Development and Validation of Stability Indicating RP-LC Method for Estimation of Ranolazine in Bulk and Its Pharmaceutical Formulations

An isocratic reverse phase liquid chromatography (RP-LC) method has been developed and subsequently validated for the determination of Ranolazine in Bulk and its pharmaceutical formulation. Separation was achieved with a X-terra RP-18 ((Make: Waters Corporation;150 mm × 4.6 mm I.D.;particle size 5 μm)) Column and Sodium di-hydrogen phosphate monohydrate buffer with Tri ethyl amine (pH adjusted to 5.0 with diluted orthophosphoric acid): Acetonitrile (600:400) v/v as eluent at a flow rate of 1.0 mL/min. UV detection was performed at 225 nm. The method is simple, rapid, and selective. The described method of Ranolazine is linear over a range of 11.98 μg/mL to 37.92 μg/mL. The method precision for the determination of assay was below 1.0%RSD. The percentage recoveries of active pharmaceutical ingredient (API) from dosage forms ranged from 99.1% to 100.9%. The results showed that the proposed method is suitable for the precise, accurate and rapid determination of Ranolazine in bulk, its capsule dosage forms.

基于网络药理学及计算机辅助药物设计方法分析雷诺嗪治疗心肌缺血再灌注损伤致心律失常的潜在靶点及机制

目的利用网络药理学方法和计算机辅助药物设计策略,分析雷诺嗪对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)致心律失常的潜在治疗靶点及机制。方法采用Swiss Target Prediction数据库和DrugBank数据库预测雷诺嗪潜在的作用靶点。采用GeneCards数据库搜集MIRI和心律失常疾病的靶点,检索时间为建库至2023年1月26日,将雷诺嗪、MIRI和心律失常相关靶点进行交集比对以获取雷诺嗪治疗MIRI致心律失常的关键靶点。利用STRING数据库和Cytoscape软件绘制靶点蛋白互相作用网络。利用DAVID数据库对靶点进行信号通路富集分析。利用Cy-toscape软件构建药物-靶点-信号通路网络。利用分子对接软件验证雷诺嗪与交集靶点结合能力。最后通过分子相似性分析及分子动力学模拟研究,验证预测靶点的准确性。结果筛选获得雷诺嗪治疗MIRI致心律失常的潜在作用靶点30个。通过蛋白互相作用分析共获得8个核心靶点,包括SRC、PIK3CA、MAPK8、MAPK14、JAK1、MAP2K1、JAK2和PIK3CG。GO生物分析共筛选出177个生物学过程,其中包括123个细胞生物过程,23个细胞组成和31个分子功能。KEGG分析发现119条相关信号通路。分子对接分析结果显示,雷诺嗪与8个核心靶蛋白均具有较好的亲和力。分子相似性分析结果显示,雷诺嗪与8个核心靶蛋白原配体都存在一定相似性。分子动力学模拟了相关性最高的3个靶点(SCR、PIK3CA和MAPK8),结果显示雷诺嗪表现出MAPK8和SCR抑制剂潜力,而对PIK3CA的抑制剂位点结合潜力相对较差,结合文献复习,推测出雷诺嗪对MIRI致心律失常治疗作用的最相关分子机制。结论雷诺嗪可通过多靶点、多途径治疗MIRI致心律失常,这对促进治疗MIRI致心律失常靶向药物的研发及临床应用具有重要意义。

RP-HPLC法研究不同性别的大鼠尿液中盐酸雷诺嗪及其代谢物的差异

目的：建立同时测定大鼠尿液中盐酸雷诺嗪及其代谢物的方法，用于研究其在大鼠体内的代谢。方法：在雌雄大鼠的尿液样品中加入内标甲巯咪唑，用0．1mol／L Na2CO3碱化后乙醚提取，取上清水浴挥干，流动相100μL溶解，取20止进行HPLC测定。色谱柱为汉邦Lichrospher C18柱（250mm×4．6mmID，5μm），采用梯度洗脱，流动相A：1mmol／L醋酸铵水溶液（用醋酸调节pH值至4．3）；B：甲醇，流速1．0mL／min，检测波长271nm。结果：盐酸雷诺嗪线性范围为6．25～400μg／mL，方法回收率在98．5％-101．0％之间，日内和日间的精密度均小于9．3％。结论：本方法成功地应用于盐酸雷诺嗪在大鼠体内的代谢的性别差异性研究。

犬血浆中盐酸雷诺嗪LC-MS测定及药物动力学研究

目的 :建立LC MS法测定犬血浆中盐酸雷诺嗪浓度 ,研究犬ig和iv盐酸雷诺嗪后的药物动力学。方法 :取血浆 2 0 μl,加乙腈 30 0 μl沉淀蛋白 ,离心后 10 μl直接进样。色谱柱为Shim packODS 5 μm ,15 0mm×2 0mm ,I D ;流动相为 0 0 5 %甲酸 乙腈 ( 4 0∶6 0 ,v/v)。检测仪器为岛津LC MS 2 0 10四极杆质谱检测器 ,离子源为APCI源。检测离子m/z :雷诺嗪 4 2 8 0 0 ,盐酸非洛普 (DDPH) 344 0 0。犬ig和iv雷诺嗪剂量为 2 5mg/kg ,不同时间取血 ,离心取血浆 2 0 μl进行分析 ,估算药物动力学参数。 结果 :盐酸雷诺嗪的线性范围为 0 0 39～ 10 0 0 μg/ml,方法的回收率为 79%～ 90 % ,日内和日间的精密度均小于 10 %。犬ig和iv雷诺嗪 2 5mg/kg ,估算的末端相半衰期分别为 7 31± 3 0 8和 5 6 7± 2 4 3h ,犬ig后 ,测得的血药浓度峰时间和峰浓度分别为 1 0± 0 6h和 4 32±1 2 5 μg/ml。测得绝对生物利用度约为 ( 72 6± 15 6 ) %。 结论 :建立的犬血浆中盐酸雷诺嗪LC MS测定法适合药物动力学研究。雷诺嗪口服吸收快 。

盐酸雷诺嗪在大鼠肝微粒体内代谢的性别差异

目的:用大鼠肝微粒体研究盐酸雷诺嗪代谢的性别差异及选择性CYP抑制剂对其代谢的影响。方法:盐酸雷诺嗪分别与雌性或雄性大鼠的肝微粒体温孵,抑制试验是在微粒体中先加入选择性抑制剂温孵30 min后,再加入盐酸雷诺嗪温孵。温孵后的样品中加入内标咖啡因,碱化后乙醚提取,取上清液水浴挥干,流动相溶解后采用梯度洗脱进行HPLC测定。结果:盐酸雷诺嗪在大鼠肝微粒体内被迅速代谢为6个Ⅰ相代谢产物,雄性大鼠微粒体酶的代谢能力强于雌性大鼠。CYP3A特异性抑制剂酮康唑(Ket)、CYP1A2特异性抑制剂α-萘磺酮(-αNaph)和CYP2D2特异性抑制剂奎尼丁(Qui)可以明显地抑制肝微粒体中盐酸雷诺嗪的代谢,其中Ket的抑制能力最强;而二乙二硫氨基甲酸酯(DDC)和磺胺苯吡唑(Sul)对盐酸雷诺嗪的代谢无明显影响。结论:研究提示盐酸雷诺嗪在雌雄大鼠肝微粒体内的代谢有极其显著性差异,其主要原因是CYP3A酶在大鼠肝微粒体中具有性别差异性。

晚钠电流在兔心力衰竭模型室性心律失常中的作用

目的探讨晚钠电流(INa-L)在心力衰竭模型兔室性心律失常中的作用。方法 40只新西兰大耳白兔随机分为假手术组、心衰组、海葵毒素(ATX-Ⅱ)组和雷诺嗪组,每组10只。心衰组、ATX-Ⅱ和雷诺嗪组通过缩窄腹主动脉制备兔心力衰竭模型,假手术组开腹但不缩窄腹主动脉。心力衰竭模型建造成功后,制备兔左室楔形心肌块灌注模型,采用浮置玻璃微电极法同步记录左室楔形心肌块心内膜、心外膜心肌细胞跨膜动作电位和跨室壁心电图。假手术组和心衰组灌注正常蒂罗德液,ATX-Ⅱ组在灌注正常蒂罗德液的基础上加灌10nmol/L的ATX-Ⅱ,雷诺嗪组在灌注正常蒂罗德液的基础上加灌20μmol/L的雷诺嗪。同时记录各组室性心律失常的诱发率。结果心衰组兔室性心律失常的发生率显著高于假手术组(60%vs.0%);INa-L增强剂ATX-Ⅱ进一步增加了心力衰竭兔室性心律失常的发生率(100%vs.60%);INa-L阻断剂雷诺嗪可显著减少心衰兔室性心律失常的发生率(10%vs.60%)。结论 INa-L在兔心力衰竭室性心律失常的发生中起着重要作用,阻断INa-L可减少心衰时心律失常的发生。

RP-HPLC测定雷诺嗪含量及有关物质

目的:建立测定雷诺嗪(ranolazine)含量及有关物质的反相高效液相色谱法。方法:依利特Hypersil BDS C_(18)硅烷键合硅胶柱(250mm×4．6mm,5μm),流动相:甲醇-7mmol·L^(-1)醋酸铵与3．5mmol·L^(-1)醋酸的缓冲液(65:35),流速:1．0mL·min^(-1),柱温:30℃,检测波长:272nm。结果:雷诺嗪在0．102～2．034mg·mL^(-1)的范围内,浓度和峰面积线性良好,r=0．9999。重复性试验的RSD为0．92%。结论:测定方法简便快速、重现性好、准确度高,可适用于雷诺嗪的含量测定及其有关物质检查。

短刺小克银汉霉AS3.153菌株对雷诺嗪的代谢转化

目的建立能够模拟雷诺嗪在哺乳动物体内代谢的微生物模型,并应用该模型制备代谢产物。方法采用液相色谱-质谱联用法测定雷诺嗪在4种小克银汉霉转化模型中的转化产物,选择其中转化能力最强的菌株,针对雷诺嗪3种主要代谢产物进行了培养基初始pH值、底物质量浓度、转化时间等转化条件的优化。结果短刺小克银汉霉AS 3.153对雷诺嗪的转化能力最强,将其转化为9种代谢产物,采用半制备液相色谱法制备分离得到3种主要代谢产物,确证其结构分别为羟基化雷诺嗪及雷诺嗪硫酸酯结合物。结论短刺小克银汉霉AS 3.153对雷诺嗪的转化与哺乳动物代谢结果类似,可作为模拟哺乳动物体内代谢的体外模型使用。

雷诺嗪的合成

2,6-二甲苯胺加氯乙酰氯制得酰胺后与哌嗪反应得N-(2,6-二甲苯基)-2-(1-哌嗪基)乙酰胺,其与由邻甲氧基苯酚和环氧氯丙烷反应得到的2-(2-甲氧苯氧基甲基)环氧乙烷反应制得抗心绞痛药雷诺嗪,总收率51%(以2,6-二甲苯胺计)。

高效液相色谱法测定盐酸雷诺嗪原料药的含量及有关物质

目的:建立高效液相色谱法测定盐酸雷诺嗪的含量和有关物质。方法:采用 Agilent ZORBAX 300-SCX 阳离子交换柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.02 mol·L^(-1)磷酸二氢钾(45:55,磷酸调 pH 3.0)为流动相,流速为1.0 mL·min^(-1),用外标法测定,检测波长为233 nm,柱温为30℃。结果:在2.00～20.48 μg范围内,色谱峰面积与进样量呈良好的线性关系,线性回归方程为:Y=788.5X+106.4(r=0.9999);最小检测量为2 ng。结论:本法准确、简便、灵敏,可用于盐酸雷诺嗪的含量测定和有关物质检查。

雷诺嗪对大鼠的长期毒性试验

目的:考察反复给予雷诺嗪{N-(2,6二甲基苯基)-2-4-[2-羟基-3-(2-甲氧苯氧基)丙基]-1-哌嗪乙酰胺}对大鼠产生的毒性反应。方法:SD大鼠随机分为雷诺嗪高、中、低剂量(400,150和50 mg.kg-1.d-1)组和溶媒对照(0.5%羧甲基纤维素钠)组,每组32只大鼠,雌雄各半。各组均灌胃给予等体积的药物或溶媒(20 mL.kg-1),每周给药7 d,连续给药4周。停药后每组留12只动物(雌雄各半)再饲喂2周进行恢复性观察。观察动物一般状况、体重、进食量、饮水量、血液学、血液生化学、脏器重量系数及组织病理学改变。结果:雷诺嗪400 mg.kg-1组大鼠给药初期出现活动减少、呆滞和抽搐,体重增加值低于对照组,饮水量、丙氨酸氨基转换酶(ALT)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(T-Cho)及肝、肾系数高于对照组。雷诺嗪50和150 mg.kg-1组各项指标与对照组比较均无统计学差异。恢复期各剂量的各项指标与对照组比较均无统计学差异。结论:雷诺嗪150 mg.kg-1为安全剂量,400 mg.kg-1有短时神经系统毒性并对动物生长,肝、肾功能和脂代谢产生可逆性影响。

盐酸雷诺嗪对映体的反相高效液相色谱手性分离

以反相高效液相色谱法 ,建立了盐酸雷诺嗪在纤维素类手性固定相(ChiralcelOD -R)上的手性拆分方法。考察了不同流动相组成对分离的影响。在推荐流动相 (100%甲醇 )条件下 ,盐酸雷诺嗪对映体的分离度可达3.8。

新型抗心绞痛药雷诺嗪的合成研究

目的合成新型抗心绞痛药雷诺嗪。方法以邻甲氧基苯酚、环氧氯丙烷、2,6-二甲基苯胺、哌嗪为原料,采用常规的化学合成法。结果通过优化条件以较高的收率合成雷诺嗪二盐酸盐。结论用元素分析、质谱、氢谱、碳谱等鉴定了目标物的结构。优化了反应条件,简化了后处理过程,为进一步工业生产和临床应用打下基础。

高效液相色谱手性固定相法直接拆分外消旋雷诺嗪

在反相以及正相条件下,利用自制的涂敷型纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相直接拆分了外消旋雷诺嗪,并考察了不同流动相对手性拆分的影响,特别是醇类物质对拆分影响。结果表明,醇的立体结构、极性对雷诺嗪的手性拆分均有影响。实验结果显示无论在正相条件下还是在反相条件下,涂敷型纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相均可以很好的拆分外消旋体雷诺嗪。

雷诺嗪缓释片体外释放度的测定

目的建立雷诺嗪缓释片的体外释放度测定方法。方法以0.9%的盐酸水溶液为溶出介质,溶出方法为转篮法(100 r.min-1)。结果采用紫外分光光度法在272 nm测定雷诺嗪的浓度,其检测线性范围为10～200 mg.L-1(r=0.999 9),平均回收率为98.04%(RSD=1.26%);3批样品在2、6、12 h的释放量分别为标示量的30%、60%、70%以上。结论该方法准确、可靠,可用于该制剂的释放度测定。

抗心绞痛药雷诺嗪的研究进展

雷诺嗪(ranolazine)于2006年1月美国FDA批准上市,用于治疗慢性心绞痛。它是一种脂肪酸部分氧化抑制剂,通过改变葡萄糖和脂肪酸的代谢而发挥作用。临床研究表明,雷诺嗪单独使用或者与其他药物联合应用,可以安全有效地治疗慢性心绞痛。雷诺嗪常见的不良反应是眩晕、头痛、便秘、恶心。文中对雷诺嗪的药理作用、药动学、临床研究、药物相互作用、安全性评价等进行综述。

雷诺嗪后处理对大鼠心肌再灌注损伤营救激酶及线粒体渗透性转换孔道的影响

目的探讨雷诺嗪后处理对大鼠离体心脏缺血/再灌注时心肌细胞凋亡与再灌注损伤营救激酶(reperfusion inju-ry salvage kinase,RISK)及其线粒体渗透性转换孔道(mito-chondrial permeability transition pore,MPTP)的影响。方法建立Langendorff离体心脏灌流模型。56只SD大鼠随机分为8组(n=7):缺血/再灌注组(I/R组)、雷诺嗪后处理组(RPostC组)、雷诺嗪+atractyloside组(RA组)、雷诺嗪+PD98059组(RP组)、雷诺嗪+wortmannin(RW组)、atrac-tyloside组(A组)、P组和W组。各组均缺血30min/再灌注15min,药物后处理时间为再灌注开始后10min。用TUNEL法检测再灌注末心肌凋亡并计算凋亡指数(apoptotic index,AI),分光光度计测MPTP开放程度,Western blot法测p-AKT和p-ERK1/2的表达水平。结果与IR组比较,RPostC组心肌细胞AI和MPTP开放程度下降(P<0.05),RPostC、RA、RP和RW组p-AKT、p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05),其它组间差异无统计学意义(P>0.05);与RPostC组比较,RA、RP、RW、A、P和W组AI和MPTP开放程度升高(P<0.05),RP、RW、A、P和W组p-AKT、p-ERK1/2蛋白表达下降(P<0.05),RA组p-AKT、p-ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与RA组比较,RP、RW、A、P和W组AI和MPTP开放程度差异无统计学意义,p-AKT、p-ERK1/2蛋白表达下降(P<0.05)。结论雷诺嗪后处理对大鼠离体缺血/再灌注心肌具有明显的抗凋亡作用,其机制可能与其激活RISK途径和抑制MPTP开放有关。

雷诺嗪的合成工艺研究

以2,6-二甲基苯胺为起始原料,以哌嗪单盐酸盐替代哌嗪,经五步反应合成雷诺嗪.从试剂和操作温度等方面优化了各步的反应条件,总收率70.1%,目标产物的结构经MS、IR、1H-NMR确证.此合成路线工艺简单,原料价廉,副产物得到回收利用,污染小,可为工业化生产的实施提供参考.

抗心绞痛新药雷诺嗪的合成

以 2 ,6-二甲基苯胺为原料 ,经氯乙酰化、缩合和加成三步反应合成抗心绞痛新药雷诺嗪 .原料价廉易得 ,操作简单 ,适于工业化生产 ,总收率 3 8.6% .