Morphology and mechanical performance between the skin surface of Rana dybowskii and Bufo gargarizans

Anuran skin is a typical natural biomaterial with multifunctional features.A specific comparison of mechanical performance and morphology related to them was performed in the skin of Rana dybowskii and Bufo gargarizans using the tensile testing technique and morphological equipment.Rana dybowskii's skin has soft smooth surface covered by polygonal epidermal cells,while the Bufo gargarizans species has tough and uneven skin surface due to numerous verrucae structures.The collagen fibre bundles in lower dermis of Bufo gargarizans have wavelike organisation while the bundles of Rana dybowskii show a parallel arrangement.The mean elastic modulus of Rana dybowskii was nine times higher than that of Bufo gargarizans.This study clarified that the arrangement of collagen fibres play an important role in the strength and elasticity of skin material.

中国东北地区林蛙属物种的分类学研究(两栖纲:蛙科)

用比较分类学方法和数值分类学方法相配合，对我国东北产林蛙属物种多样性和原各命名物种的有效性及与中国林蛙Ｒａｎａｃｈｅｎｓｉｎｅｎｓｉｓ的关系进行了探讨，结果认为：地方名为哈士蟆的原中国林蛙的东北居群应属于我国蛙类的一新纪录东北林蛙Ｒ．ｄｙｂｏｗｓｋｉ，而Ｒ．ｓｅｍｉｐｌｉｃａｔａ（Ｎｉｋｏｌ’ｓｋｉ，１９１８）和Ｒ．ｃｈｅｎｓｉｎｅｎｓｉｓｃｈａｎｇｂａｉｓｈａｎｅｎｓｉｓ（魏刚等，１９９１ａ）为该种的同物异名；重新界定了东北林蛙和中国林蛙的分布区，提出中国林蛙仅限于中国分布。

中国林蛙皮多糖类天然保湿因子的提取与鉴定

采用复合酶解法从中国林蛙皮中分离提取出天然保湿因子,并采用红外吸收光谱法对天然保湿因子进行了定性测试,采用咔唑(cabazole)法和Elson-Morgan法对天然保湿因子的含量及纯度进行了测定。结果表明:采用本研究方法分离、提纯的天然保湿因子为透明质酸(Hyaluronic acid,HA),其外观呈白色粉末状,葡糖醛酸含量43.2％,氨基葡糖含量39.7％,无臭、无味、无毒,具有强保湿性,可应用于保健食品、化妆品及眼科药物。

圈养与野生东北林蛙皮肤营养成分比较研究

采用化学及仪器分析方法,对圈养和野生雌性林蛙皮肤的几种营养成分进行了比较研究。结果表明:圈养林蛙皮肤的粗脂肪和总磷脂含量分别比野生林蛙高10.88%和15.14%。野生蛙皮的Ca、P含量较圈养的分别高出70.61%和22.49%,圈养蛙皮的Zn含量较野生的高14.38%。野生蛙皮较圈养蛙皮的80%甲醇提取率高2.36%,对提取物进行柱层析结果显示圈养蛙皮与野生蛙皮不同浓度乙醇洗脱物中氨基酸种类存在差异。

超声波-双酶法协同提取林蛙皮多糖的工艺优化

以野生中国林蛙皮为原料,优化超声波-双酶法协同提取林蛙皮多糖的工艺参数。结果表明:超声波提取优化工艺条件为料液比1∶40(g/mL),超声功率600W,超声处理时间25min,提取多糖得率为1.18%。在超声波优化结果基础上,进行双酶法处理,得出最佳酶解条件是pH9.0,酶解温度45℃,碱性蛋白酶添加量2.3%、胰蛋白酶添加量2.8%,酶解时间4h,多糖得率为2.286%。由此可见,超声波和酶法协同处理是提取林蛙皮多糖的一种有效的提取方法。

中国林蛙皮肤抗菌肽基因的cDNA克隆

抗菌蛋白蛙皮抗菌肽,是两栖类动物中存在的天然免疫物质,在蛙类中仍然保持着一定的活性。我们用提取中国林蛙皮肤总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增得到DNA片段,并与GenBank上登陆的其他蛙类的皮肤抗菌肽序列进行比较,发现此序列是一个新的蛙皮肤抗菌肽序列。PCR产物与pMD18-T连接,得到阳性重组体pMD18-RTCD,将阳性重组体进行测序,分析蛙皮素的氨基酸序列,显示它属于蛙皮抗菌肽家族。此外,中国林蛙抗菌肽氨基酸序列包含C-末端残基,同时具有两栖类动物抗菌肽的特征。这些信息对将来研究两栖类动物的天然免疫的分子机制具有重要作用,为应用基因工程技术对我国林蛙抗菌肽基因进行克隆表达奠定了基础。

中国林蛙皮肤抗菌活性肽的分离提取

将中国林蛙毁双髓,置冰浴中迅速剥皮,冲洗血污后粉碎,经 80%甲醇抽提 2次;再经sephadexG-100、sephadexG-25和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离等,从林蛙皮肤中分离获得 5种小分子多肽。抗菌活性试验表明:经sephadexG-25凝胶过滤获得的小分子多肽洗脱峰第 6峰,对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌具有较强的抗菌活性;SDS-PAGE电泳表明为单一区带,此抗菌活性多肽的相对分子量为 4. 31ku。

林蛙皮胶原蛋白的提取及抗氧化性

用木瓜蛋白酶提取林蛙皮胶原蛋白,采用单因素试验和正交试验设计优选最佳提取工艺,并对林蛙皮胶原蛋白的抗氧化性进行研究。结果表明:林蛙皮胶原蛋白的最佳提取工艺是加酶量为1%,料液比为1∶20(g/mL),pH为5.5于室温反应36 h,此条件下胶原蛋白提取率为24.71%,纯度为72.03%。林蛙皮胶原蛋白具有一定的还原能力,对羟自由基具有一定的清除能力,并且随着浓度的增加抗氧化活性逐渐增强。

中国林蛙蛙皮肽提取工艺的研究

以中国林蛙的皮肤为研究对象,从中提取出一种具有抗菌作用的蛙皮肽。在单因素实验的基础上,通过正交实验筛选出提取蛙皮肽的最佳工艺条件,即甲醇浓度80%,液固比为6,提取时间24h,提取次数3次。

不同提取方法对东北林蛙皮胶原蛋白理化特性的影响

以东北林蛙皮为原材料,用乙酸和胃蛋白酶两种方法对其中所含的胶原蛋白进行提取,最终得到两种胶原蛋白:酸溶性胶原蛋白(ASC)和酶溶性胶原蛋白(PSC),并对这两种胶原蛋白的理化性质及功能特性进行比较研究。结果发现,ASC和PSC在234 nm附近都有强吸收峰,符合胶原蛋白的特征;红外光谱发现ASC在3346.0、2952.0、1662.0、1548.0、1242.0 cm^(-1)有吸收峰,PSC在3322.0、2944.0、1662.0、1551.0、1236.0 cm^(-1)有吸收峰,证明这两种胶原蛋白都存在酰胺A、酰胺B、酰胺Ⅰ、酰胺Ⅱ、酰胺Ⅲ,内部三螺旋结构都保留完整;氨基酸组成表明ASC和PSC都含有18种氨基酸,包括人体所需的8种必需氨基酸,但是组成略有差异;SDS-PAGE电泳结果显示,这两种胶原蛋白都存在β、α1和α2链,符合Ⅰ型胶原蛋白的结构特征;PSC的变性温度较ASC要高,但是保湿率较低,它们的吸湿率和相对溶解度差异不显著(p>0.05);以上结果表明不同提取方法对东北林蛙皮胶原蛋白的结构、功能特性有一定影响,但是不影响胶原蛋白的品质。

木瓜蛋白酶水解林蛙皮制备活性肽的工艺研究

[目的]以林蛙皮为原料,利用木瓜蛋白酶水解法制备活性肽。[方法]选取固液比、酶用量、pH、水解时间和水解温度为影响因素,以活性肽的水解度为考察指标,通过单因素试验和正交试验优选木瓜蛋白酶酶解林蛙皮制备活性肽的最佳工艺条件。[结果]最优工艺条件为固液比1∶4,酶用量14 000 U/g,pH 7.0,水解温度55℃,水解时间4 h。[结论]该研究为林蛙资源的综合利用提供了新的途径。

林蛙皮中胶原蛋白的含量测定研究

目的扩大中国林蛙应用范围,增加其自身经济价值。建立林蛙皮中胶原蛋白的含量测定方法,并考察其中的胶原蛋白含量。方法应用Worssner比色法测定中国林蛙皮水解液中的L-羟脯氨酸的含量,计算出中国林蛙皮中胶原蛋白的含量。结果中国林蛙皮中L-羟脯氨酸的含量为37.7 mg/g,胶原蛋白在林蛙皮中百分比为37.86%。结论 Worssner比色法稳定、有效,可用于测定中国林蛙皮中胶原蛋白的含量测定。林蛙皮中胶原蛋白含量极高,可以作为新的提取来源。

ICP-AES测定林蛙皮肤中多种微量元素

针对林蛙皮肤组织生物有机体的复杂组成,进行微波辅助消解、硝酸过氧化氢湿法消解和低温干灰化法三种制备样品方法比较,利用数理统计方法确定最佳样品处理方法。微波消解法具有时间短、有机质消解能力强和试样溶液均匀性好的特点,可以大大缩短分析流程,在HNO3-H2O2-HCl-H2O酸溶体系,阶段性输出功率条件下进行试样密闭消解制备样品的方法,采用标准溶液基体匹配法消除基体干扰,利用ICP-AES分析技术,同时检测林蛙皮肤组织样品常量和微量元素。该方法经国家猪肝标准物质GBW08551验证,测得方法相对误差为0.17%—6.67%,方法回收率为97.6%—100.6%。各项检测指标均能满足生物样品检测要求,达到满意的测量结果。

电刺激后东北林蛙皮肤分泌物及其抗微生物肽组分的动态恢复

东北林蛙皮肤分泌物排空后,在不同时间点收集其皮肤分泌物,分析皮肤分泌物及其中抗菌肽谱的动态恢复规律。结果表明:电刺激排空后的第0～21天时间范围内东北林蛙皮肤分泌物总量的恢复呈递增趋势;高效液相色谱显示不同时间收集的皮肤分泌物的组分差异不显著(P>0.05,n=5),但各组分恢复的时间并不同步;用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对恢复较快的2个组分峰成分进行抑菌试验,发现2组分均有较强的抑菌活性。用ESI-MS/MS对2组份进行质谱鉴定,确定其氨基酸序列。东北林蛙皮肤分泌物中抗微生物肽的恢复表达优先于其他多肽,该免疫防御策略可为东北林蛙在复杂环境中的生存提供保证。

中国林蛙蛙皮肽抗菌性质及其机理的研究

本实验对从中国林蛙的皮肤中提取的蛙皮肽的抗菌性质及其机理进行了研究。结果表明,该蛙皮肽抗菌谱较广,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、酵母菌都有较好的抗菌效果,其抗菌活性具有很强的热稳定性,且在酸性条件下抗菌活性强,当pH值大于8时丧失抗菌活性。对经蛙皮肽处理的枯草杆菌作电镜扫描检查,发现细菌细胞壁出现破损或穿孔,而对照组细菌壁结构完整,表明该蛙皮肽的抗菌机制是通过破坏细菌细胞壁,使细胞质外流而致菌体死亡。

林蛙皮活性肽对小鼠免疫功能影响的试验研究

[目的]探讨林蛙皮生物活性肽对正常小鼠免疫功能的影响。[方法]将小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组、林蛙皮活性肽低、中、高剂量组,每组10只,连续灌胃给药28 d后,采用ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,检测T淋巴细胞增值,并通过溶血空斑试验和血清溶血素试验检测林蛙皮活性肽对小鼠体液免疫功能的影响。[结果]林蛙皮生物活性肽可明显促进ConA诱导的淋巴细胞增值,增加抗体生成细胞数量,增强血清溶血素抗体效价水平。[结论]林蛙蛙皮生物活性肽对小鼠的细胞免疫和体液免疫功能均具有增强作用。

陶瓷膜过滤在分离提取中国林蛙皮中透明质酸的应用研究

目的:研究陶瓷膜过滤技术对中国林蛙皮中透明质酸(HA)的纯化工艺。方法:以膜通量或截留率为指标,运用单因素试验优选中国林蛙皮中HA的陶瓷膜纯化工艺参数。结果:陶瓷膜最佳的分离纯化条件为孔径500 nm,操作压力0.1 MPa,滤过25 min,HA截留率91.67%;HA中葡萄糖醛酸质量分数为36.68%,蛋白质质量分数为0.58%,该纯度已达到化妆品级别。结论:该陶瓷膜过滤工艺适用于纯化中国林蛙皮中的HA,对中国林蛙的产业化起到一定的促进作用。

林蛙皮、卵活性成分提取方法及药理作用的研究进展

林蛙皮、卵中含有多种对人体有益的活性成分,对其深入研究有利于林蛙资源的综合利用.本文对林蛙皮、卵的主要活性成分提取方法及药理作用进行综述,为其在药品、保健品、化妆品等大健康领域的开发利用提供参考.

林蛙皮胶原蛋白的提取及其生物学特征分析

目的：建立林蛙皮胶原蛋白低温提取及纯化方法,保证胶原蛋白的活性,并对其生物学特性进行初步探讨。方法：采用低温酸酶提取结合的方法提取林蛙皮中的胶原蛋白,并对提取过程中过氧化氢的加入量进行考察;对纯化的胶原蛋白进行含量、相对分子质量分布等定性及定量检测,同时观察其对间充质干细胞增殖情况的影响。结果：在4℃经脱色脱脂处理（过氧化氢浓度为0.025%）后,用0.5 mol/L的醋酸提取48 h,沉淀再分别用0.67%、1.34%、2%的胃蛋白酶提取,在此工艺条件下,酸溶性胶原蛋白（ASC）的提取率为8.77%±0.44%,纯度为75.83%±3.78%;酶溶性胶原蛋白（PSC）的提取率为30.69%±0.83%,纯度为66.39%±1.79%。紫外扫描图谱表明提取物具有胶原蛋白的特征吸收。SDS-PAGE分析表明所得ASC与PSC均由2条α1链与1条α2链组成,为保持了三股螺旋结构特征的Ⅰ型胶原蛋白。对细胞生长影响的实验表明,ASC与PSC在0.05~20 mg/m L浓度范围对间充质干细胞的生长无抑制作用,并且在某些浓度下具有促进干细胞增殖的作用。结论：低温酸酶法可高效提取林蛙皮粉中的胶原蛋白,提取的胶原蛋白具有良好的生物学活性,本方法及提取的胶原蛋白在组织工程等领域具有良好的应用前景。

东北林蛙皮肤及其腺体组织形态学观察

本文观察了东北林蛙皮肤及其腺体组织形态学结构,结果表明:东北林蛙体表各部位皮肤薄厚不一,头部背侧皮肤最厚(224.4±5.46μm),后肢腹侧皮肤最薄(135.7±5.06μm),但基本结构相同,由表皮和真皮组成。表皮薄,为复层扁平上皮;真皮疏松层有大量腺体分布,主要是粘液腺和颗粒腺。粘液腺广泛分布于全身皮肤,颗粒腺多见于背部皮肤,以躯干背侧褶处体积最大。色素细胞分布于真皮浅层,以背侧皮肤多见。