Rakicidin B1酯化衍生物的体外抗肿瘤和抗菌活性

目的本研究对rakicidin B1化合物3位羟基进行结构修饰,得到rakicidin B1酯化反应的系列衍生物,并考察其体外抗肿瘤及抗菌活性。方法以rakicidin B1为原料,经与不同的氯甲酸酯反应,再经水洗、制备、冻干制得目标化合物,其结构经~1H NMR,HR-ESI-MS确证。结果对酯化反应的4个衍生物进行体外抗肿瘤及抗菌活性测定,结果表明,化合物1~4对常氧和乏氧培养下的人结肠癌细胞HCT-8和人胰腺癌细胞PANC-1均具有较好的体外抑制作用;总体上看化合物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、艰难梭菌和万古霉素耐药粪肠球菌等10株革兰阳性菌活性均低于对照品,活性较弱。结论化合物1和3对人结肠癌细胞HCT-8和人胰腺癌细胞PANC-1具有较强的乏氧抗肿瘤活性,可作为新型的抗癌备选药物进行进一步研究。

Rakicidin B药动学和安全性初步研究

目的对海洋微生物来源的化合物rakicidin B开展药动学和安全性初步评价。方法采用静脉和口服给药初步研究rakicidin B的药动学和急性毒性。鼠伤寒沙门菌回复突变试验检测rakicidin B的遗传毒性。结果 SD大鼠口服给予5.0mg/kg rakicidin B后血浆中基本检测不到药物;SD大鼠静脉0.2mg/kg,Cmax为490.67ng/mL,AUC(0~0.083)为376.07h·ng/mL;rakicidin B口服毒性低,大鼠口服最大耐受量MTD大于1000mg/kg;静脉毒性MTD大于1.0mg/kg;rakicidin B在本试验所确定的125μg/皿剂量范围内,对鼠伤寒沙门菌回复突变(Ames)标准试验菌株无明显致突变性。结论 Rakicidin B总体安全性好,无急性毒性作用及无遗传毒性。研究结果为rakicidin B进一步的临床前试验研究提供参考。

海洋微生物来源的肿瘤细胞抑制剂rakicidin B在乏氧条件下的作用机制初探

探索海洋微生物来源的rakicidin B在乏氧条件下对人结肠癌细胞系HCT-8细胞的作用机制。本研究采用克隆形成实验、划痕法和Transwell法测定rakicidin B对乏氧条件下HCT-8细胞克隆形成能力、细胞迁移与侵袭的影响;以实时荧光定量RTPCR和Westernblot检测HCT-8细胞株内HIFs关键基因(HIF1α、HIF2α)以及下游调控因子(VEGF、GLUT1、ABCG2、OCT4)转录水平及蛋白表达情况。实验结果表明:在乏氧条件下,rakicidin B可以抑制HCT-8细胞的克隆形成以及迁移与侵袭;同时,rakicidin B可以显著下调缺氧诱导因子以及相关蛋白的转录与表达水平。初步揭示rakicidn B在乏氧条件下抑制肿瘤细胞HCT-8增殖的分子机制是通过HIF1α和HIF2α信号通路调节下游相关基因转录与表达的结果。

Rakicidin B1发酵提取液活性炭脱色工艺的研究

目的研究rakicidin B1发酵提取液的脱色工艺条件,提高纯化后rakicidin B1样品的质量。方法以UV和HPLC为检测方法,以脱色率和rakicidin B1保留率为指标,先通过单因素实验考察活性炭用量、脱色时间、脱色温度以及pH值对指标的影响。在单因素基础上,采用4因素3水平正交试验分析各因素与两个指标的关系。结果 Rakicidin B1发酵提取液采用活性炭脱色最佳条件为活性炭用量0.5%、脱色时间40min、脱色温度50℃、pH7.0,在该条件下活性炭脱色率达74.53%,rakicidin B1保留率为85.66%。结论该脱色工艺简单可靠,脱色效果较好,适合于工业化生产。

应用响应面法优化rakicidin B的提取工艺

目的建立小单孢菌FIM02523菌液中rakicidin B组分安全有效的提取方法。方法在单因素试验以及稳定性研究的基础上,选取三因素三水平,采用Box-Behnken响应面法优化设计确定rakicidin B组分最佳提取条件。结果与结论对rakicidin B提取率的主要影响因素依次为提取次数、料液比和提取溶剂的体积百分比浓度。优化修正后的提取条件为:常温下(4~40℃)、pH值6~7.5、提取溶剂为90%乙醇溶液、料液比1:3(V/V)、提取时间0.5h和提取次数2次,rakicidin B总提取率达到98.58%。

海洋小单孢菌FIM02523产rakicidin B发酵工艺研究

目的提高海洋小单孢菌FIM02523发酵液中的生物活性成分rakicidin B含量。方法采用单因素实验、正交设计实验等方法优化发酵培养基组成比例及培养条件。结果确定了最优rakicidin B发酵培养基:可溶性淀粉4.0%,蔗糖1.0%,大豆蛋白胨1.0%,酵母粉2.0%,甘氨酸0.1%,NaCl 0.5%,MgSO4 0.05%,CaCO3 0.5%;最优摇瓶发酵条件:发酵周期为120h,接种量5.0%,500mL摇瓶装量100mL,摇床转速220r/min,发酵温度30℃,培养基初始pH值为7.5。结论优化后发酵工艺rakicidin B的发酵效价较初始工艺提高了约7.3倍。

HPLC测定发酵液中Rakicidin B的含量

建立可快速准确测定海洋小单孢菌发酵液中Rakicidin B含量的HPLC方法。采用液相色谱系统(HPLC)Agilent 1260 infinifty,色谱柱:Syncronis C18(5μ,4.6×250mm)。流动相:乙睛:水=85:15,检测波长为260 nm,柱温为30℃。结果:Rakicidin B浓度范围在30~600ug/ml线性良好,相关系数为0.9998(n=7);发酵液样品的加样回收率为99.2~105%,平均回收率101.57%,回收率相对标准偏差RSD为2.2049%(<3%),方法的精密度RSD为0.444%。结论:方法准确可靠,可以用于Rakicidin B发酵、提炼及纯化过程的含量测定。