miR-23b-3p调控肾间质成纤维细胞成骨样分化参与Randall斑形成的机制研究

目的探究miR-23b-3p对肾间质成纤维(hRIFs)细胞成骨样分化和Randall斑形成的影响及其可能机制。方法采用qRT-PCR技术检测草酸钙(CaOx)结石患者Randall斑组织(RP)和接受肾切除术的肾肿瘤患者正常乳头状组织(nRP)的miR-23b-3p和肌细胞特异性增强子因子2C(MEF2C)、成骨标志物人骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达水平;体外分离、培养hRIFs细胞,将miR-23b-3p过表达质粒pSi-miR-23b-3p及空载质粒pSi-NC和MEF2C慢病毒过表达质粒Lv-MEF2C及空载质粒Lv-NC转染至hRIFs细胞中,并诱导细胞成骨分化14 d;ELISA法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色观察各组细胞矿化结节形成情况;qRT-PCR检测细胞中miR-23b-3p和MEF2C、OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平;Western blot检测细胞中MEF2C蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p与MEF2C的靶向关系。结果①与nRP组比较,RP组中miR-23b-3p低表达,而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA高表达;②hRIFs成骨诱导14 d后,细胞中ALP活性升高,矿化结节形成能力增强,miR-23b-3p表达水平降低,而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA表达水平及MEF2C蛋白表达水平升高;③miR-23b-3p过表达降低成骨诱导后hRIFs细胞中ALP活性,抑制细胞矿化结节形成能力,下调细胞中OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平;④MEF2C过表达可逆转miR-23b-3p过表达对hRIFs细胞成骨分化的抑制作用;⑤MEF2C是miR-23b-3p下游靶基因。结论miR-23b-3p在RP组织及hRIFs细胞成骨样分化过程中低表达,上调miR-23b-3p可抑制hRIFs细胞的成骨样分化,其作用机制可能与靶向沉默MEF2C有关。

Randall斑泌尿系结石患者的代谢评估

目的通过对Randall斑结石患者进行24h尿代谢分析,探讨Randall斑患者的结石危险因素及机制。方法收集2017年10月—2018年10月于我院接受住院治疗的泌尿系结石患者50例,其中有Randall斑结石患者(Randall斑组)30例,无Randall斑结石患者(无Randall斑组)20例,另择我院同期健康体检者30例为对照组。收集患者24h尿液进行尿液成分分析,对于排出的结石采用红外光谱分析仪检测结石成分。结果Randall斑组中结石的大小、位置、所在侧和结石成分与无Randall斑组差异均无统计学意义。与对照组相比,无Randall斑组24h尿液中枸橼酸含量降低,草酸、磷酸含量升高(P<0.05),Randall斑组24h尿液中枸橼酸含量降低,草酸、磷酸、钠、钙含量升高(P<0.05)。与无Randall斑组相比,Randall斑组24h尿液中枸橼酸含量降低,草酸、磷酸、钠、钙含量升高(P<0.05)。结论Randall斑患者24h尿液中高钠、钙、草酸、磷酸和低枸橼酸对结石的发生发展有重要影响,应限制Randall斑的泌尿系结石患者草酸、钠、钙、磷酸等的摄入并酌情补充枸橼酸。

Randall斑的现代研究进展

近年来,我国尿石症的发病率大幅度提升,虽然新兴技术的发展不断推动着结石治疗手段和方法创新,但是尿石形成的病因和机制却仍有许多未知。目前关于结石形成机制有多种学说,包括Randall斑学说、过饱和结晶学说、游离颗粒和固定颗粒学说等,但是现在还没有一种学说能够较为全面解释结石形成。目前对结石患者肾乳头和皮质活检证实了Randall斑在结石形成中的作用。本文回顾Randall斑块学说的历史发现,综合当代最新研究进展,揭示更多的生理病理机制并重新定义Randall斑学说。

Randall斑研究进展

肾结石的发病率和复发率较高,是泌尿外科的常见病。探索结石形成机制对于预防结石复发至关重要,Randall斑学说是一种被广泛接受的肾结石形成机制,但还没有形成统一的学说。与Randall斑相关的基因研究有助于理解肾结石的形成机制,并为未来分子靶向治疗提供方向。Randall斑为临床上肾结石分类提供了一种客观指标,并可能在代谢评估和预测无症状肾结石相关事件发生风险中起到一定作用。文章就Randall斑学说和相关基因研究、在结石分类、代谢评估、无症状肾结石中的应用研究进行综述。

基质Gla蛋白与骨形成蛋白2在草酸钙肾结石患者Randall钙斑中的表达

目的:对比基质Gla蛋白(matrix Gla protein,MGP)及骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)在草酸钙结石肾乳头Randall钙化斑组织中的表达,探讨其在草酸钙肾结石形成过程中的相关机制。方法:收集中南大学湘雅医院泌尿外科2015年4月至12月期间住院的30例草酸钙肾结石患者的肾乳头钙化斑组织标本作为实验组,10例同期患肾肿瘤行根治性肾切除术患者的肾乳头组织标本作为对照组,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western印迹检测MGP和BMP-2在肾乳头组织中的表达,并采用免疫组织化学技术观察MGP和BMP-2在肾乳头组织中的表达。结果:1)RT-PCR检测实验组和对照组MGP mRNA的表达量为0.760±0.804和1.365±0.348,差异有统计学意义(P<0.05);实验组和对照组BMP-2 mRNA表达量分别为2.500±0.725和1.485±0.870,差异有统计学意义(P<0.05)。2)Western印迹检测实验组和对照组的MGP蛋白表达量分别为0.130±0.424和0.202±0.704,差异无统计学意义(P>0.05);实验组和对照组BMP-2蛋白表达量为0.885±0.220和0.682±0.272,差异有统计学意义(P<0.05)。3)免疫组织化学结果显示实验组MGP的表达较对照组低,而实验组BMP-2表达较对照组高(均P<0.05)。结论:草酸钙肾结石患者的肾乳头组织内BMP-2表达增多,MGP表达减少,草酸钙肾结石的形成可能是一种与MGP和BMP-2相关的类成骨反应或异位钙化。

肾乳头钙化斑形成过程引起的肾脏损伤

泌尿系结石是泌尿外科最常见的疾病之一,其高发病率和复发率是泌尿外科面临的一大难题,其具体发病机制仍不清楚。在众多学说中,Randall斑学说是目前学者们普遍认可的结石形成机制。晶体颗粒在肾小管中滞留是钙化斑形成的前提已成为共识;沉积后的晶体颗粒通过机械损伤或炎症免疫反应损伤肾小管进而促进晶体进一步沉积,最终形成肾乳头钙化斑块。晶体沉积的过程可引起肾脏损伤,但其分子机制仍是未知的。本文从Randall斑形成及引起肾损伤机制的研究进展作一综述。

尿液钙化性纳米微粒与肾结石形成的关系

钙化性纳米微粒是近年发现的具有独特生物矿化作用的"物质",能够引起寄宿细胞内外的病理性钙化。它可能会诱发肾脏内的晶体沉淀,最终导致肾结石的形成。作者对此作一综述,旨在为尿路结石形成机制研究和临床治疗提供新的思路。

结石形成中骨桥蛋白与CD44的作用研究

[目的]探讨骨桥蛋白(OPN)与CD44在泌尿系结石形成中的作用。[方法]采用0.5%乙二醇+0.5%氯化氨饮水法建立高草酸尿症大鼠模型。HE染色光镜下观察肾小管腔内的结石晶体;钙盐染色光镜下观察肾小管上皮细胞基底膜和间质处的钙盐沉积情况;免疫组化染色观察OPN和CD44表达水平和位置,分析不同时段(第3、5、71、4、21、28天)结晶体与OPN和CD44表达分布及量变关系。[结果]肾小管OPN与CD44的表达随时间增加、钙盐沉积增多而增强,以后表达减弱;在第14天内,OPN与CD44表达保持正相关关系(P<0.05)。[结论]OPN和CD44表达与高草酸尿液状态的结石形成关系密切,可能成为Randall斑的起源。

肾结石形成关键基因筛选及生物信息学分析

目的:利用生物信息学方法筛选肾结石形成关键基因并探讨其潜在分子机制。方法:从GEO下载GSE73680肾结石数据集,共纳入6例正常人,56例肾结石患者肾乳头组织。应用R语言筛选差异表达基因。利用DAVID数据库对差异基因进行GO功能注释及KEGG信号通路富集分析。利用STRING数据库及Cytoscape软件构建蛋白质互作网络并筛选关键基因。结果:共筛选出1 448个差异表达基因,包括1 288个上调基因和160个下调基因。GO功能富集分析显示,差异基因涉及钙离子稳态、钙离子结合及细菌防御反应。KEGG信号通路富集分析显示,差异基因涉及黏着斑及cAMP等信号通路。蛋白质互作网络Cytoscape拓扑学分析筛选出INS、GNG13、EGF、AHSG、NPSR1和DLG4共6个关键基因。结论:筛选所得关键通路及关键基因可能在肾结石形成过程中扮演重要角色,有望成为潜在防治靶点,但具体作用及机制仍需进一步研究。

肾结石患者肾乳头密度和抑制钙化相关基因表达研究

目的:Randall钙斑是位于肾乳头间质的异位钙化,被认为是草酸钙结石的起始病变。这些钙盐沉积可能源于异位钙化相关基因表达失调,并在宏观上导致肾乳头密度增加。本研究拟探究肾结石患者和非结石对照者肾乳头CT值和钙化抑制相关基因表达的差异。方法:纳入60例具有腹部CT平扫影像的肾结石患者作为结石组。选取60例具有腹部CT影像,且与结石患者年龄性别相匹配非结石患者作为对照组。每组均各纳入男40例,女20例。两组平均年龄分别为(48.67±11.14)岁和(48.40±10.73)岁。在平扫CT上测量其肾脏上盏、中盏和下盏肾乳头密度并比较。检索和下载Gene Expression Omnibus数据库Randall钙斑芯片GSE73680数据文件。分析比较5种钙化抑制相关基因包括基质Gla蛋白(MGP)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、骨保护素(OPG)和富Gla蛋白(GRP)在结石组和对照组患者肾乳头组织的表达情况。结果:结石组患者肾乳头密度均值显著高于对照组[(49.19±7.26)HU vs.(41.11±5.55)HU]。与对照组相比,结石组肾乳头OPN、OPG、OCN和GRP表达分别是对照组1.93倍、1.16倍、1.57倍和2.04倍,P值分别为0.52、0.58、0.06和0.08。MGP在结石患者肾乳头表达下调3.15倍(P=0.05)。结论:结石患者肾乳头密度显著增高,抑制钙化相关基因MGP表达降低。