Rap1GAP激酶通过AMPK信号通路影响宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移的研究

背景肿瘤细胞快速增殖和难以控制的盆腔淋巴结转移是造成晚期宫颈癌患者死亡的主要原因。Rap1 GTP酶激活蛋白(Rap1 GTPase-activating protein,Rap1GAP)低表达与肿瘤细胞增殖、侵袭和患者不良预后相关。目的探讨Rap1GAP对宫颈癌细胞SiHa、C33a增殖、侵袭和迁移的影响及潜在的分子机制。方法从UCSC(https://xenabrowser.net)数据库中下载经统一标准化的泛癌数据集:TCGA TARGET GTEx(PANCAN,N=19131,G=60499),从中提取ENSG00000076864(Rap1GAP)基因在宫颈癌样本中的表达数据,对每一表达值进行log2(x+0.001)变换,得到Rap1GAP基因的表达;采用Western blot检测RAP1GAP在宫颈癌细胞SiHa、C33a和正常宫颈内皮细胞H8中的表达水平,通过慢病毒转染SiHa、C33a细胞分别上调/下调Rap1GAP的表达,根据不同处理分为正常对照组(SiHa、C33a细胞)、空载组(NC-Rap1GAP)、OERap1GAP组(过表达Rap1GAP)和sh-Rap1GAP组(低表达Rap1GAP),并验证细胞转染效率;采用平板克隆实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力;采用Western blot及qRT-PCR检测上调/下调Rap1GAP表达后各组细胞中Rap1GAP、E-cadherin、N-cadherin蛋白及mRNA的表达;采用Western blot检测磷酸化AMPK(p-AMPK)、AMPK蛋白表达水平。结果从数据库观察到Rap1GAP在宫颈癌组织中的表达显著高于其在正常宫颈组织中的表达(P<0.05)。Western blot结果显示,与H8细胞比较,C33a细胞中Rap1GAP蛋白表达增高,SiHa细胞中Rap1GAP蛋白表达降低(P<0.05)。与SiHa组比较,OE-Rap1GAP组细胞集落形成能力、侵袭和迁移能力降低。与C33a组比较,sh-Rap1GAP组细胞集落形成能力、侵袭和迁移能力增强。Western blot及qRT-PCR实验结果表明,与SiHa组比较,OE-Rap1GAP组细胞内Rap1GAP、E-cadherin蛋白及mRNA表达升高,而N-cadherin、p-AMPK蛋白及mRNA表达降低(P<0.01);与C33a组比较,sh-Rap1GAP组细胞内Rap1GAP、E-cadherin蛋白及mRNA表达降低,而N-cadherin、p-AMPK蛋白及mRNA表达升高(P<0.01)。结论Rap1GAP抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,可能与AMPK信号通路有关。

胃癌组织Rap1GAP、HHLA2表达变化及其与患者临床病理特征和预后的关系

目的观察胃癌组织Rap1 GTP酶激活蛋白(Rap1GAP)、人内源性逆转录病毒-H长末端重复关联蛋白2(HHLA2)mRNA表达变化,并探讨其表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择胃癌患者97例,取手术切除的胃癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR法检测Rap1GAP、HHLA2 mRNA表达。比较胃癌组织与癌旁正常组织Rap1GAP、HHLA2 mRNA表达差异,分析二者表达与胃癌患者临床病理特征的关系。以Rap1GAP、HHLA2 mRNA表达的中位数为截断值,将患者分为Rap1GAP、HHLA2 mRNA高表达者与低表达者,比较不同Rap1GAP、HHLA2 mRNA表达者5年生存率差异。采用Cox风险比例回归模型分析影响胃癌患者预后的危险因素。结果胃癌组织Rap1GAP mRNA相对表达量低于癌旁正常组织,HHLA2 mRNA相对表达量高于癌旁正常组织(P均<0.05)。Rap1GAP、HHLA2A mRNA表达与肿瘤浸润深度、TNM分期和淋巴结转移有关(P均<0.05),与性别、年龄、肿瘤直径、组织分化程度无关(P均>0.05)。Rap1GAP mRNA低表达者5年生存率低于Rap1GAP mRNA高表达者,HHLA2 mRNA高表达者5年生存率低于HHLA2 mRNA低表达者(P均<0.05)。Cox风险比例回归分析显示,有淋巴结转移、Rap1GAP mRNA低表达、HHLA2 mRNA高表达是胃癌患者预后不良的危险因素(P均<0.05)。结论胃癌组织Rap1GAP低表达、HHLA2高表达,二者异常表达与胃癌恶性生物学行为和患者预后不良有关。Rap1GAP、HHLA2有可能成为胃癌预后评估的生物标志物和潜在的治疗靶点。

脑胶质瘤组织Rap1GAP的水平及其临床意义

目的探讨Rap1 GTP酶激活蛋白(Rap1GAP)在脑胶质瘤组织中的表达及其与临床病理特征和预后关系。方法收集本院2011年1月至2016年12月手术切除并经病理证实的脑胶质瘤组织79例和正常脑组织33例,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测以上组织中的Rap1GAP mRNA水平,分析脑胶质瘤组织和正常脑组织中的Rap1GAP mRNA水平;分析脑胶质瘤不同临床病理特征(年龄、性别、病理类型、分化程度、病理分级、瘤周水肿和浸润深度)的Rap1GAP mRNA水平和分布情况,根据随访资料分析Rap1GAP mRNA水平与预后的关系。结果脑胶质瘤组织的Rap1GAP mRNA水平为0. 172±0. 019,低于正常脑组织的1. 068±0. 069,差异有统计学意义(P<0. 05)。Rap1GAP mRNA水平和分布与年龄、性别、瘤周水肿和浸润深度无关,但与病理类型、分化程度和病理分级有关(P<0. 05),在胶质母细胞瘤、低分化和Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤组织的Rap1GAP mRNA水平和高表达率均较低,依次为0. 104±0. 006和27. 0%(10/37)、0. 099±0. 006和16. 1%(5/31)及0. 127±0. 007和39. 3%(22/56)。Rap1GAP低表达组的中位总生存期(OS)为14. 5个月,低于高表达组的21. 4个月(P<0. 05);胶质母细胞瘤、低分化和Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤组织中,低表达组的中位OS分别为8. 8、11. 2和11. 5个月,均低于高表达组的18. 2、19. 8和19. 8个月(P<0. 05)。结论脑胶质瘤组织中Rap1GAP低表达参与了该肿瘤的发生发展,Rap1GAP低表达者的预后较差,提示Rap1GAP发挥类似抑癌基因的作用,可作为脑胶质瘤的治疗的候选基因。

Rap1GTP酶激活蛋白甲基化状态与结肠癌关系的研究

目的 探讨结肠癌中抑癌基因Rap1GTP酶激活蛋白（Rap1GAP）启动子甲基化情况,为结肠癌的早期诊断、早期治疗、靶向治疗及改善预后等提供理论依据及研究方向.方法 回顾性分析山西省忻州市人民医院病理科2010年1月至2014年9月病理诊断为结肠腺癌的患者33例,其中男性19例,女性14例,年龄41~72岁,取手术切除石蜡包埋标本.选取同期16例结肠腺瘤患者的石蜡包埋标本,包括男性9例,女性7例,年龄34~58岁.选取肿瘤远端（距肿瘤〉15 cm）切缘正常组织13例.使用定量甲基化特异性聚合酶链反应（q-MSP）技术检测Rap1GAP基因启动子区甲基化水平.比较3种组织间及临床病理因素亚组间Rap1GAP基因启动子区甲基化水平的差异.结果 Rap1GAP启动子甲基化率[中位数（四分位数间距）]在结肠癌、结肠腺瘤和癌旁正常组织中分别为65.43%（50.35%）、21.37%（8.39%）、17.43%（15.71%）,结肠癌组高于结肠腺瘤组及癌旁正常组织组,差异有统计学意义（P〈0.05）.结肠癌组男性、女性Rap1GAP启动子甲基化率分别为42.74%（70.44%）、21.98%（80.00%）;≤60岁与〉60岁分别为36.26%（62.62%）、26.23%（76.42%）;高分化癌、中低分化癌分别为21.98%（40.32%）、42.74%（74.20%）;TNMⅠ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期分别为25.31%（48.27%）、36.26%（75.55%）.结肠癌中Rap1GAP甲基化率与患者年龄、性别、肿瘤分化程度、TNM分期均无关（均P〉0.05）.结论 Rap1GAP启动子甲基化可能与结肠癌的发生、发展有关,可能作为结肠癌早期诊断的靶标.

组织PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA表达预测脑胶质瘤外科术后复发的效能及意义研究

目的探讨脑胶质瘤组织细胞质多聚腺苷酸结合蛋白1(PABPC1)mRNA、Rap1 GTP酶激活蛋白(Rap1GAP)mRNA、磷脂酰肌醇蛋白聚糖1(Glypican-1)mRNA表达与病理特征的关联性及预测外科术后复发的效能。方法选取2019年1月至2020年5月我院收治的106例脑胶质瘤手术患者,比较瘤组织、瘤旁组织PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA表达,并根据术后6个月复发情况分为复发组和未复发组,比较两组脑胶质瘤组织PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA表达,分析脑胶质瘤组织各指标预测外科术后复发的效能。结果瘤组织PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA低于瘤旁组织,Glypican-1 mRNA高于瘤旁组织(P<0.05);复发组WHO病理分级、PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA与未复发组比较,差异有统计学意义(P<0.05);WHO病理分级增高,PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA逐渐降低,Glypican-1 mRNA逐渐升高(P<0.05);PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA与WHO病理分级呈负相关,Glypican-1 mRNA与病理分级呈正相关(P<0.05);WHO病理分级控制后,脑胶质瘤组织PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA仍与外科术后复发相关(P<0.05);PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA联合预测外科术后复发的AUC为0.959,大于单一指标预测(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA表达与病理特征关系密切,且是外科术后复发的独立危险因素,联合检测可为临床完善脑胶质瘤术后复发风险评价机制提供参考。