的表达及线粒体跨膜电位的变化。结果显示 ,氨茶碱对Raji细胞增殖呈浓度依赖性抑制作用 ;形态学观察发现随氨茶碱浓度增加 ,细胞体积明显缩小 ,核固缩 ,核染色质核膜下聚集 ,出现凋亡小体 ;细胞涂片显示 ,核染色质凝聚、核碎裂 ;电镜观察有典型凋亡细胞 ;膜联蛋白V染色显示氨茶碱诱导Raji细胞凋亡率增加 ,线粒体跨膜电位 (△ψm)呈浓度依赖性下降 ;流式细胞术及RT PCR显示氨茶碱下调Bcl 2蛋白及mRNA的表达 ;细胞周期分析显示经氨茶碱处理的细胞出现S期阻滞、细胞周期蛋白B1表达下调。结论 :氨茶碱可通过S期阻滞抑制细胞增殖、下调Bcl 2的表达及降低线粒体膜电位而诱导Raji细胞凋亡。

姜黄素对人淋巴瘤Raji细胞组蛋白H3乙酰化作用的影响

背景与目的:表观遗传改变是肿瘤发生的一个重要原因,具有表观遗传修饰作用的甲基化转移酶抑制剂和去乙酰化酶抑制剂可以抑制肿瘤增殖诱导凋亡。本研究探讨姜黄素对Raji细胞组蛋白H3的乙酰化作用和细胞周期素依赖性激酶抑制剂p21WAF1/CIP1基因表达的影响。方法:用25μmol/L姜黄素作用Raji细胞不同时间,Westernblot分析乙酰化组蛋白H3和p21WAF1/CIP1变化;RT-PCR检测p21WAF1/CIP1基因表达;染色质免疫沉淀分析p21WAF1/CIP1的启动子基因位点组蛋白H3乙酰化水平;流式细胞术检测细胞周期变化。结果:姜黄素提高p21WAF1/CIP1的启动子基因位点组蛋白H3乙酰化水平1.9倍;使p21WAF1/CIP1mRNA合成增加和蛋白表达上调,在24h时分别增加了4.2倍和5.1倍;24h阻滞细胞在G2/M期,36h阻滞在G0/G1期。结论:姜黄素通过表观遗传修饰作用,调节p21WAF1/CIP1启动子基因位点组蛋白H3乙酰化水平,促进p21WAF1/CIP1基因转录,阻滞Raji细胞周期进程。

AS_2O_3逆转人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因甲基化状态及激活转录的实验研究

本研究旨在探讨三氧化二砷(As2O3)逆转恶性淋巴瘤CA46细胞株p16基因甲基化状态和调节转录作用及其可能的机制。以高甲基化的恶性淋巴瘤细胞株CA46作为研究基因甲基化与表达关系的实验对象。采用SRB法检测As2O3对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力的影响;nMSP法检测药物作用后p16甲基化状态变化;RT-PCR法检测p16、甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达;利用流式细胞术DNA倍体分析法探讨As2O3对恶性淋巴瘤细胞周期的影响。结果表明:①As2O3作用CA46细胞株72小时后p16基因甲基化程度明显减弱,p16基因异常甲基化的现象被逆转;②未处理组细胞p16基因呈微弱表达,As2O3作用72小时后p16基因表达增强,0.5μmol/L组、1.0μmol/L组和2.0μmol/L组p16基因表达阳性条带与β-actin灰度的比值分别为(0.33±0.10)、(0.57±0.11)、(0.67±0.09),阳性对照灰度比值为(0.73±0.13),差异有统计学意义(p<0.01);③与未处理组相比,As2O3作用72小时后甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B的表达下降并呈浓度依赖性,而DNMT1表达不受影响;④与对照组相比,3组不同浓度As2O3均能明显抑制肿瘤细胞生长,G0/G1期细胞增加。结论:As2O3可能通过抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B或(和)直接逆转p16基因甲基化状态,使p16基因表达上调,并恢复其活性,从而实现其细胞周期调控功能,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制肿瘤细胞的增长。

人恶性淋巴瘤细胞系p53,p16与bcl-2/JH基因的研究

抑癌基因p53,p16的缺失和突变以及癌基因bcl-2/JH融合基因的出现是恶性淋巴瘤发生的分子生物学原因,p53和p16基因亦是诱导淋巴瘤细胞凋亡的重要基因,而bcl-2基因是抑制淋巴瘤细胞凋亡的重要基因。为研究这3种基因结构的变化,用PCR和PCR-SSCP,以及PCR扩增产物序列测定的方法测定了人9种恶性淋巴瘤细胞系,发现SU-DHL-1,SU-DHL-4,SU-DHL-6,SU-DHL-8,SU-DHL-10,Daudi,8392 7种恶性淋巴瘤细胞系有p53基因的点突变,分别在第五、六、七外显子;SU-DHL-9有p16基因的纯合缺失,而SU-DHL-1和Daudi细胞系有p16基因的第二外显子的突变,SU-DHL-1的测序结果为密码子30的GAC突变为AAC,密码子35的GCT突变为ACT,密码子40与41之间插入了一个C;SU-DHL-4和SU-DHL-6有bcl-2/JH基因的重排,讨论了基因结构的变化在恶性淋巴瘤细胞系发生发展中的意义。

单价抗CD20抗体诱导人B细胞淋巴瘤Raji细胞的凋亡

背景与目的:抗CD20抗体和片段已应用于非霍奇金淋巴瘤的临床治疗,但仍需要开发新的抗CD20抗体和片段(未修饰的或放射性标记的),以治疗对美罗华(利妥昔单抗)无反应的患者。鼠源性抗CD20抗体HI47的嵌合抗体片段Fab和F(ab)'2已被构建。本研究目的是观察HI47(鼠抗-CD20抗体)和其嵌合抗CD20抗体片段抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。方法:用免疫荧光法测定抗CD20抗体与CD20+人B细胞淋巴瘤Raji细胞的结合能力;MTT法测定抗CD20抗体片段对Raji细胞生长的影响;用膜联蛋白Ⅴ染色和DNA琼脂糖凝胶电泳检测和验证抗CD20抗体片段诱导Raji细胞凋亡。结果:HI47和其嵌合的抗CD20抗体片段均可与CD20+Raji细胞结合,结合率可达90%以上;HI47不能与美罗华竞争结合Raji细胞;HI47和其嵌合的抗CD20抗体片段浓度为100μg/ml对Raji细胞的抑制率分别为:(57.0±1.5)%、(65.2±2.5)%、(77.2±3.2)%;单价的抗CD20抗体片段Fab(20μg/ml)能够诱导Raji细胞的凋亡,早期凋亡率为17%。结论:HI47的嵌合抗体片段对Raji细胞有抑制作用,能诱导Raji细胞的凋亡。

EBV转化的人乳头瘤病毒感染者B淋巴母细胞系的建立及应用

建立EB病毒(EBV)转化的B淋巴母细胞系(LCL),应用此细胞系作为抗原递呈细胞筛选抗原特异性的T细胞克隆。收集人乳头瘤病毒(HPV)感染者外周血20份,分离外周血单个核细胞(PBMC),利用Pan T细胞试剂盒去除PBMC中的T细胞,获得non-T淋巴细胞,EBV病毒转化non-T淋巴细胞。应用转化的LCL细胞作为抗原递呈细胞,ELISPOT筛选可能的HPV抗原特异性的T细胞克隆。成功建立18个LCLs,建株成功率为90%。转化成功的LCL细胞体积增大,聚集成团状或簇状。建株失败的两份标本,用于转化的non-T淋巴细胞数少于2×106。应用LCL细胞作为抗原递呈细胞筛选出64个HPV抗原特异性的T细胞克隆。成功建立LCLs,此细胞系细胞可作为体外研究HPV特异性免疫反应的刺激细胞。

和厚朴酚提高人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞对NK细胞杀伤敏感性的研究

目的:探讨和厚朴酚(honokiol,HNK)作用前后人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞对NK细胞杀伤敏感性的变化及其可能机制。方法:MTT法检测和厚朴酚对Raji细胞的增殖抑制作用。乳酸脱氢酶释放法检测HNK作用前后Raji细胞对NK细胞的杀伤敏感性。流式细胞仪检测HNK作用前后Raji细胞表面NKG2D配体(MICAB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)和HLA-Ⅰ类分子的表达以及细胞周期变化。结果:HNK对Raji细胞的生长具有明显抑制作用。HNK作用后,Raji细胞对NK细胞的杀伤敏感性较HNK作用前显著增强(P<0.05)。HNK作用后,Raji细胞表面MICAB、ULBP2、ULBP3表达显著升高(P<0.05),ULBP1和HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P>0.05),同时,细胞周期检测显示Raji细胞被阻滞在G0/G1期。结论:HNK能提高Raji细胞NKG2D配体(MICAB、ULBP1、ULBP3)的表达,从而使Raji细胞对NK细胞的杀伤敏感性增强,以达到杀伤肿瘤细胞的能力。

嵌合抗CD_(20) Fab′对B淋巴瘤细胞Raji细胞生长的影响

目的：研究嵌合抗CD_(20)基因工程抗体Fab′的抗肿瘤活性。方法：利用MTT法以及3H掺入法测定嵌合抗CD_(20) Fab′对Raji细胞生长的影响。结果：MTT法测定结果显示嵌合抗CD_(20) Fab′对Raji细胞的生长具有抑制作用，抑制作用成剂量依赖性，其IC50为24μg／ml；嵌合抗CD_(20) Fab′对3H－TdR掺入Raji细胞无抑制作用，表明抗CD_(20) Fab′不影响Raji细胞DNA的合成；但嵌合抗CD_(20) Fab′抑制3H－UdR掺入Raji细胞，表明嵌合抗CD_(20) Fab′对Raji细胞RNA合成具有抑制作用，其抑制作用成剂量相关性。结论：嵌合抗CD_(20) Fab′抑制Raji细胞生长，嵌合抗CD_(20) Fab′具有较好的抗肿瘤活性。

咪达唑仑对套细胞淋巴瘤细胞系JeKo-1的作用及机制研究

本研究探讨咪达唑仑(midazolam)对套细胞淋巴瘤细胞系JeKo-1的作用及相关机制。采用CCK8法观察咪达唑仑对JeKo-1细胞增殖的影响;流式细胞术分析咪达唑仑对JeKo-1细胞凋亡的影响;Western blot法检测咪达唑仑对JeKo-1细胞BCL-2、细胞色素C(Cyto-C)、pro-caspase-9、pro-caspase-8、pro-caspase-3蛋白表达的影响。结果表明,咪达唑仑能明显抑制JeKo-1细胞增殖,48 h的半数抑制浓度(IC50)约为40μmol/L;不同浓度咪达唑仑处理48 h后JeKo-1细胞出现凋亡,呈现剂量依赖性;同时,JeKo-1细胞内BCL-2、pro-caspase-9、pro-caspase-3蛋白表达呈剂量依赖性降低,Cyto-C蛋白表达呈相应增加,而pro-caspase-8蛋白表达则未发生变化。结论:咪达唑仑可能通过下调JeKo-1细胞BCL-2的表达,触发线粒体凋亡途径,但不活化死亡受体途径,导致线粒体Cyto-C的释放,并引发caspase-9、caspase-3的活化,启动了caspase级联反应,最终导致了JeKo-1细胞的凋亡。

三氧化二砷与传统及新型药物协同抑制皮肤T细胞淋巴瘤细胞系增殖

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)与传统药物地塞米松(Dexamethasone,DXM)、依托泊苷(Etoposide,VP-16)、甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)和新型药物硼替佐米(Bortezomib,BTZ)、组蛋白去乙酰化酶抑制剂-辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilidehydroxamic acid,SAHA)联合对人皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞系Hut-78、Hut-102细胞的增殖抑制作用。方法:不同浓度的As2O3单药或与DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA联合作用于Hut-78、Hut-102细胞48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,应用联合指数分析两药是否具有协同效应。结果:As2O3、DXM、VP-16、MTX、BTZ、SAHA单药对Hut-78、Hut-102细胞的增殖均具有显著的抑制作用,呈剂量依赖性,培养48h的半数抑制浓度分别为5μmol/L、500μg/L、2.5μg/L、1μg/L、10μmol/L、2.5μmol/L。As2O3与DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA联合时具有协同效应,抗肿瘤作用更为显著。结论:As2O3单药及其与DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA联合在体外可有效抑制CTCL细胞增殖。As2O3是一种很有前景的治疗CTCL的药物,As2O3与DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA等传统或新型药物联合可为CTCL临床的治疗提供实验依据。

TRAF6在B淋巴瘤细胞系NF-κB和AP-1信号传导通路中的作用

目的利用人B淋巴瘤细胞系模型探讨TRAF6在调控NF-κB和AP-1信号系统中的作用。方法将融合有黄色荧光素(YFP)的功能缺失型TRAF6(DN-TRAF6)质粒和小干扰RNA-TRAF6质粒转染至人类B淋巴细胞系,过夜培养后经流式细胞仪或G418筛选阳性转染细胞,通过Western blot、ELISA等方法研究TRAF6对NF-κB通路中IκBα磷酸化和转录因子(P65,P50和c-Rel)向细胞核内转移以及AP-1通路中ERK、JNK、P38磷酸化和转录因子(C-FOS,C-JUN,ATF和CREB)向细胞核内转移等的影响。结果B细胞过度表达DN-TRAF6或转染小干扰RNA-TRAF6均可抑制IκBα和JNK的磷酸化水平以及P65、P50、c-Rel和c-Fos、C-JUN的核内转录。结论TRAF6可选择性地作用于人B淋巴细胞的NF-κB和AP-1信号传导系统中部分激酶,在上述两条信号系统活化中起重要作用。

非霍奇金淋巴瘤Raji细胞照射前后microRNA的差异表达及其功能预测

目的寻找调控非霍奇金淋巴瘤放射敏感性的microRNA(miRNAs)。方法利用miRNAs芯片检测非霍奇金淋巴瘤细胞株Raji细胞照射前后miRNAs的表达差异。生物信息学分析这些差异表达的miRNAs的生物学功能。结果用集落形成实验检测Raji细胞的放射敏感性,发现临床常用的分割剂量2 Gy可以导致约50%的生长抑制。因此,给予Raji细胞2 Gy照射。照射后4小时提取RNA用miRNAs芯片进行分析。结果发现,以P<0.05为标准,20个miRNAs照射后有差异表达,其中10个上调,10个下调。实时定量PCR验证部分miRNAs的表达与芯片的结果一致。生物信息学分析表明,大部分差异表达的miRNAs参与细胞周期、凋亡、DNA损伤与修复相关的生物学功能和通路,可能调控Raji细胞的放射敏感性。结论非霍奇金淋巴瘤Raji细胞照射前后miRNAs出现差异表达。差异表达的miRNAs可能参与非霍奇金淋巴瘤放射敏感性的调控。

转染外源HCAP1基因对B淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖的作用

目的:HCAP1基因定位于人类染色体17p13．3,此区域在多种肿瘤组织呈杂合性缺失,本研究旨在探 讨HCAP1外源基因产物对B淋巴瘤细胞系Raji细胞增殖的作用。方法:应用脂质体介导法,将HCAP1基因转染Raji 细胞,经G418筛选、获得稳定表达外源HCAP1基因的细胞,用台盼蓝活细胞计数、绘制生长曲线、软琼脂集落培养及 BrdU(5溴-2’脱氧尿嘧啶)标记法,观察HCAP1基因产物对Raji细胞增殖的作用。结果:与转染空载体的对照细胞 比较,稳定表达外源HCAP1基因的细胞生长速度明显减慢,倍增时间明显延长,细胞集落形成数明显减少,BrdU掺 人细胞比例降低。结论:外源HCAP1基因产物的过表达对Raji细胞的增殖有抑制作用。

转染mFas配体的COS-7细胞诱导Fas^+淋巴瘤细胞系(Yac-1)凋亡

本研究探讨通过Fas配体(Fas ligand,FasL)-Fas途径进行免疫治疗淋巴瘤的可能性。常规转化pBillneo-mFasL至大肠杆菌DH5α,经扩增、质粒抽提和纯化后,进行限制性内切酶酶切、mFasL基因PCR及其产物DNA测序,以鉴定pBillneo-mFasL内mFasL基因一级结构及插入方向;用脂质体法转染 pBillneo-mFasL至猴肾COS-7细胞,G418选择培养后,Western印迹分析外源性mFasL cDNA基因表达水平,将高表达mFasL的COS-7细胞与Fas^+小鼠淋巴瘤细胞系Yac-1以不同比例混合培养,5小时后收集悬浮的Yac-1细胞,用膜联蛋白(annexin)V/PI标记后,借助FCM观察细胞调亡率。结果表明,质粒pBillneo-mFasL的EcoRI酶切获得920 bp和7227 bp产物,Hind Ⅲ酶切获得1293 bp和6807 bp产物,初步证实插入mFasL cDNA片段与理论预计大小一致,并系正向插入;PCR扩增出自起始密码子(ATG)至终止密码子(TAA)后+36 bp的mFasL cDNA全长890 bp序列,DNA测序结果与基因库已知序列完全一致;pBillneo-mFasL转染COS-7细胞,并经G418选择培养后,Western印迹检测到明显mFasL蛋白质表达;当用这种高表达mFasL蛋白质的COS 7细胞与Fas^+ Yac-1细胞以1:1,5:1和10:1混合培养5小时后,用annexin V/PI标记悬浮Yac-1,结果后者调亡率分别为(22±4.8)％,(32.18±7.8)％和(51.8±5.4)％,与?

Bcl-2 siRNA对淋巴瘤细胞系CA46凋亡的影响

本研究探讨bcl-2 siRNA对淋巴瘤细胞系CA46凋亡及bcl-2基因表达的影响。设计并合成1条siRNA,用阳离子脂质体法转染CA46细胞。转染后48小时收集CA46细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡及凋亡过程中线粒体跨膜电位改变,用RT-PCR方法和流式细胞仪分别检测CA46细胞bcl-2 mRNA和BCL-2蛋白的表达。结果表明:bcl-2 siRNA转染CA46细胞48小时后,CA46细胞出现凋亡且线粒体跨膜电位发生变化;bcl-2 mRNA和BCL-2蛋白表达均显著降低。结论:bcl-2 siRNA可特异性抑制淋巴瘤细胞CA46 bcl-2基因的表达,改变CA46细胞线粒体跨膜电位诱导其凋亡。