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基于RT-RAPID和CRISPR-Cas12a的诺如病毒GⅡ.6亚型核酸检测方法的建立
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作者 冉红志 樊成 +4 位作者 王雪飞 刘静 康婕 钱卫东 王婷 《动物医学进展》 北大核心 2023年第9期44-50,共7页
为建立一种特异性强、灵敏度高且简单方便的诺如病毒GⅡ.6核酸快速检测方法,下载诺如病毒GⅡ.6基因组序列,用Mega7.0对基因组进行比对分析获得高度保守序列;基于保守序列设计诺如病毒GⅡ.6的反转录重组酶和聚合酶等温检测(RT-RAPID)技... 为建立一种特异性强、灵敏度高且简单方便的诺如病毒GⅡ.6核酸快速检测方法,下载诺如病毒GⅡ.6基因组序列,用Mega7.0对基因组进行比对分析获得高度保守序列;基于保守序列设计诺如病毒GⅡ.6的反转录重组酶和聚合酶等温检测(RT-RAPID)技术扩增引物、荧光探针、crRNA和报告分子;优化RT-RAPID的反应引物、反应温度和反应时间及Cas12a检测用的crRNA,并分析RT-RAPID-Cas12a方法的特异性和灵敏度。基于RT-RAPID荧光法和RT-RAPID-Cas12a荧光法的诺如病毒GⅡ.6亚型核酸快速检测方法能在1 h内完成检测并得出结果,灵敏度分别为10 copies/μL和0.5 copies/μL,且两个方法均与诺如病毒GⅡ.17型、鼻病毒、偏肺病毒和博卡病毒无交叉反应。2个检测方法与RT-qPCR阳性样本一致率均为90%,阴性样本一致率均为100%。论文建立的基于RT-RAPID和Cas12a的诺如病毒GⅡ.6核酸快速检测方法均可高效快速地检测出诺如病毒GⅡ.6,具有灵敏度高、特异性强、操作便捷且快速等特点。 展开更多
关键词 诺如病毒GⅡ.6亚型 反转录重组酶聚合酶扩增 规律间隔成簇短回文重复序列的/相关蛋白12a 核酸检测
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甘薯褪绿矮化病毒西非株系RT-RPA-LFD检测方法的建立与应用
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作者 王永江 乔奇 +4 位作者 王爽 赵付枚 田雨婷 张德胜 张振臣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期2781-2790,共10页
【目的】利用逆转录酶重组酶聚合酶扩增(reverse transcriptase recombinase polymerase amplification,RT-RPA)结合侧向流层析(lateral flow dipstick,LFD)试纸条技术,建立甘薯褪绿矮化病毒(sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV... 【目的】利用逆转录酶重组酶聚合酶扩增(reverse transcriptase recombinase polymerase amplification,RT-RPA)结合侧向流层析(lateral flow dipstick,LFD)试纸条技术,建立甘薯褪绿矮化病毒(sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)西非株系(west African strain,WA)的RT-RPA-LFD检测方法。【方法】根据SPCSV-WA外壳蛋白基因和热激蛋白基因的保守序列设计并筛选扩增效果好、特异性强的引物和探针。然后对引物和探针的浓度、扩增体系、温度、反应时间等条件进行优化,建立SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法。利用该方法对SPCSV-EA、甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)、甘薯潜隐病毒(sweet potato latent virus,SPLV)、甘薯G病毒(sweet potato virus G,SPVG)等常见的甘薯病毒进行检测,验证方法的特异性;将感染SPCSV-WA甘薯叶片样品总RNA进行10倍梯度稀释,分别采用RT-PCR和RT-RPA-LFD进行检测,比较RT-PCR和RT-RPA-LFD方法的灵敏度;对采自田间的甘薯样品和试管苗样品进行RT-RPA、RT-RPA-LFD和RT-PCR检测,验证该方法的实用性。【结果】建立了SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法,最适引物为CSV357F/R,探针CSV-CP-Probe(47 bp),引物和探针工作浓度分别为0.2和0.06μmol·L-1,温度为42℃,时间5 min。该方法可对SPCSV-WA进行特异性检测,与甘薯上其他常见病毒无交叉反应。RT-RPA-LFD最低可检测到总RNA稀释至10-4溶液,而RT-PCR最低检测到总RNA稀释至10-3溶液,RT-RPA-LFD灵敏度是RT-PCR的10倍。田间采集的22份甘薯样品经RT-PCR、RT-RPA和RT-RPA-LFD检测,均检出11份阳性样品,3种方法检测结果一致。28份试管苗样品的检测结果表明,RT-PCR和RT-RPA-LFD检测结果一致,均检出5份阳性样品。【结论】建立了SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法,该方法具有快速、简便、特异、灵敏、可视的特点,既可用于甘薯脱毒试管苗样品的病毒检测,也适用于基层单位田间甘薯病毒样品的现场快速检测。 展开更多
关键词 甘薯褪绿矮化病毒西非株系 逆转录酶重组酶聚合酶扩增 侧向流层析 快速检测 甘薯
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H1亚型禽流感病毒RT-RPA-LFD快速检测方法的建立及应用
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作者 曾婷婷 李孟 +9 位作者 谢芝勋 李丹 谢丽基 罗思思 张民秀 王盛 谢志勤 范晴 阮志华 粟永春 《江西农业学报》 CAS 2024年第3期61-66,共6页
以H1亚型AIV的HA基因为研究对象,采用重组聚合酶核酸等温扩增技术(RPA),通过RT-PCR方法优选出1套引物,进而优化体系的反应温度、最佳探针及引物浓度,使用优化后的最佳反应体系进行敏感性及特异性试验,并探索该方法能达到的最短反应时间... 以H1亚型AIV的HA基因为研究对象,采用重组聚合酶核酸等温扩增技术(RPA),通过RT-PCR方法优选出1套引物,进而优化体系的反应温度、最佳探针及引物浓度,使用优化后的最佳反应体系进行敏感性及特异性试验,并探索该方法能达到的最短反应时间,利用侧向流动免疫(LFD)试纸条观测反应后的结果,最终建立检测H1亚型AIV的RT-RPA-LFD快速检测方法。结果表明:建立的RT-RPA-LFD快速检测方法在探针工作浓度为0.14 mmol/L,37℃条件下反应20 min,可最低检测到1.5×10^(2)copies/反应的H1亚型AIV RNA,其他常见家禽病原体未见阳性反应。该方法与RT-PCR及鸡胚分离鉴定测序结果完全一致,可满足H1亚型AIV临床快速鉴别诊断的需求,为基层兽医现场快速检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 H1亚型AIV 等温扩增技术 快速检测 rt-RPA-LFD
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Sprayformed Hot Work Steels for Rapid Tooling 被引量:5
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作者 Yunfeng Yang Simo-Pekka Hannula 《Journal of Materials Science & Technology》 SCIE EI CAS CSCD 2003年第z1期169-172,共4页
The present work compares microstructures of hot work steels made by different processes, that is, by sprayforming,by casting, and a commercially supplied H13 steel. Material benefits are recognized by sprayforming ho... The present work compares microstructures of hot work steels made by different processes, that is, by sprayforming,by casting, and a commercially supplied H13 steel. Material benefits are recognized by sprayforming hot working tools such as die inserts for hot forging. The sprayformed hot work steels present a fine and homogeneous microstructure,which implies that, at a similar toughness level, the sprayformed steel can be higher alloyed, so that the thermal fatigue and wear resistance at elevated temperatures can be improved. A series of steels with higher vanadium content than commercial hot work steels are developed. There are no segregation and carbide network problems usually encountered in conventional ingot/forging processed high-vanadium steels. Microstructure and hardness of the new sprayformed steels are studied under different heat treatment conditions. It is justified that these sprayformed steels can be directly used for tooling without high temperature hardening. Sprayforming the tool steels onto a precision ceramic mould is demonstrated to extend the technoeconomical benefits, so that a net shape production tool can be rapidly made.Features of the rapid tooling process are also discussed. 展开更多
关键词 rapid tooling Sprayforming HOT working steel DIE INSErt
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牛病毒性腹泻病毒1型RT-RAA快速诊断方法的建立 被引量:1
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作者 范颖 田雪 +5 位作者 孙淑芳 吴发兴 尼博 刘建柱 孙翔翔 胡莉萍 《中国动物检疫》 CAS 2023年第4期93-98,共6页
为解决牛病毒性腹泻病毒(BVDV)现场快速诊断难点,提升应急响应速度,根据BVDV 1型基因组5’-UTR保守区序列设计特异性引物和探针,建立了BVDV 1型重组酶聚合酶等温核酸扩增方法(reverse transcription recombinase aid amplification,RT-R... 为解决牛病毒性腹泻病毒(BVDV)现场快速诊断难点,提升应急响应速度,根据BVDV 1型基因组5’-UTR保守区序列设计特异性引物和探针,建立了BVDV 1型重组酶聚合酶等温核酸扩增方法(reverse transcription recombinase aid amplification,RT-RAA),并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估。结果显示:该方法在39℃等温条件下检测时间为20 min,对BVDV 1型核酸检测下限为1.2×10^(2) copies/μL;3个浓度梯度的核酸组内重复性试验的变异系数(CV)分别为3.24%、9.48%和8.79%,均在10.00%以内,重复性好;建立的方法与猪瘟病毒、牛冠状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒等无特异性反应。对66份临床样品进行检测,发现所建立的方法与荧光定量PCR检测结果符合率为98.48%,Kappa值为0.881(P<0.001)。结果表明,本研究建立的RT-RAA快速诊断方法特异性强、灵敏度高、操作便捷,可用于BVDV 1型的现场快速检测。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 重组酶介导的等温扩增 快速诊断
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A Novel RT-LAMP Assay for Rapid and Simple Detection of Classical Swine Fever Virus 被引量:12
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作者 Lei CHEN Xue-zheng FAN Qin WANG Lu XU Qi-zu ZHAO Yuan-chen ZHOU Jun LIU Bo TANG Xing-qi ZOU 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2010年第1期59-64,共6页
A simple and rapid assay for the detection of Classical swine fever virus(CSFV)was established using reverse transcription loop-mediated isothermal amplification(RT-LAMP).This study describes the amplification of the ... A simple and rapid assay for the detection of Classical swine fever virus(CSFV)was established using reverse transcription loop-mediated isothermal amplification(RT-LAMP).This study describes the amplification of the genomic RNA of CSFV under isothermal conditions(63℃)within one hour,using a set of six primers(two outer primers,two inner primers and two loop primers).This RT-LAMP assay showed 100-fold higher sensitivity than the standard RT-PCR method and identified eighteen additional positive cases that were negative when tested by RT-PCR.This RT-LAMP was able to detect all the 13 strains of CSFV but not the BVDV.PRRSV.SIV. PRV-PCV,thus showed a good specificity.Products amplified by RT-LAMP can be visualized by agarose gel electrophoresis and in addition,either as a white precipitate at the bottom of the tube after a pulse spin or as a color change when dyed with SYBR Green I which are visible to the naked eye.Because RT-LAMP is low-cost and produces rapid results,it has the potential to be an excellent tool for CSFV surveillance in the field,especially in developing countries. 展开更多
关键词 猪瘟病毒 病毒检测 逆转录 琼脂糖凝胶电泳 牛病毒性腹泻 循环使用 投资工具
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猪流行性腹泻病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立与初步应用 被引量:2
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作者 李林岳 李任峰 +6 位作者 袁嘉康 秦保亮 庞俊增 蔡琳琳 赵晓会 范国英 王自良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期814-821,828,共9页
为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)可视化反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,本研究根据PEDV ORF1a/b基因的保守序列,设计了8组特异性引物,以PEDC cDNA为模板,采用试剂盒推荐的各反应条件经LAMP扩增,根据LAMP反应产物琼脂糖凝胶电泳... 为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)可视化反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,本研究根据PEDV ORF1a/b基因的保守序列,设计了8组特异性引物,以PEDC cDNA为模板,采用试剂盒推荐的各反应条件经LAMP扩增,根据LAMP反应产物琼脂糖凝胶电泳结果筛选最佳引物组。以筛选的外引物PE2 F3/B3经PCR从PEDV cDNA中扩增ORF1a/b基因,构建重组质粒pPE-ORF1-2并分别经PCR和测序鉴定。结果显示,2号引物组(内引物PE2 FIP/PE2 BIP,外引物PE2 F3/PE2 B3)为最佳引物。PCR和测序鉴定结果表明重组质粒正确构建,经计算其浓度为1.56×1011拷贝/μL,将其稀释1000倍后作为质粒标准品。为建立检测PEDV的RT-LAMP方法,本研究对该方法的反应时间、反应温度、Mg2+浓度、内、外引物及dNTP浓度进行了优化,结果显示,RT-LAMP反应体系为:60℃反应50 min,Mg2+浓度80 mmol/L,内外引物终浓度分别为32μmol/L和5μmol/L,dNTP浓度10 mmol/L;通过在上述体系中加入甲酚红指示剂,初步建立了可视化RT-LAMP检测方法。特异性试验结果显示,该方法仅能检出PEDV,与猪德尔塔冠状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪传染性胃肠炎病毒均无交叉反应,且阳性管体系颜色由紫红色变为黄色,阴性反应管体系颜色保持紫红色,特异性较强;将重组质粒标准品pPE-ORF1-210倍倍比稀释(1.65×100拷贝/μL~1.65×108拷贝/μL)后作为模板,采用本研究建立的可视化RT-LAMP方法进行敏感性试验,结果显示,该方法对pPE-ORF1-2检测限为10拷贝/μL,比以重组质粒pPE-M-GB为模板,以引物PEGBF/PEGBR的PEDV国标RT-PCR方法的敏感性高1个数量级,敏感性较高;重复性试验结果显示,该方法对不同浓度质粒标准品的批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%,重复性较好。对53份临床样品检测结果显示,RT-LAMP和RT-PCR对PEDV的检出率分别为32.1%(17/53)和28.3%(15/53)。二者的总符合率为96.2%(51/53)。本研究建立的PEDV RT-LAMP检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便、结果可视化等优点,为PEDV的现场快速检测提供了新的技术支持。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 rt-LAMP 快速检测 可视化
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辣椒轻斑驳病毒RT-LAMP快速检测方法的建立
8
作者 邵煜尊 张万红 +6 位作者 王惠 王玉洁 苗圃 申莉莉 李莹 焦裕冰 杨金广 《中国蔬菜》 北大核心 2023年第12期42-48,共7页
辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMo V)是发生在辣椒上的一种重要病毒病。通过逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),以PMMo V外壳蛋白CP序列为靶标基因,设计F3/B3、FIP/BIP 4条引物,构建了基于RT-LAMP技术的PMMo V快速检测方... 辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMo V)是发生在辣椒上的一种重要病毒病。通过逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),以PMMo V外壳蛋白CP序列为靶标基因,设计F3/B3、FIP/BIP 4条引物,构建了基于RT-LAMP技术的PMMo V快速检测方法。结果表明,该方法在60 min内便可完成对PMMo V的特异性检测,灵敏度比传统RT-PCR技术高10倍,检测过程中与其他相关病毒无交叉反应。本试验建立的PMMo V RT-LAMP检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高,可用于田间生产中对PMMo V的快速检测。 展开更多
关键词 辣椒轻斑驳病毒 rt-LAMP检测 快速检测
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Conversion of Rapid Prototyping Models into Metallic Tools by Ceramic Moulding—an Indirect Rapid Tooling Process
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作者 Teresa P DUARTE J M FERREIRA +2 位作者 F Jorge LINO A BARBEDO Rui NETO 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第S1期218-,共1页
A process to convert models made by rapid prototypi ng techniques like SL (stereolitography) and LOM (laminated object manufacturing) or by conventional techniques (silicones, resins, wax, etc.) into metallic mould s ... A process to convert models made by rapid prototypi ng techniques like SL (stereolitography) and LOM (laminated object manufacturing) or by conventional techniques (silicones, resins, wax, etc.) into metallic mould s or tools has been developed. The main purpose of this technique is to rapidly obtain the first prototypes of parts, for plastics injection, forging or any oth er manufacturing process using the tools produced by casting a metal into a cera mic mould. Briefly, it can be said that the ceramic moulds are produced by mixing in variab le proportions, depending on the type of ceramics employed, strength and roughne ss desired, a ceramic mixture composed by alumina and/or zirconium silicates bon ded with silica coming from a liquid binder, based on ethyl silicate. A catalyst is added to the slurry in order to produce a sol-gel reaction. The liquid slur ry is poured into the box containing the mould to be reproduced. After a short p eriod of time, controlled by the amount of gelling agent, the ceramic mixture ac quires a rubber consistency. The pattern is removed from the ceramic mould, whic h is fired to stop the gelation reaction. After this stabilization the ceramic m ould is sintered at high temperatures in order to generate an inert mould wi th the desired strength in which almost all metallic alloys can be cast. The effect of ceramic materials (shape, granulometric distribution, chemical com position, etc.), processing parameters (proportion binder/ceramic/catalyst, sint ering conditions, etc.) and casting conditions (mould pre-heating temperature a nd pouring temperature) were studied in order to obtain metallic moulds or tools with tailored properties (high dimensional accuracy, low roughness and high mec hanical strength). 展开更多
关键词 Conversion of rapid Prototyping Models into Metallic Tools by Ceramic Moulding an Indirect rapid tooling Process
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SARS-COV-2 Rapid Antigen Test in Comparison with RT-PCR for Laboratory Diagnosis of COVID-19 in a Southwest State of Nigeria
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作者 Elvis Efe Isere Matthew Temitope Oluwole +6 位作者 Moses Adewale Adejugbagbe Temitope Olajumoke Omoju Oluwatosin Oni Ikeoluwapo Ajayi Nosa Eniye Omorogbe Tolulope Aderonke Fagbemi Stephen Fagbemi 《Open Journal of Epidemiology》 2022年第4期387-400,共14页
Objectives: Rapid and accurate identification of persons infected with SARS-CoV-2 which causes COVID-19 is key to managing the pandemic. The urgent need to scale up access to COVID-19 testing in Nigeria has led to the... Objectives: Rapid and accurate identification of persons infected with SARS-CoV-2 which causes COVID-19 is key to managing the pandemic. The urgent need to scale up access to COVID-19 testing in Nigeria has led to the government’s introduction of the use of COVID-19 Ag rapid diagnostic test (RDT) across various settings in the country. However, field performance evaluation of the rapid SARS-CoV-2 antigen detection test is required to be conducted periodically and compared with the gold standard real-time reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) test for diagnosis of COVID-19 cases. Design: A prospective COVID-19 screening and un-blinded verification of the performance of the STANDARD Q COVID-19 Ag test kit. Setting: The rapid SARS-CoV-2 antigen detection test, Standard<sup>TM</sup> Q COVID-19 Ag kit was compared with the RT-PCR test for detection of SARS-CoV-2 in nasopharyngeal samples for COVID-19 screening from persons and personnel attending a national youth camp orientation exercise during the second wave of the COVID-19 outbreak (January to March 2021) in Ondo state, southwest Nigeria. Participants: Three hundred fifty-one persons and personnel were screened for COVID-19 infection. Results: Of 351 respondents screened, 68 (19.4%) were positive, and 264 (75.2%) were negative for both COVID-19 Ag RDT and RT-PCR assay. The rapid SARS-CoV-2 antigen detection test’s sensitivity and specificity were 78.16% (95% CI = 68.02% - 86.31%) and 100.0% (95% CI = 98.61% - 100.0%), respectively and the diagnostic accuracy was 94.59% (95% CI: 92 - 97). Respondents that were symptomatic had a higher test sensitivity of 78.6% (49.2 - 95.3) compared to those without symptoms 78.1% (66.9 - 86.9) (p Conclusions: Our study shows evidence that Standard<sup>TM</sup> Q COVID-19 Ag kit can be an appropriate rapid antigen test that could be used to screen for positive COVID-19 tests to guide decision-making for clinical management of persons infected with COVID-19, especially for closed settings and other clinical care settings. 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 COVID-19 rapid Antigen rt-PCR Sensitivity NIGERIA
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反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)快速检测基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒
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作者 陈耀 仲欣雨 +8 位作者 吴陈雨 丁雪 黄璟 王欢莉 范忠军 孙静 陈星逸 余树培 夏文龙 《中国动物检疫》 CAS 2023年第1期121-127,共7页
为建立一种基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的快速检测方法,根据其ORF6基因保守序列设计了3对特异性引物,通过引物筛选及条件优化,建立了基因2型PRRSV的反转录-重组酶介导... 为建立一种基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的快速检测方法,根据其ORF6基因保守序列设计了3对特异性引物,通过引物筛选及条件优化,建立了基因2型PRRSV的反转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided isothermal amplification,RT-RAA)快速检测方法。结果显示:该方法在40℃恒温孵育25 min即可完成靶序列扩增;特异性强,和猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒均无交叉反应;灵敏度高,最低检出限为2×10^(0)TCID_(50)/μL,是常规RT-PCR方法的10倍;应用该方法对39份疑似PRRSV感染的临床样品进行检测,检出阳性样品25份,和实验室前期建立的荧光定量RT-PCR方法检测结果一致。以上结果说明,本研究建立的RT-RAA检测方法简便快速、特异性强、灵敏度高、临床适用性好,为PRRSV感染的快速诊断提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因2型 反转录-重组酶介导等温扩增 快速检测
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Rapid Tooling-Rapid Abrading Process Integratedwith Rapid Prototyping
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作者 Wulanmuqi Deng Jiati(State 863/CIMS Design Automation LaboratoryManufacturing System institute 720)(Beijing University of Aeronautics & AstronauticsBeijing 100083P.R.China) 《Computer Aided Drafting,Design and Manufacturing》 1999年第2期28-33,共6页
The paper is to outline a new process for manufacturing rapid graphite electrode. It detailsthe steps in Providing integration with Rapid Prototyping (RP) into rapid electrode abrading Process.The key to this combinat... The paper is to outline a new process for manufacturing rapid graphite electrode. It detailsthe steps in Providing integration with Rapid Prototyping (RP) into rapid electrode abrading Process.The key to this combination is the successful model or patted creating using the RP technology.Significantly reduced lead-time, shortened learns curve, lowered revision changes cost and eliminatedor reduced mold polishing are the consequent results. high quality Electrical Discharge Machining(EDM) electrodes are sometimes difficult to be manufactured rapidly and are very time-consumingby conventional methods, even using Computer Numerical Control (CNC) machines. Abradingprovides a simple way to create etuemely detailed and complex electrode to make molds in toolingmaking industries. Integration with the rapid development of the Rapid Prototyping & Manufacturing(RP&M) technology, the rapid electrode abrading process has been regarded as one of the majorbreakthrough in tooling making technology. 展开更多
关键词 rapid tooling Abrading Process Electrode Manufacturing rapid Prototyping
全文增补中
基于RP/RT技术的不锈钢快速模具制造工艺 被引量:10
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作者 谷诤巍 全永义 +2 位作者 张人佶 颜永年 张欣 《模具工业》 北大核心 2003年第12期50-53,共4页
用基于RP/RT技术的等离子喷涂制模技术制造不锈钢快速模具 ,与传统钢制模具相比 ,该工艺可以缩短模具开发周期60% ,成本也只有传统钢模的15%~20% ,非常适合新产品的开发和单件小批量产品的生产。介绍了该工艺的原理 ,讨论了成形的技术... 用基于RP/RT技术的等离子喷涂制模技术制造不锈钢快速模具 ,与传统钢制模具相比 ,该工艺可以缩短模具开发周期60% ,成本也只有传统钢模的15%~20% ,非常适合新产品的开发和单件小批量产品的生产。介绍了该工艺的原理 ,讨论了成形的技术关键,运用该工艺进行不锈钢快速模具试制 ,不锈钢喷涂层厚度达到5mm ,表面硬度达到34.4HRC ,抛光后表面粗糙度达到Ra=0.2μm。 展开更多
关键词 快速原型 快速模具 等离子喷涂
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RP/RT技术在迷宫型滴头快速研制中的应用 被引量:6
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作者 魏正英 王伊卿 卢秉恒 《西安理工大学学报》 CAS 2001年第3期257-260,共4页
为实现迷宫型滴头的快速研制 ,利用快速成型制造技术 ( RPM)在迷宫型滴头的参数化 CAD实体造型的基础上进行滴头原型件的制造 ,用以滴头的流量实验和参数定型 ;再应用快速制模 ( RT)技术进行滴头快速喷涂模具的制造 ,用以滴头的试制 ,... 为实现迷宫型滴头的快速研制 ,利用快速成型制造技术 ( RPM)在迷宫型滴头的参数化 CAD实体造型的基础上进行滴头原型件的制造 ,用以滴头的流量实验和参数定型 ;再应用快速制模 ( RT)技术进行滴头快速喷涂模具的制造 ,用以滴头的试制 ,使滴头可直接用于节水灌溉实际中。 展开更多
关键词 迷宫型滴头 快速喷涂模具 RP技术 rt技术
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用RT-PCR法快速检测鲤春病毒血症病毒基因 被引量:29
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作者 高隆英 史秀杰 +1 位作者 刘荭 江育林 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期452-456,共5页
用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法快速、灵敏、特异地检测鲤春病毒血症病毒(SVCV) ,根据SVC病毒糖蛋白基因序列设计的引物经过RT PCR和半嵌套PCR(semi nested PCR)可扩增出SVC病毒核酸中的 71 4bp和 60 6bp片段。与其他弹状病毒IHNV... 用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法快速、灵敏、特异地检测鲤春病毒血症病毒(SVCV) ,根据SVC病毒糖蛋白基因序列设计的引物经过RT PCR和半嵌套PCR(semi nested PCR)可扩增出SVC病毒核酸中的 71 4bp和 60 6bp片段。与其他弹状病毒IHNV、VHSV、PFRV没有交叉 ,具有特异性。灵敏度检测 ,表明不小于 1 0 0 0个病毒就可检测出阳性结果。本文还对复性温度 ,引物 ,Mg2 +,Tag酶以及反转录酶的浓度对检测结果的影响进行了探讨。 展开更多
关键词 rt-PCR法 快速检测 鲤春病毒血症 病毒基因 鱼病
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实时荧光RT-PCR检测冷冻草莓中诺如病毒 被引量:15
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作者 周阳 栾军 +6 位作者 蒋鲁岩 唐泰山 杨军 张常印 张弛 付瑞燕 祝长青 《食品安全质量检测学报》 CAS 2013年第2期515-520,共6页
目的建立冷冻草莓中的GI、GII型诺如病毒实时荧光RT-PCR检测方法,并应用于实际样品的检测。方法对草莓样品进行前处理、病毒富集、病毒RNA的提取和纯化,然后采用实时荧光RT-PCR进行检测。结果核酸提取方法能够有效地去除抑制因子,同时对... 目的建立冷冻草莓中的GI、GII型诺如病毒实时荧光RT-PCR检测方法,并应用于实际样品的检测。方法对草莓样品进行前处理、病毒富集、病毒RNA的提取和纯化,然后采用实时荧光RT-PCR进行检测。结果核酸提取方法能够有效地去除抑制因子,同时对104份送检样品进行检测,结果均为阴性。结论所建立的核酸提取与实时荧光RT-PCR结合的检测体系适合于草莓样品中诺如病毒GI、GII型的检测。 展开更多
关键词 冷冻草莓 诺如病毒 实时荧光 rt-PCR 快速检测
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鸡传染性法氏囊病病毒RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:5
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作者 孙洁 卢体康 +13 位作者 曾少灵 杨俊兴 詹爱军 林庆燕 曹琛福 陈兵 廖立珊 阮周曦 陶虹 张彩虹 刘建利 花群义 吕建强 秦智锋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第12期6-10,共5页
鸡传染性法氏囊病(IBD)是危害我国养禽业的主要疫病之一,呈世界性分布,对养鸡业造成重大危害。在国际种禽贸易中,对IBDV检测是口岸检疫的主要对象之一。为了建立标准的鸡传染性法氏囊病病毒分子检测方法,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐... 鸡传染性法氏囊病(IBD)是危害我国养禽业的主要疫病之一,呈世界性分布,对养鸡业造成重大危害。在国际种禽贸易中,对IBDV检测是口岸检疫的主要对象之一。为了建立标准的鸡传染性法氏囊病病毒分子检测方法,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的带有通用引物和酶切位点的特异性引物,通过对6株不同毒株的反复试验,优化了针对A片段VP2基因的常规反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法 (IBDV-VP2(604)-RT-PCR)和针对B片段VP1基因的RT-PCR检测方法(IBDV-VP1(642)-RT-PCR);针对A片段VP2基因设计特异性引物和探针,建立了优化IBDV特异性实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法(IBDV-VP2-rRT-PCR)。将传染性法氏囊病疫苗-法倍灵(IBDV-BLEN)疫苗株进行系列稀释,两种RT-PCR检测方法的灵敏度均为10-3,而IBDV-VP2-rRT-PCR检测方法灵敏度为10-4。所建立的三种分子生物学检测方法特异,与其他家禽病毒无任何交叉反应。通过对自2007年以来18批221份田间样品检测表明,所建立的方法准确可靠,适合对鸡传染性法氏囊病病毒进行快速灵敏检测和监测。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病 常规rt-PCR 实时荧光定量rt-PCR 快速检测
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鸭坦布苏病毒可视化RT-LAMP快速检测方法的建立与初步应用 被引量:9
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作者 吴植 夏文龙 +3 位作者 蔡树东 郭长明 袁维峰 王永娟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第11期3334-3339,共6页
为实现鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus,DTMUV)的快速检测,本研究根据GenBank中公布的DTMUV E蛋白基因的高度保守序列设计了1套引物,通过优化反应体系各组分的浓度、反应时间和温度,建立了一种灵敏、便捷的RT-LAMP扩增方法。结果显示,... 为实现鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus,DTMUV)的快速检测,本研究根据GenBank中公布的DTMUV E蛋白基因的高度保守序列设计了1套引物,通过优化反应体系各组分的浓度、反应时间和温度,建立了一种灵敏、便捷的RT-LAMP扩增方法。结果显示,在最佳条件下甜菜碱对反应体系影响不明显;该方法灵敏度是常规RT-PCR的100倍;只能特异性扩增坦布苏病毒,对于其他常见的禽源病毒无特异性扩增;检测结果可直接通过肉眼观察来判断;对临床74份疑似病料,可检出65份。本试验建立的方法灵敏性高、特异性强,可用于鸭坦布苏病毒病的临床诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒(DTMUV) 环介导等温扩增 可视化 快速检测
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应用RT-PCR技术快速检测鉴定猪瘟病毒 被引量:14
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作者 李春阳 单松华 华修国 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2003年第1期34-39,共6页
根据所有已报道的猪瘟病毒株(HCV)和牛病毒性腹泻病毒株(BVDV)的序列设计了3条引物Pa、Pb、Pc。应用RT-PCR技术,引物对Pa/Pb从猪瘟HCLV株、猪瘟Thiveral株、3株猪瘟野毒株都扩增出了预期185bp的片断,Pa/Pc从BVDVOregonC24V株中也扩增出... 根据所有已报道的猪瘟病毒株(HCV)和牛病毒性腹泻病毒株(BVDV)的序列设计了3条引物Pa、Pb、Pc。应用RT-PCR技术,引物对Pa/Pb从猪瘟HCLV株、猪瘟Thiveral株、3株猪瘟野毒株都扩增出了预期185bp的片断,Pa/Pc从BVDVOregonC24V株中也扩增出了240bp的片断,而Pa/Pb与牛睾丸原代细胞、PK-15细胞、BVDVOregonC24V株均无反应,Pa/Pc也不与所试验的5株猪瘟毒株反应。采用多重PCR可以从同时含有HCV和BVDV核酸的样品中扩增出各自的特异性条带。针对猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的特异性插入序列,设计了引物Pr、Pra、Prb,可以从HCLV细胞毒或用HCLV人工感染的兔脾组织毒中扩增出预期200bp的片断,而Pr、Pra、Prb与猪瘟Thiveral株和3株猪瘟野毒株均不反应。通过含毒量梯度试验,得出了RT-PCR可检测猪瘟病毒量的下限为200RID或200TCID50。 展开更多
关键词 应用 rt-PCR技术 猪瘟病毒 牛病毒性腹泻病毒
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辣椒黄脉病毒RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量:10
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作者 汤亚飞 何自福 +1 位作者 佘小漫 蓝国兵 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期100-104,共5页
辣椒黄脉病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)是影响世界辣椒生产的重要病毒,也是广东省辣椒上主要病原病毒之一。本研究根据PeVYV基因组P3蛋白基因序列设计了2对引物,建立了该病毒的反转录-环介导等温扩增(reverse transcription lo... 辣椒黄脉病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)是影响世界辣椒生产的重要病毒,也是广东省辣椒上主要病原病毒之一。本研究根据PeVYV基因组P3蛋白基因序列设计了2对引物,建立了该病毒的反转录-环介导等温扩增(reverse transcription loop mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法。该方法70min便可完成对PeVYV的检测,无需特殊的设备,灵敏度比普通RT-PCR高10倍,对田间疑似病样的检出结果与RT-PCR的结果一致。本研究建立的PeVYV RT-LAMP检测方法具有快速、灵敏和操作简便等优点,适合于对PeVYV病样快速、准确检测与鉴定。 展开更多
关键词 辣椒黄脉病毒 rt-LAMP 快速检测
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