泰国虎纹蛙红腿病病原菌的分离鉴定及药敏试验

从患红腿病的濒死泰国虎纹蛙肝脏、心脏、腹水及病变腿部肌肉组织分离获得4株菌株(TW0701、TW0702、TW0703和TW0704),根据细菌形态、培养特性、人工感染试验及API半自动微生物鉴定系统鉴定,确定4株分离株均为嗜水气单胞菌,且为泰国虎纹蛙红腿病的致病菌。以TW0701菌株为代表进行药敏试验,结果表明,该致病菌对头孢呋肟、先锋噻肟、先锋必、复达欣、氟苯尼考、菌必治、链霉素、卡那霉素、妥布霉素、头孢孟多、舒普深、磺胺二甲嘧啶、盐酸沙拉沙星、头孢西丁、环丙沙星、左氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星和磺胺六甲氧嘧啶(钠)等19种药物高度敏感,但对青霉素G、氨苄青霉素、苯唑青霉素、氧哌嗪青霉素、万古霉素、复方新诺明、阿莫西林、头孢噻吩、克林霉素、阿洛西林、头孢氨苄、新生霉素和头孢克洛等低度敏感或不敏感。

基于RAPD的SCAR分子标记技术鉴定虎纹蛙及引进种

为了对引进种泰国虎纹蛙加强种质监测,本文对泰国虎纹蛙和中国虎纹蛙进行了SCAR标记研究。在对2种蛙随机扩增多态DNA(RAPD)标记研究的基础上,选用随机引物OPP5和OPZ19对2种蛙进行扩增,将2个特异性扩增片段OPP5-471bp和OPZ19-512bp回收、克隆和测序,并根据序列信息设计两对SCAR引物SP5和SZ19。利用两对SCAR引物对2种蛙基因组DNA扩增的结果显示:SP5显示了其特异性,在对中国虎纹蛙的扩增中出现了单一SP5-388bp特异片段,而在泰国虎纹蛙中没有扩增产物;SZ19在对2种虎纹蛙的扩增中出均出现了单一条带,但片段大小不同,在中国虎纹蛙中为SZ19-456bp,在泰国虎纹蛙中为SZ19-497bp。3个分子标记都可作为基于RAPD成功转化后的SCAR分子标记对2种虎纹蛙进行鉴定。

泰国虎纹蛙与中国虎纹蛙早期胚胎发育比较研究

比较了泰国虎纹蛙与中国虎纹蛙在控温条件下的胚胎发育过程。结果表明:两亚种蛙在右鳃封闭期与鳃盖完成期之间有明显的"角质颌出现"的特征,因而在传统分期的基础上增加了一个"角质颌出现期",从而将两者自受精卵开始到鳃盖完成期为止划分为26个时期;两亚种蛙大部分发育时期外形特征基本相同,但八细胞期细胞的排列方式,两亚种蛙神经褶期的神经沟形状、纤毛出现期的神经褶棱高度等均不同;泰国虎纹蛙的发育速度较快,自受精卵期到鳃盖完成期共耗时70.4h,中国虎纹蛙在相同的条件下则需92.5h,但在四细胞期、八细胞期、神经管期和尾芽期,泰国虎纹蛙的发育速度却较中国虎纹蛙慢。

中国虎纹蛙与泰国虎纹蛙的遗传多样性比较

本文应用RAPD技术,研究了中国虎纹蛙(Rana tigrina rugulosa)和泰国虎纹蛙(R.tigrina cantor)的种内种间遗传多样性及种质特异性分子标记,结果表明:中国虎纹蛙和泰国虎纹蛙多态位点比例(P)分别为53.77%和70.79%;遗传多样性指数(H)分别为0.1345和0.1780;种间的遗传相似系数(S)为0.4238,遗传距离(D)为0.6613。两种虎纹蛙遗传多样性都较丰富,但中国虎纹蛙的遗传变异程度较泰国虎纹蛙低。在OPA、OPF、OPP、OPZ几个系列随机引物的扩增中得到了可用于鉴别两种蛙的12条特异性谱带。

牛磺酸对泰国虎纹蛙体内消化酶活力的影响

采用人工灌胃的方法,以不同浓度的牛磺酸溶液对泰国虎纹蛙进行连续5 d的灌胃处理,研究了牛磺酸对泰国虎纹蛙肝脏和肠道内的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶3种消化酶活力的影响。结果表明:当灌胃浓度为1 mg/mL时,泰国虎纹蛙肝组织内3种消化酶以及肠道蛋白酶活力均出现峰值(P<0.05);当灌胃浓度达到1.8 mg/mL时,肝脏和肠道组织内3种消化酶的活力均受到显著抑制(P<0.05)。以特定浓度(0.8 mg/mL)给蛙灌胃后,肝脏组织3种消化酶活力均在灌后3 h和7 h达到峰值(P<0.05);肠道蛋白酶和脂肪酶活力出现3或4次峰值(P<0.05),且肝蛋白酶和淀粉酶活力在灌后1 h均出现了显著下降(P<0.05)。推测每日提供20 mg/kg体重的牛磺酸可以显著提高泰国虎纹蛙的消化酶活力,促进机体对饲料营养物质的利用效率。