肺癌组织中RAP2B的表达

背景与目的:探讨肺癌组织及其癌旁组织中RAP2B的表达及其意义。材料与方法:以β-actin为内参,运用半定量RT-PCR技术检测30例肺癌组织及其癌旁组织RAP2B mRNA的表达水平。用Western-blot方法检测RAP2B蛋白的表达。结果:①肺癌组织中RAP2B mRNA的阳性表达率为73.3%(22/30),在癌旁组织中的阳性表达率为30.0%(9/30),两者间的差异具有统计学意义(P<0.05)。RAP2B mRNA在癌组织的相对表达量为0.155(0.000～0.530),在癌旁组织的相对表达量为0.000(0.000～0.160),两者间的差异具有统计学意义(P<0.05)。②RAP2B蛋白在肺癌组织中的检出率为80.0%(24/30),在癌旁组织的检出率为60.0%(18/30),两者间的差异无统计学意义(P>0.05)。RAP2B蛋白在癌组织的相对表达量为0.195(0.050～0.580),在癌旁组织的相对表达量为0.030(0.000～0.180),两者间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:RAP2B的过表达可能是肿瘤发生的一个重要标志,在肿瘤的发生发展过程中可能有重要作用。

Rap2b基因真核表达载体构建及其对NIH3T3细胞P38通路的影响

目的构建pcDNA3.1-Rap2b真核表达载体,以外源基因Rap2b转染NIH3T3细胞,以了解该基因对NIH3T3细胞AKT、ERK、JNK和P38信号转导通路的影响,为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。方法构建人Rap2b真核表达载体pcDNA3.1-Rap2b并稳定转染NIH3T3细胞,利用Western blot方法对转染的细胞进行AKT、ERK、JNK和P38磷酸化蛋白及总蛋白表达水平检测。结果转染pcDNA3.1-Rap2b质粒的细胞与转染空质粒pcDNA3.1的细胞相比,其AKT、ERK、JNK磷酸化蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),而P38磷酸化蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论 Rap2b基因外源性高表达可能对P38通路有活化作用,对JNK、ERK、AKT通路无活化作用。

miR-509-3p靶向RAP2B基因通过PI3K/AKT信号通路调控喉癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-509-3p对喉癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法将miR-con、miR-509-3p、anti-miR-con、anti-miR-509-3p、si-con、si-RAP2B分别转染至M4E细胞中,分别记为miR-con组、miR-509-3p组、anti-miR-con组、anti-miR-509-3p组、si-con组、si-RAP2B组;将miR-509-3p质粒分别与pcDNA-con、pcDNA-RAP2B共转染至M4E细胞中,分别记为miR-509-3p+pcDNA-con组、miR-509-3p+pcDNA-RAP2B组,以正常培养的细胞作为空白对照(NC)组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-509-3p和Ras相关蛋白(RAP)2B mRNA表达水平;Western印迹检测RAP2B、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测miR-509-3p和RAP2B的靶向关系。结果与喉上皮细胞NP69相比,人喉癌细胞系M4E、SCC-2、SCC-40中miR-509-3p低表达,RAP2B高表达(均P<0.05)。过表达miR-509-3p和敲减RAP2B,CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达水平显著降低,细胞存活率显著降低,细胞迁移和侵袭数目显著降低(均P<0.05)。miR-509-3p靶向RAP2B,高表达RAP2B部分逆转了miR-509-3p对M4E增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。过表达miR-509-3p,p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05),高表达RAP2B部分逆转了miR-509-3p对p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平的抑制作用。结论过表达miR-509-3p可抑制喉癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与RAP2B及PI3K/AKT信号通路有关。

新的肺癌候选癌基因RAP2B的鉴定和功能研究初探

背景与目的RAP2B是我们实验室构建的中国人肺鳞癌差异表达cDNA文库中高表达的基因之一。作为具有保守结构域的Ras超家族成员,RAP2B基因在肿瘤发生发展中的作用仍属未知。本文拟初步探讨RAP2B基因在肺癌中的作用及其机制。方法应用半定量RT-PCR方法检测了27例手术切除的肺鳞癌肿瘤组织和相应的癌旁组织中RAP2B基因的表达;结合生物信息学分析克隆全长ORF区并转染大鼠Rat1细胞,观察转化灶形成情况;采用NF-kappaB信号通路特异的报告基因观察RAP2B基因对NF-kappaB通路的影响。结果RAP2B mRNA在约67%(18/27)的肺鳞癌配对组织中肿瘤较癌旁组织高表达;成功构建了RAP2B的真核表达质粒;平板转化实验显示转染RAP2B基因的细胞出现明显转化灶;通路报告基因分析显示RAP2B能够明显激活NF-kappaB通路。结论RAP2B基因在肺癌患者的肿瘤组织高表达,在体外具有恶性转化Rat1细胞能力,提示其为候选癌基因,并且可能通过激活NF-kappaB信号通路在肺癌发生发展中发挥作用。

miR-107通过RAP2B基因调控RhoA/ROCK通路对喉癌细胞上皮间质转化的机制研究

目的探索miRNA-107通过RAP2B基因是否可以调控RhoA/ROCK通路对喉癌细胞上皮间质转化(Epithelialmesenchymal transition,EMT)及增殖、侵袭能力产生影响并探讨其作用机制。方法将miR-107 mimic、si-RAP2B、miR-107 inhibitor、si-RAP2B+miR-107 inhibitor以及相对应的对照组转染至TU1和TU8细胞;CCK-8实验测定TU1和TU8细胞的增殖能力,Transwell试验测定TU1和TU8的侵袭能力,划痕实验测定TU1和TU8的迁移能力;Western blot分析RAP2B、RhoA、ROCK和EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin的表达情况。结果miR-107过表达和沉默RAP2B均可降低TU1和TU8细胞增殖(F_(TU1)=14.652,F TU8=13.248,P<0.01)、细胞侵袭(F_(TU1)=15.037,F TU8=12.024,P<0.01)、细胞迁移能力(F_(TU1)=14.532,F TU8=11.065,P<0.01)及Vimentin(t TU1=8.28,t TU8=8.16,P<0.01)、N-cadherin(t TU1=7.63,t TU8=8.04,P<0.01)表达,提高E-cadherin(t TU1=8.69,t TU8=7.63,P<0.01)的表达水平,抑制miR-107可逆转沉默RAP2B对TU1和TU8细胞的影响。结论miR-107在TU1和TU8组织低表达,其可能通过RAP2B基因调控RhoA/ROCK通路促进TU1和TU8细胞的侵袭、迁移及EMT。

胃癌组织中RAP2B的表达与临床意义

目的检测RAP2B基因在胃癌、慢性萎缩性胃炎及正常胃黏膜中的表达情况,深入探究RAP2B基因在胃癌发病中的可能机制及临床意义。方法将2017年1月至2018年12月兵器工业521医院收治的80例经病理证实的胃癌患者的胃癌组织设为胃癌组,将36例慢性萎缩性胃炎组织设为胃炎组,22例正常胃黏膜组织设为对照组。比较RAP2B在胃癌组织、慢性萎缩性胃炎及正常胃黏膜中的表达情况,并分析其在胃癌组织中表达水平的影响因素。结果胃癌组中RAP2B的阳性表达率为80.00%(64/80),高于胃炎组的58.33%(21/36),高于对照组的22.73%(5/22),差异具有统计学意义(P<0.05)。胃癌组中,不同性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期患者的RAP2B表达情况比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同分化程度患者的RAP2B表达情况比较,差异具有统计学意义(P<0.05);有淋巴转移患者的RAP2B阳性表达率高于无淋巴转移患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论RAP2B基因阳性表达率在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、胃癌组织中逐步增高,RAP2B基因可能为促进胃癌发生的原癌基因。

Rap2b基因表达对NIH3T3细胞集落形成及细胞伤口愈合能力的影响

目的了解Rap2b基因对NIH3T3细胞集落形成及细胞伤口愈合能力的影响,为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。方法以人肺CDNA为模板克隆出Rap2b基因片段,构建pcDNA3.1-Rap2b真核表达载体,稳定转染NIH3T3细胞,利用集落形成试验和细胞伤口愈合试验,观察细胞集落形成及细胞伤口愈合能力的改变。结果与转染空质粒的细胞对比,转染pcDNA3.1-Rap2b质粒的细胞集落形成数目明显增加(P<0.01),损伤修复愈合增快。结论 Rap2b基因表达可显著增加NIH3T3细胞集落形成,并增快该细胞的损伤愈合速度。提示Rap2b基因表达可能具有促进NIH3T3细胞增殖和恶性转化功能。

Rap2B在肾癌中的表达及其意义

目的探讨Rap2B在肾透明细胞癌中的表达及其意义。方法Westernblot法检测。肾透明细胞癌Caki-1、786-O细胞及人胚肾细胞株HEK293、人肾小管细胞株HK2的Rap2B表达。收集30例手术切除的肾癌组织与癌旁组织标本，Westernblot法、免疫组织化学法检测Rap2B表达。免疫组织化学检测75例肾透明细胞癌组织芯片的Rap2B表达，并分析其与病理分期的相关性。结果肾透明细胞癌细胞株的Rap2B蛋白表达显著高于正常肾小管细胞株（P〈0．05）；肾癌组织Rap2B表达水平明显高于癌旁组织（P〈0．05）；免疫组织化学显示，Rap2B主要定位于癌细胞胞膜上，正常细胞中很少。肾癌组织和芯片中Rap2B表达均显著高于癌旁组织（P〈0．05），组织芯片显示Rap2B表达与病理分期无相关性。结论肾透明细胞癌Rap2B表达水平增高。

食管癌组织中RAP2B的表达与临床意义

[目的]探讨RAS癌基因家族成员RAP2B(member of RAS oncogene family,RAP2B)在食管癌中的表达与临床诊断意义。[方法]采用免疫组化S-P法对87例食管癌、34例Barrett食管和15例正常食管组织进行检测,观察RAP2B在各组织中的表达。分析RAP2B的表达与食管癌患者性别、年龄、临床分型、组织学类型、TNM分期、肿瘤大小、淋巴转移的关系。[结果]RAP2B基因在食管癌、Barrett食管及正常食管黏膜组织中的阳性表达率分别为66.7%(58/87)、58.8%(20/34)、26%(4/15),该基因在食管癌组织中表达阳性率明显高于Barrett食管和正常食管组织,差异有统计学意义(χ^(2)=8.592,P<0.05);食管癌组织中RAP2B蛋白的阳性表达与肿瘤分化程度(χ^(2)=7.578,P<0.05)、淋巴转移(χ^(2)=5.331,P<0.05)有关,而与性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期均无关(P>0.05)。[结论]RAP2B基因在食管癌组织中的过表达可能与食管癌的发生有关,其表达与组织学分级相关。

香烟烟雾冷凝物急性染毒对16HBE细胞Rap2B基因表达的影响

目的观察CSC急性染毒对人支气管上皮细胞的毒性特征及Rap2B基因表达的影响,推测Rap2B基因在急性染毒阶段的作用,为后续研究提供实验依据。方法 16HBE细胞暴露香烟烟雾冷凝物(CSC)24 h,于倒置显微镜下观察细胞形态变化,CCK-8法确定染毒剂量,荧光定量PCR检测该基因mRNA表达水平,Western Blot检测其蛋白表达水平。结果 CSC对16HBE细胞有毒性作用,半数抑制浓度(IC50)为(0.08±0.006)mg/ml;CSC染毒16HBE细胞24 h后,细胞形态发生一定改变,高剂量组细胞出现明显形态学改变;与对照组比较,1/8 IC50剂量组mRNA和蛋白表达水平上调较高(P<0.05),随剂量组浓度增高mRNA和蛋白表达下调至最低(IC50组,P<0.05)。结论 Rap2B基因的表达在一定范围随着染毒浓度的改变呈现先升高后下降的趋势,提示Rap2B基因可能作为CSC靶基因在其急性染毒过程中发挥一定的作用。

miR-205-5p抑制体外胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-205-5p靶向RAS致癌家族基因2B(RAP2B)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法RT-qPCR和Western blot检测胃癌细胞AGS、MGC803、MKN-28、SGC-7901和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-205-5p和RAS致癌家族基因2B的表达。分别构建过表达miR-205-5p和抑制RAP2B表达的AGS细胞株,采用MTT法检测细胞活力;Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测RAP2B、cyclin D1、MMP-2、MMP-9、GSK-3β和β-catenin蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p对RAP2B的靶向作用。结果与正常胃黏膜细胞相比,4种胃癌细胞中miR-205-5p的表达显著降低,RAP2B的表达显著升高(P<0.05)。过表达miR-205-5p或抑制RAP2B表达均可显著抑制AGS细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。miR-205-5p可负性调控RAP2B的表达。结论miR-205-5p通过靶向RAP2B抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。