榄香烯对白血病Raji细胞系的生长抑制和诱导凋亡作用的实验研究

榄香烯是中药温莪术中的抗癌有效成分，属不含氧的倍半烯烃类，临床实践已证实其具有抑制肿瘤细胞生长作用，目前又发现其具有诱导肿瘤细胞凋亡作用，而诱导肿瘤细胞凋亡是近年来治疗肿瘤的新途径［１］，因此说榄香烯是一种很有前途和价值的抗肿瘤制剂。本组主要研究榄香...

转染B7-1基因的Raji和Jurkat细胞诱导细胞因子mRNA表达的研究

为探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用,利用脂质体介导的转基因技术将B7基因导入恶性血液病细胞系Raji和Jurkat细胞,用流式细胞术检测转基因前、后B7-1基因的表达,用RT-PCR检测T细胞表面细胞因子IL-2,IL-4和IFN-γ mRNA的表达及这3种细胞因子在转基因后4,12,20及48小时的时间动态变化。结果发现,B7^+ Raji细胞可诱导T细胞分泌细胞因子IL-2,IL-4和IFN-γ,B7^+ Jurkat细胞可诱导IL-2和IFN-γ的分泌,而B7^- Raji细胞及B7^- Jurkat细胞均未诱导细胞因子的分泌。IL-2和IL-4在T细胞活化4小时即可检测到,IFN-γ在T细胞活化12小时可检测到,在20小时出现峰值。结论:B7-1基因的导入可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-1在T细胞活化和分化中起着更主要的作用。

亚砷酸联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导人淋巴瘤细胞Raji凋亡的研究

本研究探索亚砷酸、硼替佐米对人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的协同诱导凋亡作用。小剂量亚砷酸、硼替佐米单用以及二者联合分别处理Raji细胞,用台盼蓝拒染法计数活细胞数和细胞生长抑制率;用流式细胞术分析细胞凋亡和周期的变化;以Western blot检测Caspase-3、BCL-2、BAX、JNK2、IκB-α等凋亡相关元件在蛋白水平的变化。结果表明:相比于单用亚砷酸和硼替佐米,以小剂量亚砷酸联合硼替佐米处理Raji细胞后,细胞生长受明显抑制(p<0.01),细胞凋亡比例增加(p=0.001),但细胞周期未见明显阻滞;在蛋白水平,细胞凋亡相关元件Caspase-3、BAX和IκB-α表达增加,而BCL-2和JNK2表达量下降。结论:小剂量亚砷酸联合硼替佐米能更有效地诱导Raji细胞凋亡,并具有协同作用。该作用可能是通过抑制NF-κB和JNK2通路实现的。

酪氨酸磷酸酶抑制剂正矾酸钠对Raji淋巴瘤细胞增殖与凋亡的影响及机制探讨

为了探讨蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPase)通路在淋巴瘤细胞增殖与凋亡中的作用及机制,应用细胞培养结合MTT检测,光镜及电镜形态学观察,DNA凝胶电泳,流式细胞术和RT-PCR研究了特异的酪氨酸磷酸酶抑制剂正矾酸钠(Na_3VO_4)对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的影响。结果:MTT检测及CFU-Raji培养显示Na_3VO_4对Raji细胞呈浓度依赖性抑制作用;倒置显微镜下原位观察发现随Na_3VO_4浓度增加,细胞体积明显缩小,核固缩、核染色质核膜下聚集,呈典型凋亡小体状;细胞胞体出芽,核染色质凝聚、核碎裂,电镜观察出现典型凋亡细胞;膜联蛋白染色显示Na_3VO_4诱导Raji细胞凋亡,线粒体跨膜电位下降,且在一定范围内呈浓度依赖性;DNA凝胶电泳出现DNA梯形条带;流式细胞术及RT-PCR示Na_3VO_4下调Bcl-2蛋白及mRNA的表达;细胞周期分析显示经Na_3VO_4处理的细胞出现G_2-M期阻滞、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)及mRNA的表达下调。结论:PTPase通路信号传导参与了Raji细胞增殖与凋亡过程的调节,加入其特异抑制剂Na_3VO_4可通过下调细胞周期蛋白B1的表达引起G_2-M期阻滞抑制增殖、下调Bcl-2的表达及降低线粒体跨膜电位诱导Raji细胞凋亡。

本期专题:肿瘤干细胞的异质性

1多发性骨髓瘤千细胞：表面标记和信号传导通路的作用与意义，详见本刊2010年14卷1期152页。2肿瘤干细胞与千细胞：来源、分化及其相关性，详见本刊2009年13卷49期9743页。3人淋巴癌Raji细胞系中的边缘细胞：淋巴瘤干细胞存在之可能，详见本刊2011年15卷6期1070页。

CD45单抗及188Re-亲和素二步法预定位对淋巴瘤Raji细胞的放射免疫效应研究

目的 探讨CD45单抗及188Re-亲和素（Avidin）二步法预定位对人淋巴瘤Raji细胞的放射免疫效应.方法 188Re对CD45单抗及Avidin的标记采用直接标记法,采用纸层析法测定标记率及放化纯度.分析188Re-CD45单抗与Raji细胞的体外结合能力,并进行体外竞争结合实验,采用CCK-8法测定二步法预定位组、188Re-CD45单抗组、188Re-Avidin组和188ReO4-组对Raji细胞的增殖抑制效应,计算Raji细胞存活率和抑制率.结果 188Re-CD45单抗与Raji细胞的特异性结合率为（70.92±1.91）％,同时加入188Re-CD45单抗和过量的CD45单抗,则细胞结合率平均为（7.96±0.87）％.二步法预定位组、188 Re-CD45单抗组、1888Re-Avidin组和1888ReO4-组对Raji细胞的增殖均有抑制作用,抑制率与放射性活度呈正相关（r=0.907 ～0.992,P＜0.05）;在相同放射性活度下,二步法预定位组在各时间点的抑制作用均高于188 Re-CD45单抗组、188Re-Avidin组和188 ReO4-组（t=124.76 ～ 607.98,P＜0.05）.结论 188 Re-CD45单抗可特异性地与Raji细胞结合,CD45单抗及188 Re-Avidin二步法预定位对人淋巴瘤Raji细胞具有明显的抑制作用.

p27^(kip1)及其出核相关分子激活蛋白1辅因子在淋巴瘤细胞中的表达及相互关系

目的探讨 p27^(kip1)及其出核相关分子激活蛋白1(AP-1)的辅助因子 Jab1在淋巴瘤细胞中的表达变化及相互关系。方法采用血清饥饿合并释放方法同步化处理淋巴瘤细胞系 Jurkat 和Raji 细胞,分别采用 Western blot 及 RT-PCR 技术检测 p27^(kip1)、Jab1在淋巴瘤细胞中的蛋白表达水平和mRNA 表达水平变化;采用来普霉素 B(LMB)刺激增殖过程中的淋巴瘤细胞,检测 p27^(kip1)、Jab1的表达变化;构建人 Jab1基因的 pcDNA3.1-myc-Jab1的真核表达质粒,脂质体转染 Jurkat 细胞,配合免疫荧光技术检测 p27^(kip1)的亚细胞定位情况;免疫沉淀检测 Jurkat 和 Raji 细胞中 p27^(kip1)与 Jab1的结合情况。结果血清饥饿导致 Jurkat 和 Raji 细胞生长周期停滞,p27^(kip1)蛋白总量增加,Jab1蛋白总量减少。血清释放后两者的蛋白水平呈现相反的表达变化,而 p27^(kip1)mRNA 水平无明显改变。LMB 可以抑制由血清释放引起的细胞增殖,在此过程中 p27^(kip1)表达上调,Jab1表达下调。转染 Jab1真核表达质粒的 Jar-kat 细胞 p27^(kip1)定位有明显的改变。免疫沉淀结果显示在 Jurkat 和 Raji 细胞中 p27^(kip1)与 Jab1相互结合。结论 Jab1可能通过与 p27^(kip1)结合来介导 p27^(kip1)的核内外分布并影响其表达,进而影响 p27^(kip1)的功能状态,从而参与调控淋巴瘤细胞的生长。