钩藤药材的特征图谱建立、化学模式识别分析及其与不同基原、混伪品的鉴别

目的建立不同产地钩藤药材超高效液相色谱(UPLC)特征图谱,并进行化学模式识别分析,同时对钩藤不同基原样品及其混伪品进行鉴别。方法采用UPLC法建立43批不同产地钩藤药材的特征图谱,结合聚类分析及主成分分析对其进行质量分析,然后对钩藤不同基原样品及其混伪品进行鉴别。结果建立了钩藤药材UPLC特征图谱,标定了13个共有峰,并指认峰2为儿茶素、峰3为绿原酸、峰4为隐绿原酸、峰7为异绿原酸B、峰8为异去氢钩藤碱、峰9为异钩藤碱、峰10为去氢钩藤碱、峰11为异绿原酸C、峰12为钩藤碱和峰13为喜果苷。通过聚类分析可将43批钩藤药材按照产地分为5类。进一步通过主成分分析发现,江西、湖南产钩藤药材主成分综合得分较高,为0.264~2.904分。通过特征图谱可将钩藤不同基原样品及其混伪品进行有效区分。结论建立的UPLC特征图谱可用于钩藤药材的质量控制,且本研究发现江西、湖南产钩藤药材质量较优。

基于网络药理学及实验验证探讨罗布麻叶-钩藤药对治疗高血压病的作用机制

目的:利用网络药理学及实验验证的方法探讨罗布麻叶-钩藤药对治疗高血压病的作用机制。方法:使用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库,筛选罗布麻叶-钩藤主要化学成分和作用靶点,高血压病疾病靶点通过GeneCards、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)查询,将罗布麻叶-钩藤的作用靶点与疾病靶点交集得到罗布麻叶-钩藤药对治疗高血压病的共同靶点,将共同靶点导入STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络。将共同靶点导入DAVID在线数据库进行基因本体(GO)与京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,使用AutoDock和PyMOL进行分子对接和可视化。采用两肾一夹法建立高血压病大鼠模型,治疗组大鼠给予罗布麻叶-钩藤药液连续灌胃2周,模型组与空白组给予等体积0.9%氯化钠溶液连续灌胃2周。比较3组收缩压(SBP)、胸主动脉病理结构及炎症指标水平。结果:筛选后得出罗布麻叶的活性成分6个,钩藤的活性成分33个,罗布麻叶-钩藤药对治疗高血压病的靶点152个,包括肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-1α、IL-2、IL-10、趋化因子配体2 (CCL2)、细胞间黏附分子-1 (ICAM1)等。KEGG富集分析共得到TNF信号通路、缺氧诱导因子-1 (HIF-1)信号通路、Toll样受体(TRL)信号通路等122条信号通路。分子对接结果显示,山柰酚和槲皮素与TNF、CCL2和IL-8等结合较好。实验结果显示罗布麻叶-钩藤药对显著降低了高血压病大鼠的血压,有效改善了高血压病大鼠胸主动脉的病理组织结构,降低了高血压病大鼠血清IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α水平。结论:罗布麻叶-钩藤药对可通过多成分、多靶点、多通路治疗高血压病。

基于数据挖掘分析含钩藤方剂的配伍及组方规律

目的:基于数据挖掘探讨含钩藤方剂的配伍及组方规律,为钩藤的规范科学使用提供依据。方法:收集含有钩藤的相关中药方剂,并统计方剂涉及中药的使用频次、性味归经等基本信息。借助VOSviewer 1.6.15软件展示含钩藤方剂的中药配伍密度;基于Apriori算法、利用IBM SPSS Modeler 18.0软件挖掘中药间配伍组合,并绘制关联规则网络。结果:共纳入方剂313首,涉及中药330味。与钩藤配伍的中药以平肝息风药、清热药、解表药为主,临床上主要治疗眩晕、惊风、癫痫等疾病。配伍密度及关联分析显示常与钩藤配伍的中药有甘草、天麻、朱砂、僵蚕、牛黄等。结论:钩藤常与平肝息风类、清热类、解表类中药配伍应用,发挥清热平肝、息风止痉等功效,临床多用于治疗眩晕、惊风、癫痫等疾病。

HPLC法测定不同商品规格桂林产钩藤中4种生物碱的含量

[目的]测定不同商品规格桂林产钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱的含量。[方法]采用岛津Inertsil ODS3色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.1%三乙胺(A)-乙腈(B),流速为1.0 ml/min,检测波长为245 nm,进样量为10μl;测定双钩、单钩、混钩(一级、二级)、钩藤枝等不同商品规格桂林产钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱4种生物碱的含量。[结果]钩藤碱含量由高到低依次是:钩藤枝>单钩>混钩(二级)>双钩>混钩(一级);异钩藤碱含量由高到低依次是:钩藤枝>单钩>混钩(二级)>双钩>混钩(一级);去氢钩藤碱含量由高到低依次是:双钩>混钩(一级)>混钩(二级)>钩藤枝>单钩;异去氢钩藤碱含量由高到低依次是:双钩>混钩(一级)>混钩(二级)>单钩>钩藤枝;四种生物碱总含量由高到低依次是:双钩>混钩(一级)>钩藤枝>混钩(二级)>单钩。[结论]本研究所用方法简便快捷,可为市场划分钩藤不同商品规格提供参考依据。

Effects of Tianma(Rhizoma Gastrodiae)and Gouteng(Ramulus Uncariae Rhynchophyllae cum Uncis)on cytochrome P450 enzyme activities in rats

OBJECTIVE:To investigate the efficacy of Tianma(Rhizoma Gastrodiae)and Gouteng(Ramulus Uncariae Rhynchophyllae cum Uncis)on cytochrome P450(CYP450)enzyme activities in rats.METHODS:A cocktail strategy was followed to evaluate the influence of Tianma(Rhizoma Gastrodiae)and Gouteng(Ramulus Uncariae Rhynchophyllae cum Uncis)on the activities of CYP450 isoforms(CYP1A2,CYP3A4,CYP2E1,CYP2C19,CYP2C9,CYP2D6),which were determined by changes in the pharmacokinetic parameters of six probe drugs,theophylline,dapsone,chlorzoxazone,omeprazole,tolbutamide and dextromethorphan.Study groups included,Control group(CG),Tianma(Rhizoma Gastrodiae)group(TM),Gouteng(Ramulus Uncariae Rhynchophyllae cum Uncis)group(GT)and Tianma Gouteng(Gastrodia Uncaria)group(TMGT).RESULTS:No significant differences between Tianma(Rhizoma Gastrodiae)and control groups were found.Compared with the control group,in the Gouteng(Ramulus Uncariae Rhynchophyllae cum Uncis)group both the AUC and t1/2 of dapsone and tolbutamide were reduced,whereas the CL(clearance rate)of dapsone and tolbutamide were increased.Compared with the control group,in the Tianma Gouteng group,the AUC and t1/2 of dapsone and tolbutamide were reduced,the CL of dapsone and tolbutamide were increased,and the AUC and t1/2 of chlorzoxazone were increased and the CL of chlorzoxazone was reduced.CONCLUSION:Tianma(Rhizoma Gastrodiae)has no significant effect on the six CYP450 subtypes.The activities of CYP3A4 and CYP2C9 were increased by Gouteng(Ramulus Uncariae Rhynchophyllae cum Uncis).The activities of CYP3A4 and CYP2C9 were increased,whereas the activity of CYP32E1 was reduced by combined Tianma(Rhizoma Gastrodiae)and Gouteng(Ramulus Uncariae Rhynchophyllae cum Uncis).

钩藤多动合剂的药效作用及用代谢物组学方法研究其生化机制

目的 用代谢物组学方法研究钩藤多动合剂(简称多动合剂)的药效作用及其治疗儿童多动症的生化机制,观察药物对小鼠脑内神经递质的影响。方法 采用攀爬实验和自发行为实验研究多动合剂对去水吗啡小鼠模型的药效作用,同时用高效液相色谱-电化学检测方法研究其生化机制,观察药物对小鼠脑内及血浆中单胺类神经递质多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)的影响。结果 去水吗啡激动黑质纹状体系统内DA受体,使系统内DA功能增强,引起小鼠攀爬行为和自发活动增强,多动合剂可抑制去水吗啡引起的小鼠的攀爬行为,并减弱自发活动的增强。对去水吗啡引起的血浆中DA和NE含量的改变及脑组织中DA含量的改变,多动合剂均能予以校正,使各项指标接近空白对照组水平。实验结果表明多动合剂可提高小鼠血浆中DA含量,并降低脑组织中DA的含量。结论 多动合剂能调整单胺类神经递质的失衡以此达到治疗多动综合征的目的。

钩藤提取物对MPTP诱导帕金森病模型小鼠神经元的影响

目的探讨钩藤提取物对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导帕金森病(PD)模型小鼠神经元保护的作用机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、钩藤组及美多芭组,腹腔注射MPTP法制备PD小鼠模型。行为学测试小鼠抓握和肢体运动协调能力;生化法测定小鼠中脑黑质超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)水平,酶联免疫法测定白细胞介素(IL)-1β、IL-6的活性。结果与对照组比较,模型组小鼠自主活动次数减少、爬杆时间延长(P<0.05),脑组织SOD、GSH-Px酶活性明显下降,MDA、IL-1β、IL-6含量明显上升(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,钩藤组和美多芭组小鼠自主活动次数增多、爬杆时间缩短(P<0.05),脑组织SOD、GSH-Px酶活性明显上升,MDA、IL-1β及IL-6含量明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论钩藤提取物对PD模型小鼠的治疗作用可能是通过清除氧自由基、提高机体抗氧化能力和抑制炎症反应,从而减少神经元的凋亡实现的。

钩藤及其有效成分的药理研究进展

回顾分析近年来国内外对钩藤及其所含主要化学成分的药理研究进展 ,提示钩藤对心血管系统。

中药钩藤中钩藤碱含量的测定

目的建立优化钩藤药材中钩藤碱的提取及含量测定方法。方法采用甲醇冷浸超声法处理钩藤药材,Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相及梯度:甲醇∶0.01mol/L醋酸铵缓冲液(氨水调pH=6.0)0～20min内比例由25∶75递增至50∶50;流速:1.0ml/min;柱温:25℃;检测波长:245nm;进样量:20μl。结果钩藤碱在0.25～64.0μg/ml范围内线性良好,回归方程为y=3.64×104x-2.13×104(r=0.9995),相对回收率为95.95%～114.40%,重复性试验RSD为6.50%,稳定性试验钩藤碱高、中、低浓度溶液室温5d内RSD为4.62%、2.65%和4.58%。结论本测定方法准确可靠,重复性好,可应用于钩藤药材中钩藤碱含量的测定。

天麻、钩藤降血压作用的实验研究

目的 研究天麻、钩藤的水提液及其混合液的降血压作用。方法 :用肾动脉结扎法建立肾型高血压大鼠模型 ,灌胃给予中药水提液 ,观察大鼠血压变化。结果 天麻、钩藤水提液及其混合液对肾型高血压大鼠均有一定的降压作用。但停药后 ,血压回升较快。其中混合液降血压的效果最好。结论 天麻、钩藤水提液的混合液具有显著的降血压作用 ,但药效持续时间较短。

钩藤和莱菔子生物碱抗高血压血管内皮细胞损伤效应

目的探讨钩藤总生物碱配伍莱菔子水溶性生物碱抗高血压大鼠血管内皮细胞损伤的效应及初步机制研究。方法采用腹腔注射N-硝基左旋精氨酸(L-NNA)方法制备大鼠高血压模型;采用无创性套尾法测定大鼠清醒状态下尾动脉收缩压;采用酶联免疫吸附法测定大鼠血浆血管性血友病因子(vWF)、内皮素-1(ET-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和P选择素(P-S)。结果钩藤总生物碱配伍莱菔子水溶性生物碱对L-NNA诱导的高血压大鼠有显著降压效用(P<0.05),并能降低高血压大鼠血浆vWF、ET-1、ICAM-1、VCAM-1和P-S水平(P<0.05)。结论钩藤总生物碱配伍莱菔子水溶性生物碱具有良好降压和血管内皮保护效应,其机制与抑制血管内皮细胞分泌黏附因子、减轻血管壁炎症反应有关。

钩藤对家兔癫癇模型电活动的调制

目的:研究钩藤对癫癇发作的影响。方法:采用脑电图描记术,观察钩藤对毛果芸香碱致癇家兔大脑皮层放电的影响。结果:腹腔注射钩藤后可使癫(?)发作次数及发作持续时间显著减少,发作间隔时间显著延长(P<0.05)。结论:钩藤注射液能明显抑制癫痫模型电活动,提示钩藤具有抗癇作用。

钩藤药材中钩藤碱含量测定方法的建立

目的：建立钩藤药材钩藤碱含量HPLC测定方法。方法：分别对HPLC的色谱柱、流动相、检测波长等色谱条件进行摸索,对样品索式、回流和超声提取方法进行摸索,并采用正交设计的方法考察超声提取的药材破碎度、溶剂浓度、溶剂量和时间。结果：HPLC色谱条件为色谱柱：Gemini C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相∶甲醇—水（含0.002 mol/L三乙胺,冰乙酸调pH至7.5）（64∶36）,流速：1.0 mL/min,检测波长：254 nm。样品供试液制备方法为：药材破碎度为过60目筛的粉末,提取溶剂为75%甲醇,溶剂加入量为15 mL,超声处理40 min。该方法钩藤碱在0.020 9-1.672 0μg范围内有良好线性关系,平均回收率为98.96%,RSD=0.69%（n=6）。结论：建立的含量测定方法简易、准确,可作为钩藤药材钩藤碱含量测定方法。

HPLC法测定钩藤提取物中钩藤碱的含量

[目的]测定钩藤提取物中有效成分钩藤碱的含量。[方法]采用HPLC法测定钩藤提取物中钩藤碱的含量,色谱柱为DiamonsilC18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为无水甲醇-水(60∶40,V/V)并含10 mmol/L三乙胺,冰醋酸调pH 7.5;柱温为30℃;流速为1.0ml/min;紫外检测波长为254 nm。[结果]钩藤碱浓度在11.0～110.0μg/ml范围内与峰面积的线性关系良好(R=0.999 6),平均回收率为96.84%,RSD为1.46%。[结论]该方法简单、快速、准确,可用于钩藤提取物中钩藤碱的含量测定。

正交设计法对复方中钩藤碱水煮工艺的研究

采用正交设计法对钩藤复方中钩藤碱的水煮时间和其它工艺条件进行了优选研究，确定了合理可行的工艺条件，即：用碎钩藤，无须浸泡，水煮２次，共５０ｍｉｎ，共加水２５倍，在此工艺条件下，钩藤碱的提取率为３９．７１％。含量测定方法为薄层扫描法。

槲寄生、钩藤、杜仲降压作用及急性毒性的实验研究

目的 研究槲寄生、钩藤、杜仲的水提液及其混合液的降血压作用及急性毒性反应。方法 用肾动脉结扎法制备高血压大鼠模型 ,灌胃给予中药水提液 ,考察降血压作用。用小鼠灌胃考察急性毒性。结果 槲寄生杜仲混合水提液、钩藤杜仲混合水提液、槲寄生钩藤杜仲混合水提液均能降低高血压大鼠的血压 ,槲寄生杜仲混合水提液和槲寄生钩藤杜仲混合水提液的效果更为明显 ,能将大鼠血压降到正常水平 ,并维持稳定。结论 槲寄生、钩藤、杜仲三味中药不同配伍有较好的降压作用 ,且三种混合水提液对小鼠按照最大耐受量灌胃 ,未见急性毒性反应。

钩藤的化学成分研究

[目的]对钩藤的化学成分进行研究。[方法]利用柱层析对钩藤的化学成分进行分离纯化,然后根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定所得到化合物的结构。[结果]从钩藤中分离得到了5个化合物,分别鉴定为乌苏酸、β-谷甾醇、β-胡萝卜苷、柯诺辛碱和钩藤碱。[结论]该方法分析研究了钩藤的化学成分,为钩藤的进一步开发和利用提供参考。

钩藤总生物碱提取工艺研究

目的:优选钩藤总生物碱的提取工艺。方法:以钩藤总碱含量和提取液干膏率为综合评价指标,对乙醇用量、浓度、提取时间及次数四因素进行正交考察。结果:钩藤总碱的最佳提取工艺为10倍量75%乙醇提取3次,提取时间2h。结论:提取工艺可稳定可行。

RP-HPLC法测定钩藤煎剂中钩藤碱含量及变化

[目的]测定钩藤中钩藤碱在沸水后下煎药法中煎出量及变化规律。[方法]采用RP-HPLC法,HypersilBDSC18柱,(150mm×4.6mm,5μm),以甲醇∶水(70∶30)为流动相,流速1.0ml/min,波长254nm,柱温25℃。[结果]钩藤碱在0.19μg～0.95μg范围内与峰面积线性关系良好r=0.9990。[结论]钩藤在沸水后下煎药法中,其钩藤碱在汤药中的含量在11.4min达高峰,其后汤药中钩藤碱的含量逐渐降低。

钩藤生物碱闪式提取工艺研究

目的:确定闪式提取钩藤药材生物碱成分的最佳工艺条件。方法:运用均匀试验设计,以提取液中去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱含量及出膏率为指标,采取多指标综合评分法结合主成分分析,对闪式提取的影响因素进行考察。结果:闪式提取的最佳工艺是:将钩藤药材粉碎,加入75%乙醇溶剂的料液比为1:50,提取时间50 s;出膏率10.1%,两种生物碱成分总量0.53 mg/g。结论:采取闪式提取法进行钩藤生物碱的提取,提取效率高,提取工艺操作简便、快速,更利于保持钩藤生物碱类成分稳定。