中国林蛙皮肤抗菌活性肽的分离提取

将中国林蛙毁双髓,置冰浴中迅速剥皮,冲洗血污后粉碎,经 80%甲醇抽提 2次;再经sephadexG-100、sephadexG-25和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离等,从林蛙皮肤中分离获得 5种小分子多肽。抗菌活性试验表明:经sephadexG-25凝胶过滤获得的小分子多肽洗脱峰第 6峰,对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌具有较强的抗菌活性;SDS-PAGE电泳表明为单一区带,此抗菌活性多肽的相对分子量为 4. 31ku。

中国林蛙蛙皮肽提取工艺的研究

以中国林蛙的皮肤为研究对象,从中提取出一种具有抗菌作用的蛙皮肽。在单因素实验的基础上,通过正交实验筛选出提取蛙皮肽的最佳工艺条件,即甲醇浓度80%,液固比为6,提取时间24h,提取次数3次。

中国林蛙皮肤抗菌肽基因的cDNA克隆

抗菌蛋白蛙皮抗菌肽,是两栖类动物中存在的天然免疫物质,在蛙类中仍然保持着一定的活性。我们用提取中国林蛙皮肤总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增得到DNA片段,并与GenBank上登陆的其他蛙类的皮肤抗菌肽序列进行比较,发现此序列是一个新的蛙皮肤抗菌肽序列。PCR产物与pMD18-T连接,得到阳性重组体pMD18-RTCD,将阳性重组体进行测序,分析蛙皮素的氨基酸序列,显示它属于蛙皮抗菌肽家族。此外,中国林蛙抗菌肽氨基酸序列包含C-末端残基,同时具有两栖类动物抗菌肽的特征。这些信息对将来研究两栖类动物的天然免疫的分子机制具有重要作用,为应用基因工程技术对我国林蛙抗菌肽基因进行克隆表达奠定了基础。

林蛙皮胶原蛋白的提取及抗氧化性

用木瓜蛋白酶提取林蛙皮胶原蛋白,采用单因素试验和正交试验设计优选最佳提取工艺,并对林蛙皮胶原蛋白的抗氧化性进行研究。结果表明:林蛙皮胶原蛋白的最佳提取工艺是加酶量为1%,料液比为1∶20(g/mL),pH为5.5于室温反应36 h,此条件下胶原蛋白提取率为24.71%,纯度为72.03%。林蛙皮胶原蛋白具有一定的还原能力,对羟自由基具有一定的清除能力,并且随着浓度的增加抗氧化活性逐渐增强。

木瓜蛋白酶水解林蛙皮制备活性肽的工艺研究

[目的]以林蛙皮为原料,利用木瓜蛋白酶水解法制备活性肽。[方法]选取固液比、酶用量、pH、水解时间和水解温度为影响因素,以活性肽的水解度为考察指标,通过单因素试验和正交试验优选木瓜蛋白酶酶解林蛙皮制备活性肽的最佳工艺条件。[结果]最优工艺条件为固液比1∶4,酶用量14 000 U/g,pH 7.0,水解温度55℃,水解时间4 h。[结论]该研究为林蛙资源的综合利用提供了新的途径。

不同提取方法对东北林蛙皮胶原蛋白理化特性的影响

以东北林蛙皮为原材料,用乙酸和胃蛋白酶两种方法对其中所含的胶原蛋白进行提取,最终得到两种胶原蛋白:酸溶性胶原蛋白(ASC)和酶溶性胶原蛋白(PSC),并对这两种胶原蛋白的理化性质及功能特性进行比较研究。结果发现,ASC和PSC在234 nm附近都有强吸收峰,符合胶原蛋白的特征;红外光谱发现ASC在3346.0、2952.0、1662.0、1548.0、1242.0 cm^(-1)有吸收峰,PSC在3322.0、2944.0、1662.0、1551.0、1236.0 cm^(-1)有吸收峰,证明这两种胶原蛋白都存在酰胺A、酰胺B、酰胺Ⅰ、酰胺Ⅱ、酰胺Ⅲ,内部三螺旋结构都保留完整;氨基酸组成表明ASC和PSC都含有18种氨基酸,包括人体所需的8种必需氨基酸,但是组成略有差异;SDS-PAGE电泳结果显示,这两种胶原蛋白都存在β、α1和α2链,符合Ⅰ型胶原蛋白的结构特征;PSC的变性温度较ASC要高,但是保湿率较低,它们的吸湿率和相对溶解度差异不显著(p>0.05);以上结果表明不同提取方法对东北林蛙皮胶原蛋白的结构、功能特性有一定影响,但是不影响胶原蛋白的品质。

中国林蛙蛙皮肽抗菌性质及其机理的研究

本实验对从中国林蛙的皮肤中提取的蛙皮肽的抗菌性质及其机理进行了研究。结果表明,该蛙皮肽抗菌谱较广,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、酵母菌都有较好的抗菌效果,其抗菌活性具有很强的热稳定性,且在酸性条件下抗菌活性强,当pH值大于8时丧失抗菌活性。对经蛙皮肽处理的枯草杆菌作电镜扫描检查,发现细菌细胞壁出现破损或穿孔,而对照组细菌壁结构完整,表明该蛙皮肽的抗菌机制是通过破坏细菌细胞壁,使细胞质外流而致菌体死亡。

林蛙皮活性肽对小鼠免疫功能影响的试验研究

[目的]探讨林蛙皮生物活性肽对正常小鼠免疫功能的影响。[方法]将小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组、林蛙皮活性肽低、中、高剂量组,每组10只,连续灌胃给药28 d后,采用ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,检测T淋巴细胞增值,并通过溶血空斑试验和血清溶血素试验检测林蛙皮活性肽对小鼠体液免疫功能的影响。[结果]林蛙皮生物活性肽可明显促进ConA诱导的淋巴细胞增值,增加抗体生成细胞数量,增强血清溶血素抗体效价水平。[结论]林蛙蛙皮生物活性肽对小鼠的细胞免疫和体液免疫功能均具有增强作用。

林蛙皮胶原蛋白的提取及其生物学特征分析

目的：建立林蛙皮胶原蛋白低温提取及纯化方法,保证胶原蛋白的活性,并对其生物学特性进行初步探讨。方法：采用低温酸酶提取结合的方法提取林蛙皮中的胶原蛋白,并对提取过程中过氧化氢的加入量进行考察;对纯化的胶原蛋白进行含量、相对分子质量分布等定性及定量检测,同时观察其对间充质干细胞增殖情况的影响。结果：在4℃经脱色脱脂处理（过氧化氢浓度为0.025%）后,用0.5 mol/L的醋酸提取48 h,沉淀再分别用0.67%、1.34%、2%的胃蛋白酶提取,在此工艺条件下,酸溶性胶原蛋白（ASC）的提取率为8.77%±0.44%,纯度为75.83%±3.78%;酶溶性胶原蛋白（PSC）的提取率为30.69%±0.83%,纯度为66.39%±1.79%。紫外扫描图谱表明提取物具有胶原蛋白的特征吸收。SDS-PAGE分析表明所得ASC与PSC均由2条α1链与1条α2链组成,为保持了三股螺旋结构特征的Ⅰ型胶原蛋白。对细胞生长影响的实验表明,ASC与PSC在0.05~20 mg/m L浓度范围对间充质干细胞的生长无抑制作用,并且在某些浓度下具有促进干细胞增殖的作用。结论：低温酸酶法可高效提取林蛙皮粉中的胶原蛋白,提取的胶原蛋白具有良好的生物学活性,本方法及提取的胶原蛋白在组织工程等领域具有良好的应用前景。

林蛙皮、卵活性成分提取方法及药理作用的研究进展

林蛙皮、卵中含有多种对人体有益的活性成分,对其深入研究有利于林蛙资源的综合利用.本文对林蛙皮、卵的主要活性成分提取方法及药理作用进行综述,为其在药品、保健品、化妆品等大健康领域的开发利用提供参考.

响应面法优化林蛙皮中透明质酸的提取工艺

以中国林蛙皮为原料,用透明质酸提取得率作为衡量提取工艺的指标。在单因素实验的基础上,在料液比1∶40(g/m L)的条件下,利用Box-Benhnken中心组合设计原理和响应面分析法探索了双酶(碱性蛋白酶+胰蛋白酶)水解的酶解温度、酶解时间(h_(碱性蛋白酶)=h_(胰蛋白酶))、加酶量(碱性蛋白酶∶胰蛋白酶=1∶1)3个因素作为自变量及其交互作用对响应值透明质酸得率的影响,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型,并确定最佳提取工艺条件为加酶量55000 U/g、酶解时间14 h、酶解温度50℃,在此条件下,平均透明质酸提取得率为27.6839 mg/g,葡萄糖醛酸的含量为13.8420 mg/g,转化成百分含量为42.2%。说明响应面优化双酶法提取林蛙皮透明质酸条件准确可行。

林蛙皮胶原蛋白酸法提取工艺及性质研究

以林蛙皮为原料,研究其胶原蛋白的酸法提取工艺条件,通过单因素试验及Design Expert软件分析预测,根据生产实际优化调整提取胶原蛋白最优工艺条件为:料液比1∶18,盐酸浓度为0.16mol/L,浸提时间为5h,胶原蛋白提取最大量为28.20%。同时,对林蛙皮胶原蛋白产品进行傅立叶红外转换扫描图谱显示,通过酸法提取的胶原蛋白保存有比较完整的螺旋结构。DSC差热扫描得到酸溶胶原的变性温度为52.4℃,高于猪皮和牛皮胶原的变性温度37℃。

酶法制备东北林蛙皮胶原多肽及体外抗氧化活性

目的:研究东北林蛙皮胶原多肽的酶法制备工艺和其体外抗氧化活性。方法:首先对6种蛋白酶进行筛选,确定试验用蛋白酶,然后用正交试验的方法对最适蛋白酶的水解条件进行优化,最后用2种体系(超氧阴离子和DPPH法)评价最适工艺条件下提取的林蛙皮胶原多肽的抗氧化活性,并用凝胶层析法测定林蛙皮胶原多肽的相对分子质量分布。结果:以水解度为指标,确定碱性蛋白酶最为最适蛋白酶,其水解林蛙皮胶原蛋白的最佳工艺为水解时间5 h、底物浓度6%、酶与底物比(E/S)15%;林蛙皮胶原多肽对O_2^-和DPPH自由基都有很强的清除活性,IC_(50)分别为1.022 mg/mL和0.041 mg/mL;林蛙皮胶原多肽相对分子质量变异很大,大多集中在(1000~5000)u之间。结论:碱性蛋白酶水解林蛙皮胶原蛋白后得到的林蛙皮胶原多肽具有很强的抗氧化活性,值得深入研究和开发。

蛙类皮肤生物活性肽的研究进展

目的:为蛙类生物活性肽的研究及开发利用提供参考。方法:数据库检索,查阅国内外文献,对肽的分类、分子结构、检测方法、提取纯化方法和生物活性评价等进行综述。结果:蛙类活性肽资源丰富,来源广泛、种类众多、分子结构复杂,主要具有抗菌、刺激胰岛素分泌和抗肿瘤等功效,尤其抗菌性是目前肽研究利用的一个重要方向。结论:肽组学逐渐成为研究焦点,一种蛙可含有属于不同肽家族的多种肽,肽结构与其药理活性密切相关,多肽的高效提取可为进一步研究肽的生物学活性及有效利用提供基础。

林蛙皮提取物对动物实验性胃溃疡的防治作用

目的探讨林蛙皮提取物(RCSE)对实验性胃溃疡的防治作用。方法将动物随机分为模型组、西咪替丁组和3个RCSE组。通过小鼠水浸束缚应激性溃疡实验、大鼠幽门结扎型溃疡实验和醋酸诱发的胃溃疡实验观察溃疡发生的程度,测定血浆和胃组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(T-SOD)的活力和丙二醛(MDA)的含量。结果与模型组比较,RCSE明显减小了应激性溃疡的溃疡指数(UI)(P<0.01);高剂量RCSE减小了醋酸诱发的胃溃疡的UI、幽门结扎型溃疡的溃疡程度和胃液总酸度、总酸排出量和胃蛋白酶活性(P<0.05)。RCSE提高了3种胃溃疡的血浆GSH-Px和T-SOD活力(P<0.05或P<0.01),也降低了MDA的含量(P<0.05或P<0.01);对幽门结扎型溃疡胃组织中的GSH-Px、T-SOD活力和MDA含量也有类似结果(P<0.05或P<0.01)。结论 RCSE能够防治动物实验性胃溃疡,具有抗氧化作用。