中国林蛙皮多糖类天然保湿因子的提取与鉴定

采用复合酶解法从中国林蛙皮中分离提取出天然保湿因子,并采用红外吸收光谱法对天然保湿因子进行了定性测试,采用咔唑(cabazole)法和Elson-Morgan法对天然保湿因子的含量及纯度进行了测定。结果表明:采用本研究方法分离、提纯的天然保湿因子为透明质酸(Hyaluronic acid,HA),其外观呈白色粉末状,葡糖醛酸含量43.2％,氨基葡糖含量39.7％,无臭、无味、无毒,具有强保湿性,可应用于保健食品、化妆品及眼科药物。

中国林蛙皮肤抗菌肽基因的cDNA克隆

抗菌蛋白蛙皮抗菌肽,是两栖类动物中存在的天然免疫物质,在蛙类中仍然保持着一定的活性。我们用提取中国林蛙皮肤总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增得到DNA片段,并与GenBank上登陆的其他蛙类的皮肤抗菌肽序列进行比较,发现此序列是一个新的蛙皮肤抗菌肽序列。PCR产物与pMD18-T连接,得到阳性重组体pMD18-RTCD,将阳性重组体进行测序,分析蛙皮素的氨基酸序列,显示它属于蛙皮抗菌肽家族。此外,中国林蛙抗菌肽氨基酸序列包含C-末端残基,同时具有两栖类动物抗菌肽的特征。这些信息对将来研究两栖类动物的天然免疫的分子机制具有重要作用,为应用基因工程技术对我国林蛙抗菌肽基因进行克隆表达奠定了基础。

响应面法优化林蛙皮中透明质酸的提取工艺

以中国林蛙皮为原料,用透明质酸提取得率作为衡量提取工艺的指标。在单因素实验的基础上,在料液比1∶40(g/m L)的条件下,利用Box-Benhnken中心组合设计原理和响应面分析法探索了双酶(碱性蛋白酶+胰蛋白酶)水解的酶解温度、酶解时间(h_(碱性蛋白酶)=h_(胰蛋白酶))、加酶量(碱性蛋白酶∶胰蛋白酶=1∶1)3个因素作为自变量及其交互作用对响应值透明质酸得率的影响,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型,并确定最佳提取工艺条件为加酶量55000 U/g、酶解时间14 h、酶解温度50℃,在此条件下,平均透明质酸提取得率为27.6839 mg/g,葡萄糖醛酸的含量为13.8420 mg/g,转化成百分含量为42.2%。说明响应面优化双酶法提取林蛙皮透明质酸条件准确可行。