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虾类十足目虹彩病毒1(DIV1)LAMP-HNB快检方法的建立
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作者 王雯琼 葛明峰 +4 位作者 卢先东 刘艳红 斯烈钢 申屠基康 徐胜威 《安徽农业科学》 CAS 2024年第15期192-196,共5页
[目的]建立一种操作简便、快速、可视化的虾类病原检测方法,实现基层养殖户自检。[方法]针对十足目虹彩病毒1(DIV1),设计环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,对反应试剂用量、温度、反应时间等条件进行优化,建立LAMP与羟基萘酚蓝(HNB)结合... [目的]建立一种操作简便、快速、可视化的虾类病原检测方法,实现基层养殖户自检。[方法]针对十足目虹彩病毒1(DIV1),设计环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,对反应试剂用量、温度、反应时间等条件进行优化,建立LAMP与羟基萘酚蓝(HNB)结合的LAMP-HNB可视化快速检测方法。[结果]在LAMP反应体系中添加12 mmol/L Mg^(2+)和250μmol/L HNB,65℃恒温条件下反应60 min最佳;DIV1病原质粒最低检出限为102 copies/μL,稳定性和特异性较好,通过带有靶标基因的阳性质粒进行16次重复性试验结果均较为稳定,多种模板扩增试验均未发生假阳性情况,符合试验要求。[结论]该研究建立的LAMP-HNB可视化快速检测方法,适用于上述对虾DIV1的现场快速检测。 展开更多
关键词 南美白对虾 LAMP HNB 十足目虹彩病毒1 快速检测
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浙江省1 km分辨率数值预报系统构建与性能评估
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作者 余贞寿 邱金晶 +3 位作者 刘雪晴 苏涛 张红蕾 陈锋 《科技通报》 2024年第6期8-15,40,共9页
本文针对浙江省短时临近精细化预报需求,基于WRF-ARW4.0.2版本和格点统计插值分析系统GSIv3.4,利用NDOWN技术,实现了从覆盖亚太地区9 km分辨率的预报向下嵌套到覆盖中国东部地区3 km分辨率预报,再向下嵌套到覆盖浙江区域1 km分辨率预报... 本文针对浙江省短时临近精细化预报需求,基于WRF-ARW4.0.2版本和格点统计插值分析系统GSIv3.4,利用NDOWN技术,实现了从覆盖亚太地区9 km分辨率的预报向下嵌套到覆盖中国东部地区3 km分辨率预报,再向下嵌套到覆盖浙江区域1 km分辨率预报,建立了逐1 h更新的浙江省1 km分辨率数值预报系统(Zhejiang high-resolution rapid refresh system,ZJHRRR)。利用ZJHRRR开展典型个例和批量回报试验分析和评估,结果表明:ZJHRRR可以较好地预报出暴雨过程降水系统发生、发展、成熟和消亡的演变过程。相比原浙江省快速更新同化预报系统(Zhejiang WRF-ADAS rapid refresh system,ZJWARRS),在各降水量级和空间邻域尺度下,ZJHRRR均展现出更好的预报能力,其中ZJHRRR的24 h和3 h暴雨量级降水预报TS (threat score)评分分别提升了61.95%、44.91%;ZJHRRR各时刻的温度与实况更为接近,ZJHRRR预报日最高温度、日最低温度相比ZJWARRS的均方根误差(root mean square error,RMSE)减小幅度分别达8.4%、5.4%。 展开更多
关键词 数值预报 快速更新 公里分辨率 检验评估 浙江
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用于黄曲霉毒素B_(1)快速检测的胶体金试剂盒质量评价
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作者 尹玉云 陶健 +3 位作者 焦强 任梦柯 闫瑛楠 魏晓媛 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期130-137,共8页
为评估黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))胶体金快速检测试剂盒性能,对6个胶体金快速检测试剂盒生产厂家的产品进行质量评价。以大豆油为基质,通过人为加入标准物质的方法制备盲样,对6个生产厂家的试剂盒组成、前处理过程、显... 为评估黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))胶体金快速检测试剂盒性能,对6个胶体金快速检测试剂盒生产厂家的产品进行质量评价。以大豆油为基质,通过人为加入标准物质的方法制备盲样,对6个生产厂家的试剂盒组成、前处理过程、显色情况、性能指标、检测时间等进行评价,并将其用于国家及河南省抽检食用油样品的检测。结果表明,6个生产厂家的试剂盒组成完整,前处理快速,易操作,检测时间短(均在25 min以内),但合格率仅50%,有3个生产厂家的试剂盒因较高的假阴性率而不达标。由此可知,质量优良的快速检测试剂盒能很好地满足实际样品检测需求,但目前市场上的快速检测试剂盒整体质量还有待提升,生产企业应严格按照国家相关标准进行研发和生产,同时国家相关部门要继续完善评价体系,加强监管。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B_(1) 胶体金快速检测试剂盒 质量评价 假阴性率 评价体系
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食品中黄曲霉毒素M_(1)的间接竞争酶联免疫法的建立
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作者 侯悦 陈瑞鹏 +3 位作者 芦然 高志贤 周焕英 杨仕平 《食品研究与开发》 CAS 2024年第3期181-186,共6页
该文建立一种间接竞争酶联免疫法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)快速测定食品中黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))的分析方法。AFM_(1)标准品用甲醇稀释,AFM_(1)标准品与AFM_(1)全抗原竞... 该文建立一种间接竞争酶联免疫法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)快速测定食品中黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))的分析方法。AFM_(1)标准品用甲醇稀释,AFM_(1)标准品与AFM_(1)全抗原竞争结合AFM_(1)单克隆抗体,利用3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine,TMB)单组分显色液显色后,酶标仪测定吸光度。在优化好的条件下,浓度范围为9.743~2.605×10^(3)pg/mL时具有良好的线性关系,相关系数(determination coefficient,R^(2))为0.9927,检出限IC_(10)为3.84 pg/mL,加标回收率为88.43%~105.75%。该方法适用性好、操作简单、灵敏度高,满足食品中AFM_(1)分析检测的需求。 展开更多
关键词 间接竞争酶联免疫法 黄曲霉毒素M_(1) 快速检测 食品 试剂盒
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黄曲霉毒素B_(1)胶体金免疫层析试纸条的制备及性能研究
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作者 董高丽 江迎春 +4 位作者 胡鹏 郭宁 杨爽爽 樊海亮 刘闯军 《山东化工》 CAS 2024年第8期29-31,38,共4页
以黄曲霉毒素B_(1)为研究对象,制作出一种可实现对黄曲霉毒素B_(1)含量快速检测的胶体金试纸条。实验采用竞争抑制法,基于试纸条的层析作用,以胶体金为标记物与黄曲霉毒素B_(1)单抗偶联,将黄曲霉毒素B_(1)抗原和羊抗鼠二抗固定到硝酸纤... 以黄曲霉毒素B_(1)为研究对象,制作出一种可实现对黄曲霉毒素B_(1)含量快速检测的胶体金试纸条。实验采用竞争抑制法,基于试纸条的层析作用,以胶体金为标记物与黄曲霉毒素B_(1)单抗偶联,将黄曲霉毒素B_(1)抗原和羊抗鼠二抗固定到硝酸纤维膜上作为检测线和质控线,制备出可以快速检测黄曲霉毒素B_(1)的免疫层析试纸条。通过优化,试纸条在37℃条件下,分别在5,10,15,20 d后测试,效果没有明显降低,检测灵敏度为20 ng/mL;与磺胺类药物、“瘦肉精”类药物均无交叉反应。该试纸条具有良好的稳定性和特异性,可实现生物样本中黄曲霉毒素B_(1)的快速大量检测。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B_(1) 胶体金 试纸条 抗体 快速检测
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分子模拟在筛选HLA-A2.1高亲和性MART-1 CTL表位中的应用研究 被引量:2
6
作者 王莉 吴玉章 +1 位作者 林治华 石统东 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1166-1168,共3页
目的 探讨计算机分子模拟在CTL表位与HLA A2 1亲和力特性研究中的应用价值。方法 应用SiliconGraphics图像工作站及InsightⅡ软件 ,分别建立MART 16个CTL预测表位与HLA A2 1结合的三维结构 ,并进行分子动力学模拟 ,通过对各结合特... 目的 探讨计算机分子模拟在CTL表位与HLA A2 1亲和力特性研究中的应用价值。方法 应用SiliconGraphics图像工作站及InsightⅡ软件 ,分别建立MART 16个CTL预测表位与HLA A2 1结合的三维结构 ,并进行分子动力学模拟 ,通过对各结合特征性参数的计算 ,对各表位肽与HLA A2 1结合稳定性进行了比较。应用Merrifield固相多肽合成技术合成上述小肽 ,通过HLA A2 1与各肽亲和力分析试验 ,证实分子模拟结果的可靠性。结果 通过分子模拟手段计算所得 6个表位与HLA A2 1结合特性结果 ,基本与通过实验手段所得结果相符。结论 计算机分子模拟在CTL表位与MHC Ⅰ类分子的亲和力研究中 ,具有简单、直观、快速、准确等优点 ,该方法在筛选MHC Ⅰ类分子高亲和性CTL表位的研究中具有诱人的应用前景。 展开更多
关键词 mart-1 CTL表位 分子动力学模拟 结合亲和力分析 肿瘤免疫治疗 肿瘤抗原
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TEM microstructure of rapidly solidified Mg-6Zn-1Y-1Ce alloy
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作者 杨文朋 郭学锋 卢正欣 《Transactions of Nonferrous Metals Society of China》 SCIE EI CAS CSCD 2012年第4期786-792,共7页
Rapidly solidified(RS) Mg-6Zn-1Y-1Ce ribbons were prepared by single roller melt-spinning technique.Transmission electron microscopy and energy dispersive X-ray spectroscopy were employed to characterize the microst... Rapidly solidified(RS) Mg-6Zn-1Y-1Ce ribbons were prepared by single roller melt-spinning technique.Transmission electron microscopy and energy dispersive X-ray spectroscopy were employed to characterize the microstructure of RS ribbons.The results show that there is high density of particles distributed within grains and at grain boundaries in the region near wheel side.The particle density is decreased in the middle region and free surface region.The alloy is predominantly composed of supersaturated--Mg solid solution,T phase and W phase;meanwhile,a few icosahedral quasicrystalline and Mg4Zn7 particles are also observed.The T phase is confirmed having a body-centered orthorhombic structure that is transformed from the body-centered tetragonal structure Mg12Ce phase due to the partial substitution of Mg atoms by Zn. 展开更多
关键词 Mg-6Zn-1Y-1Ce alloy rapid solidification T phase icosahedral quasicrystalline Mg4Zn7 phase W phase
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MART-1HLA-A2限制性CTL表位的预测
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作者 王莉 吴玉章 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期931-933,共3页
目的 预测黑色素瘤分化抗原MART 1的HLA A2限制性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)表位。方法 采用超基序与量化基序多项式方案相结合的办法 ,对目的抗原MART 1的HLA A2限制性CTL表位进行预测。结果 预测出了 6个九肽表位。结论 两种方法预... 目的 预测黑色素瘤分化抗原MART 1的HLA A2限制性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)表位。方法 采用超基序与量化基序多项式方案相结合的办法 ,对目的抗原MART 1的HLA A2限制性CTL表位进行预测。结果 预测出了 6个九肽表位。结论 两种方法预测结果的一致性较好 ,所预测出的 6个MART 1的HLA A2限制性CTL表位经后续实验筛选、鉴定后 ,可望用于新型MART 1肿瘤治疗性多肽疫苗的设计研究 。 展开更多
关键词 mart-1 HLA-A2 CTL表位 多肽疫苗 黑色素瘤
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MART-1研究进展 被引量:1
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作者 贾正才 《国外医学(免疫学分册)》 2000年第2期92-96,共5页
近年来 ,人类黑色素瘤相关抗原已被陆续鉴定。MART 1为黑色素瘤相关抗原中抗原性较强的一种 ,其基因已被克隆 ,抗原的性质及呈递MART 1的HLA分子已得到部分阐明。研究发现 ,在MART 1上有几个免疫优势表位 ,它们能在体内外诱导产生CT... 近年来 ,人类黑色素瘤相关抗原已被陆续鉴定。MART 1为黑色素瘤相关抗原中抗原性较强的一种 ,其基因已被克隆 ,抗原的性质及呈递MART 1的HLA分子已得到部分阐明。研究发现 ,在MART 1上有几个免疫优势表位 ,它们能在体内外诱导产生CTL免疫应答。其中 ,已有部分CTL表位被用于黑色素瘤的主动免疫治疗 ,是一种有着广阔应用前景的黑色素瘤治疗性疫苗的候选者。 展开更多
关键词 肿瘤抗原 mart-1
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梨矮化砧木中矮1号组培快繁技术研究 被引量:1
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作者 王艺衡 冯静涵 +7 位作者 于春亮 李涛 李金斗 赵健霄 张海霞 张玉星 马辉 许建锋 《山东农业科学》 北大核心 2023年第6期32-41,共10页
为建立一种增殖系数高、生根效果好的梨矮化砧木中矮1号的组培快繁技术,本试验以中矮1号组培苗为试材,分别对其快繁的外植体种类、消毒方式、继代培养基配方、生根培养基配方和生根培养条件进行研究筛选。结果表明,一年生枝条水培萌发... 为建立一种增殖系数高、生根效果好的梨矮化砧木中矮1号的组培快繁技术,本试验以中矮1号组培苗为试材,分别对其快繁的外植体种类、消毒方式、继代培养基配方、生根培养基配方和生根培养条件进行研究筛选。结果表明,一年生枝条水培萌发的叶芽和无花芽混合芽更适合作为中矮1号的外植体,最佳消毒方式为:75%酒精30 s→0.1%升汞3 min→无菌水30 s。最佳继代培养基为:MS+30 g/L蔗糖+1.8 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L GA_(3)+7 g/L琼脂、pH=6.0,平均增殖系数为5.52;6-BA对继代增殖的影响最大,主要影响增殖系数、苗高、叶片数和节间数,NAA主要影响芽长和节间长度,GA_(3)对芽长、苗高和节间长度也有一定影响。两步生根法生根培养效果优:先在配方为1/2MS+15 g/L蔗糖+1.0 mg/L IBA+0.4 mg/L IAA+0.6 mg/L NAA+7 g/L琼脂、pH=6.0的培养基上培养7天(前5天为暗培养),后转入无激素培养基培养,平均生根率达72.22%;活性炭(AC)对生根培养的影响最大,0.5、1.0 g/L AC均会抑制其生根,IBA主要影响生根率,IAA主要影响根数和根长,NAA主要影响生根所需天数。生根培养前期进行暗培养的生根效果要好于强光、弱光、微光培养;刚完成继代培养的幼嫩苗更适合中矮1号的生根培养。本试验建立的中矮1号组培快繁技术,可为优质品种保存和规模化生产提供技术支持。 展开更多
关键词 梨砧木 中矮1 组培快繁 外植体 增殖系数 生根率
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Identification of the child with influenza A (H1N1): Clinical criteria versus the rapid influenza A-B test
11
作者 Jesus Reyna-Figueroa Karla Maldonado-Silva Ana Elena Limon-Rojas 《Open Journal of Preventive Medicine》 2012年第2期225-228,共4页
Introduction: During the influenza A (H1N1) pandemic infection, the Ministry of Health in Mexico recommended that it be considered as a suggestive clinical picture in patients with fever, cough and headache. In some p... Introduction: During the influenza A (H1N1) pandemic infection, the Ministry of Health in Mexico recommended that it be considered as a suggestive clinical picture in patients with fever, cough and headache. In some places where the resource was available, the rapid seasonal influenza (A-B) test was used as an alternative identification strategy. Methods: From April 2009 to May 2010, patients under 18 years of age with acute respiratory tract symptoms were included in a retrospective study. They underwent the following procedures: 1) application of the clinical criteria recommended by the federal Ministry of Health during the A (H1N1) pandemic;2) rapid test for seasonal influenza (A-B), and 3) search for the influenza A (H1N1) virus by means of the real time polymerase chain reaction (RT-PCR). The study was approved by the research and ethics committee at the Central South Hospital of the government-owned Mexican Petroleum Company (PEMEX). Results: One hundred and thirty pediatric patients with a median age of eight years and a range between one and 17 years were included. Taking into account the Ministry of Health’s criteria, we found the following: 50% sensitivity, 69% specificity, 80% positive predictive value and 27% negative predictive value versus the rapid test that displayed 82% sensitivity, 70% specificity, 80% positive predictive value and 27% negative predictive value. Conclusions: Clinical criteria display low sensitivity in the infected children studied, whereas the rapid influenza A-B test constitutes a better option to identify these patients. 展开更多
关键词 Diagnosis INFLUENZA H1N1 EFFICACY Criteria rapid TEST
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Brn-2在人脉络膜黑色素瘤细胞系中的表达及其对MART-1基因启动子活性的影响
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作者 王应利 周玉梅 +2 位作者 陶俊 靳扬扬 陈冉 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第9期837-841,共5页
目的探讨黑色素抗原转录子Brn-2在人脉络膜黑色素瘤细胞系中的表达及其对T细胞可识别抗原-1(melanoma antigen recognized by T cells 1,MART-1)启动子活性的影响。方法采用RT-PCR和Western blot检测人脉络膜黑色素瘤细胞系92-1、92-2、... 目的探讨黑色素抗原转录子Brn-2在人脉络膜黑色素瘤细胞系中的表达及其对T细胞可识别抗原-1(melanoma antigen recognized by T cells 1,MART-1)启动子活性的影响。方法采用RT-PCR和Western blot检测人脉络膜黑色素瘤细胞系92-1、92-2、Me1285和Ocm3细胞中Brn-2的mRNA和蛋白表达水平。将含不同长度MART-1基因启动子序列和荧光素酶报告基因的表达质粒p GL3-Luc构建成融合表达载体p GL3-p286-Luc及p GL3-p2956-Luc,与p EV-Brn-2融合表达质粒共转染脉络膜黑色素瘤细胞系细胞。分别测量四种细胞系中p286组、p2956组、p286+Brn-2组、p2956+Brn-2组细胞荧光素酶表达变化,并观察Brn-2对上述细胞MART-1基因启动子活性的影响。结果人脉络膜黑色素瘤细胞系92-1、92-2、Me1285、Ocm3细胞系均可检测到Brn-2 mRNA和蛋白的表达,Brn-2蛋白电泳带大致在相对分子质量47 000处。p GL3-p2956-Luc及p GL3-p286-Luc重组质粒经Apa I和Nhe I双酶切可切出2956 bp和286 bp 2个条带,p EV-Brn-2重组质粒经EcoRI和Bam HI双酶切可切出1329 bp条带。p EV-Brn-2重组质粒分别对人脉络膜黑色素瘤细胞系Ocm3、Mel285、92-2、92-1进行磷酸钙法转染,Western blot检测可见四种细胞系均表达Brn-2蛋白。缺乏Brn-2时,所有细胞的MART-1的p286均显示出活性,MART-1阳性细胞系(92-1、92-2、Ocm3)p286活性高于阴性细胞系(Mel285)。p2956活性不同细胞系表现不同,92-1、92-2中较高,Ocm3中其活性与细胞密度相关,MART-1阴性细胞系中p2956近乎无活性。共转染Brn-2后明显下调92-1、92-2、Ocm3中启动子p286及p2956活性(P<0.05);阴性细胞系Mel285中,Brn-2对启动子活性无影响(P>0.05)。结论 Brn-2表达于人脉络膜黑色素瘤细胞,并下调阳性细胞系MART-1启动子活性。 展开更多
关键词 Brn-2 mart-1基因启动子 脉络膜黑色素瘤细胞系
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基于QuEChERS样品前处理的间接竞争酶联免疫分析法快速检测薏苡仁中黄曲霉毒素B_(1) 被引量:1
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作者 张磊 关凯仪 +1 位作者 黄雨心 王淑美 《广东药科大学学报》 CAS 2023年第6期37-43,共7页
目的解决间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)检测薏苡仁中黄曲霉毒素B_(1)(Aflatoxin B_(1),AFB_(1))的基质干扰问题,建立一种简便的高通量检测方法,用于薏苡仁中AFB_(1)的快速... 目的解决间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)检测薏苡仁中黄曲霉毒素B_(1)(Aflatoxin B_(1),AFB_(1))的基质干扰问题,建立一种简便的高通量检测方法,用于薏苡仁中AFB_(1)的快速筛查。方法以ic-ELISA的显色值和抑制率为评价指标优化样品前处理过程,重点考察QuEChERS萃取净化技术、不同稀释溶剂和稀释方式消除基质效应的效果,并对建立的方法进行方法学考察,最后应用于薏苡仁实际样品检测,检测结果用液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行确证。结果建立了一种无需任何校正,可用溶剂标准曲线进行定量分析的ic-ELISA。方法的半数抑制浓度为0.074 ng/mL,线性范围为1.37~20.0μg/kg,加标回收率在75.12%~84.46%之间,RSD小于6%。122批薏苡仁及其相关样品中AFB_(1)的阳性率为20.5%,阳性样品的超标率为24.0%,污染水平为1.76~27.56μg/kg。ic-ELISA与LC-MS/MS检测结果的相关系数(r)为0.98。结论QuEChERS萃取净化技术能够有效去除薏苡仁中的干扰成分,对快速样品前处理方法的建立具有重要应用价值,结合本研究所建立的ic-ELISA,为薏苡仁中AFB_(1)的检测和监测提供简便有效的技术手段。 展开更多
关键词 QuEChERS技术 间接竞争酶联免疫分析方法 快速检测 薏苡仁 黄曲霉毒素B_(1)
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循环酪氨酸酶和MART-1mRNA不能独立预测AJCCI-II期黑色素瘤患者的复发或存活
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作者 Schmidt H. Sorensen B.S. +1 位作者 Sjoegren P. 朱国兴 《世界核心医学期刊文摘(皮肤病学分册)》 2006年第6期15-15,共1页
The detection of melanoma cells in peripheral blood has been proposed to select patients with a high risk of relapse. In this study, tyrosinase and melanoma antigen recognized by T cells 1 (MART-1) mRNA expression was... The detection of melanoma cells in peripheral blood has been proposed to select patients with a high risk of relapse. In this study, tyrosinase and melanoma antigen recognized by T cells 1 (MART-1) mRNA expression was evaluated in serial samples obtained before definitive surgery and during follow-up in patients with American Joint Committee on Cancer stage I-II melanoma. Serial samples (n = 2,262) were collected from 236 patients from 1997 to 2002. Analyses of the RNA samples were performed with a calibrated reverse transcriptase-PCR assay. Gender, age, primary tumor site, ulceration, thickness, Clark level, and histological subtype were analyzed together with tyrosinase and MART-1 mRNA treated as updated covariates in a Cox proportional-hazard model. After a median follow-up time of 66 months, 42 out of 236 patients (18%) had relapsed. The following variables were significantly associated with relapse free survival in the univariate analyses: tyrosinase, MART-1, gender, ulceration, thickness, Clark level, and histological subtype. Entering these covariates into a multivariate Cox analysis resulted in thickness as the single independent prognostic factor (P < 0.0001), whereas MART-1 (P = 0.07) approached significance at the 5%significance level. The serial measurements of tyrosinase and MART-1 mRNA in peripheral blood of stage I-II melanoma patients cannot be demonstrated to have independent prognostic impact on relapse free survival. 展开更多
关键词 黑色素瘤细胞 mart-1 酪氨酸酶 MRNA 预测因素 无复发 患者 AJCC 存活 Ⅱ期
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利用重组酶聚合酶扩增和表面增强拉曼散射快速检测大肠杆菌耐药基因mcr-1
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作者 马婷婷 王盼雪 李国梁 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第21期107-115,共9页
目的利用重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)方法和表面增强拉曼散射(surface enhanced Raman scattering,SERS)技术建立一种大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)耐药基因mcr-1的快速检测方法。方法首先,通过RP... 目的利用重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)方法和表面增强拉曼散射(surface enhanced Raman scattering,SERS)技术建立一种大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)耐药基因mcr-1的快速检测方法。方法首先,通过RPA特异性扩增大肠杆菌耐药基因mcr-1的保守序列。然后,以金纳米粒子(gold nanoparticles,Au NPs)作为SERS增强基底,利用便携式拉曼光谱仪采集样品的SERS光谱。最后,利用样品的特征SERS信号,实现大肠杆菌耐药基因mcr-1的快速、灵敏检测。结果样品位于505.5和840.9 cm^(-1)拉曼位移处的SERS信号强度与其浓度的对数值之间具有良好的线性相关关系,r^(2)分别为0.9827和0.9636。该方法的最低检测限为3.2×10^(-4)pg/μL,检测时间约为30min。结论本研究建立的RPA结合SERS方法检测耐药基因灵敏度高、用时短,为细菌耐药基因的快速检测提供了新思路。 展开更多
关键词 大肠杆菌 耐药性 mcr-1 快速检测 重组酶聚合酶扩增 表面增强拉曼散射
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基于RPA-LFD法的多黏菌素耐药基因mcr-1可视化快速检测方法建立与应用
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作者 焦雪 董羽织 +3 位作者 王靖雯 吕晨泽 方结红 蒋晗 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第18期209-216,共8页
目的:建立一种快速、高效、可视化的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1检测方法,为其基层检测的展开提供依据和便利。方法:利用重组酶聚合酶扩增结合胶体金侧向流试纸条技术(Recombinase polymerase amplification combined with a lateral flo... 目的:建立一种快速、高效、可视化的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1检测方法,为其基层检测的展开提供依据和便利。方法:利用重组酶聚合酶扩增结合胶体金侧向流试纸条技术(Recombinase polymerase amplification combined with a lateral flow dipstick,RPA-LFD),辅以手持式胶体金读数仪;根据mcr-1基因保守序列设计合成一对特异性RPA引物,通过对反应条件和体系的优化,以及特异性试验、灵敏度试验、模拟食样试验和实际样品试验,成功建立了可视化定量检测细菌多黏菌素耐药基因mcr-1的RPA-LFD方法。结果:在引物浓度400 nmol/L,引物比例1:1时,该方法最佳反应条件为Mg^(2+)浓度14.0 mmol/L,反应温度37℃,反应时间20 min;灵敏度好,标准曲线方程为y=0.117x+0.051,定量限为10^(1)~108 copies/μL,检出限为10^(1)copies/μL,比PCR法低一个数量级且模拟样品检出结果与PCR法一致。利用建立的RPA-LFD法对猪肉样品、鸡肉样品、生猪养殖场环境样品、肉鸡养殖场环境样品、大肠杆菌分离株和弯曲肠杆菌分离株各15份中多黏菌素耐药基因mcr-1携带情况进行分析;RPA-LFD法与常规PCR法阳性样本检出率一致,共检出9份mcr-1基因阳性样品。RPA-LFD定量分析显示,阳性样品中mcr-1基因浓度在4.5×10^(2)~8.6×10^(4)copies/μL之间。结论:本研究建立的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1的RPA-LFD检测法特异性强、灵敏性高、操作简单,可广泛应用于基层检验。 展开更多
关键词 多黏菌素耐药基因 mcr-1 重组酶聚合酶扩增技术 胶体金侧向流试纸条 快速检测 可视 定量
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国家1:50000地形数据库重点要素动态更新 被引量:25
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作者 刘建军 赵仁亮 +2 位作者 张元杰 李雪梅 刘建炜 《地理信息世界》 2014年第1期37-40,共4页
国家1:50 000地形数据库是国家基础地理信息数据库的主要内容之一,是用途最广、使用频率最多的基础测绘成果,保持其现势性是我国基础测绘工作的重要使命。2012年国家测绘地理信息局组织实施了对该数据库的快速动态更新,实现了每年更新一... 国家1:50 000地形数据库是国家基础地理信息数据库的主要内容之一,是用途最广、使用频率最多的基础测绘成果,保持其现势性是我国基础测绘工作的重要使命。2012年国家测绘地理信息局组织实施了对该数据库的快速动态更新,实现了每年更新一次,每年发布新版。本文主要总结介绍了全国1:50 000地形数据库动态更新项目取得的主要创新和数据成果。 展开更多
关键词 1 50 000地形数据库 重点要素 动态更新
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一种新型H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂的建立 被引量:6
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作者 葛胜祥 徐飞海 +10 位作者 罗海峰 陈毅歆 郭永利 陈自敏 王嘉 罗文新 吴婷 张军 陈鸿霖 管轶 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期445-449,共5页
利用5株广谱特异性抗H5亚型血凝素单克隆抗体和酶联免疫渗滤技术成功地建立了一种适于现场检测H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的抗原快速检测试剂H5-HA(Ag)Dot-ELISA。该试剂对41株代表当前亚洲地区流行的各种遗传变异亚系H5N1禽流感病毒... 利用5株广谱特异性抗H5亚型血凝素单克隆抗体和酶联免疫渗滤技术成功地建立了一种适于现场检测H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的抗原快速检测试剂H5-HA(Ag)Dot-ELISA。该试剂对41株代表当前亚洲地区流行的各种遗传变异亚系H5N1禽流感病毒检测均为阳性,对多数毒株的分析灵敏度优于0.1个血凝滴度(HA titer),其中部分优于0.01个血凝滴度;比较该试剂与早期开发的同类ELISA试剂,发现前者对后者未能检出的H5N1新变异株检测均为阳性;利用该试剂和商品化Directigen Flu A(BD)试剂检测两株H5N1病毒株,提示前者灵敏度高于后者;该试剂对一株H5N1病毒的检测灵敏度与标准RT-PCR相当;该试剂对24株非H5亚型病毒检测均为阴性,显示出良好特异性。以上结果提示,此研究建立的H5N1病毒抗原快速检测试剂在H5禽流感现场检测上具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5N1 抗原快速检测 血凝素 单克隆抗体
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香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种的快速检测与鉴定 被引量:13
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作者 李敏慧 余雄涛 +3 位作者 王鸿飞 周佳暖 习平根 姜子德 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第19期3971-3979,共9页
【目的】从香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种特有的基因序列入手,建立一种快速可靠的分子检测技术,为防止香蕉枯萎病的传播蔓延、尽早采取防治对策、指导香蕉生产进行品种配置提供理论依据。【方法】根据研究室已经筛选到的4号生理小种候... 【目的】从香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种特有的基因序列入手,建立一种快速可靠的分子检测技术,为防止香蕉枯萎病的传播蔓延、尽早采取防治对策、指导香蕉生产进行品种配置提供理论依据。【方法】根据研究室已经筛选到的4号生理小种候选致病相关基因序列设计引物,分别以来自海南、广东和广西的6个香蕉枯萎病菌1号生理小种菌株、7个4号生理小种菌株、7个尖镰孢其它专化型菌株以及2个外围菌株DNA为模板进行PCR扩增,筛选香蕉枯萎病菌1号、4号生理小种特异性引物及尖镰孢菌的通用引物。【结果】筛选到的特异性引物不仅可用于香蕉枯萎病菌DNA的检测,还可直接用于对罹病香蕉组织和土壤中的香蕉枯萎病菌的检测;筛选到的尖镰孢菌通用引物,可作为内参照以检测DNA的质量,以避免假阴性情况的出现。【结论】所建立的三重PCR检测方法实现了在一次PCR反应中快速、准确地同步检测香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种,对检测香蕉苗是否感染枯萎病及蕉园土壤是否受到香蕉枯萎病菌的污染具有重要意义。 展开更多
关键词 香蕉枯萎病菌 1号和4号生理小种 三重PCR 快速检测与鉴定
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马疱疹病毒1型LAMP检测方法的建立 被引量:6
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作者 杨夷平 刘建华 +3 位作者 冉多良 许全圆 李娜 加尔肯 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第9期35-40,共6页
本试验旨在建立一种检测马疱疹病毒1型(EHV-1)的快速、灵敏、特异的环介导等温扩增技术(LAMP),同时评价该方法的可靠性。根据马鼻肺炎糖蛋白B(gB)基因特异保守序列设计多对LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进... 本试验旨在建立一种检测马疱疹病毒1型(EHV-1)的快速、灵敏、特异的环介导等温扩增技术(LAMP),同时评价该方法的可靠性。根据马鼻肺炎糖蛋白B(gB)基因特异保守序列设计多对LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程,进行引物筛选和反应条件的优化,建立能特异性扩增EHV-1DNA的LAMP检测方法,并加入SYBR GreenⅠ通过肉眼判断结果。该方法在65℃恒温下作用50min,使EHV-1DNA获得了高效率的特异性扩增,与其他马易感病毒如马疱疹病毒4型(EHV-4)等无交叉反应;且具有极高的灵敏性,可检测到10-4稀释的目标病毒,比普通PCR的灵敏度高10倍;反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼观察的结果与LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。通过将4份临床样品的LAMP检测结果与已得到验证的PCR结果进行比对,结果显示符合率为100%。本研究建立的LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏、简单易操作且设备要求低等特点,具有实地检测EHV-1的前景。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1 环介导等温扩增技术 快速检测
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