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Sprayformed Hot Work Steels for Rapid Tooling 被引量:5
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作者 Yunfeng Yang Simo-Pekka Hannula 《Journal of Materials Science & Technology》 SCIE EI CAS CSCD 2003年第z1期169-172,共4页
The present work compares microstructures of hot work steels made by different processes, that is, by sprayforming,by casting, and a commercially supplied H13 steel. Material benefits are recognized by sprayforming ho... The present work compares microstructures of hot work steels made by different processes, that is, by sprayforming,by casting, and a commercially supplied H13 steel. Material benefits are recognized by sprayforming hot working tools such as die inserts for hot forging. The sprayformed hot work steels present a fine and homogeneous microstructure,which implies that, at a similar toughness level, the sprayformed steel can be higher alloyed, so that the thermal fatigue and wear resistance at elevated temperatures can be improved. A series of steels with higher vanadium content than commercial hot work steels are developed. There are no segregation and carbide network problems usually encountered in conventional ingot/forging processed high-vanadium steels. Microstructure and hardness of the new sprayformed steels are studied under different heat treatment conditions. It is justified that these sprayformed steels can be directly used for tooling without high temperature hardening. Sprayforming the tool steels onto a precision ceramic mould is demonstrated to extend the technoeconomical benefits, so that a net shape production tool can be rapidly made.Features of the rapid tooling process are also discussed. 展开更多
关键词 rapid tooling Sprayforming HOT working steel DIE INSErt
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Rapid Tooling-Rapid Abrading Process Integratedwith Rapid Prototyping
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作者 Wulanmuqi Deng Jiati(State 863/CIMS Design Automation LaboratoryManufacturing System institute 720)(Beijing University of Aeronautics & AstronauticsBeijing 100083P.R.China) 《Computer Aided Drafting,Design and Manufacturing》 1999年第2期28-33,共6页
The paper is to outline a new process for manufacturing rapid graphite electrode. It detailsthe steps in Providing integration with Rapid Prototyping (RP) into rapid electrode abrading Process.The key to this combinat... The paper is to outline a new process for manufacturing rapid graphite electrode. It detailsthe steps in Providing integration with Rapid Prototyping (RP) into rapid electrode abrading Process.The key to this combination is the successful model or patted creating using the RP technology.Significantly reduced lead-time, shortened learns curve, lowered revision changes cost and eliminatedor reduced mold polishing are the consequent results. high quality Electrical Discharge Machining(EDM) electrodes are sometimes difficult to be manufactured rapidly and are very time-consumingby conventional methods, even using Computer Numerical Control (CNC) machines. Abradingprovides a simple way to create etuemely detailed and complex electrode to make molds in toolingmaking industries. Integration with the rapid development of the Rapid Prototyping & Manufacturing(RP&M) technology, the rapid electrode abrading process has been regarded as one of the majorbreakthrough in tooling making technology. 展开更多
关键词 rapid tooling Abrading Process Electrode Manufacturing rapid Prototyping
全文增补中
基于RT-RAPID和CRISPR-Cas12a的诺如病毒GⅡ.6亚型核酸检测方法的建立
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作者 冉红志 樊成 +4 位作者 王雪飞 刘静 康婕 钱卫东 王婷 《动物医学进展》 北大核心 2023年第9期44-50,共7页
为建立一种特异性强、灵敏度高且简单方便的诺如病毒GⅡ.6核酸快速检测方法,下载诺如病毒GⅡ.6基因组序列,用Mega7.0对基因组进行比对分析获得高度保守序列;基于保守序列设计诺如病毒GⅡ.6的反转录重组酶和聚合酶等温检测(RT-RAPID)技... 为建立一种特异性强、灵敏度高且简单方便的诺如病毒GⅡ.6核酸快速检测方法,下载诺如病毒GⅡ.6基因组序列,用Mega7.0对基因组进行比对分析获得高度保守序列;基于保守序列设计诺如病毒GⅡ.6的反转录重组酶和聚合酶等温检测(RT-RAPID)技术扩增引物、荧光探针、crRNA和报告分子;优化RT-RAPID的反应引物、反应温度和反应时间及Cas12a检测用的crRNA,并分析RT-RAPID-Cas12a方法的特异性和灵敏度。基于RT-RAPID荧光法和RT-RAPID-Cas12a荧光法的诺如病毒GⅡ.6亚型核酸快速检测方法能在1 h内完成检测并得出结果,灵敏度分别为10 copies/μL和0.5 copies/μL,且两个方法均与诺如病毒GⅡ.17型、鼻病毒、偏肺病毒和博卡病毒无交叉反应。2个检测方法与RT-qPCR阳性样本一致率均为90%,阴性样本一致率均为100%。论文建立的基于RT-RAPID和Cas12a的诺如病毒GⅡ.6核酸快速检测方法均可高效快速地检测出诺如病毒GⅡ.6,具有灵敏度高、特异性强、操作便捷且快速等特点。 展开更多
关键词 诺如病毒GⅡ.6亚型 反转录重组酶聚合酶扩增 规律间隔成簇短回文重复序列的/相关蛋白12a 核酸检测
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甘薯褪绿矮化病毒西非株系RT-RPA-LFD检测方法的建立与应用
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作者 王永江 乔奇 +4 位作者 王爽 赵付枚 田雨婷 张德胜 张振臣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期2781-2790,共10页
【目的】利用逆转录酶重组酶聚合酶扩增(reverse transcriptase recombinase polymerase amplification,RT-RPA)结合侧向流层析(lateral flow dipstick,LFD)试纸条技术,建立甘薯褪绿矮化病毒(sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV... 【目的】利用逆转录酶重组酶聚合酶扩增(reverse transcriptase recombinase polymerase amplification,RT-RPA)结合侧向流层析(lateral flow dipstick,LFD)试纸条技术,建立甘薯褪绿矮化病毒(sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)西非株系(west African strain,WA)的RT-RPA-LFD检测方法。【方法】根据SPCSV-WA外壳蛋白基因和热激蛋白基因的保守序列设计并筛选扩增效果好、特异性强的引物和探针。然后对引物和探针的浓度、扩增体系、温度、反应时间等条件进行优化,建立SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法。利用该方法对SPCSV-EA、甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)、甘薯潜隐病毒(sweet potato latent virus,SPLV)、甘薯G病毒(sweet potato virus G,SPVG)等常见的甘薯病毒进行检测,验证方法的特异性;将感染SPCSV-WA甘薯叶片样品总RNA进行10倍梯度稀释,分别采用RT-PCR和RT-RPA-LFD进行检测,比较RT-PCR和RT-RPA-LFD方法的灵敏度;对采自田间的甘薯样品和试管苗样品进行RT-RPA、RT-RPA-LFD和RT-PCR检测,验证该方法的实用性。【结果】建立了SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法,最适引物为CSV357F/R,探针CSV-CP-Probe(47 bp),引物和探针工作浓度分别为0.2和0.06μmol·L^(-1),温度为42℃,时间5 min。该方法可对SPCSV-WA进行特异性检测,与甘薯上其他常见病毒无交叉反应。RT-RPA-LFD最低可检测到总RNA稀释至10^(-4)溶液,而RT-PCR最低检测到总RNA稀释至10^(-3)溶液,RT-RPA-LFD灵敏度是RT-PCR的10倍。田间采集的22份甘薯样品经RT-PCR、RT-RPA和RT-RPA-LFD检测,均检出11份阳性样品,3种方法检测结果一致。28份试管苗样品的检测结果表明,RT-PCR和RT-RPA-LFD检测结果一致,均检出5份阳性样品。【结论】建立了SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法,该方法具有快速、简便、特异、灵敏、可视的特点,既可用于甘薯脱毒试管苗样品的病毒检测,也适用于基层单位田间甘薯病毒样品的现场快速检测。 展开更多
关键词 甘薯褪绿矮化病毒西非株系 逆转录酶重组酶聚合酶扩增 侧向流层析 快速检测 甘薯
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草莓白化伴随病毒RT-LAMP检测方法的建立
5
作者 王涌 曾祥国 +4 位作者 肖桂林 温昕 周鑫鑫 邓江丽 韩永超 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期237-245,253,共10页
草莓白化伴随病毒(strawberry pallidosis-associated virus,SPaV)能引起草莓白化病,与其他病毒复合侵染后会加重症状。本研究建立了SPaV的反转录环介导等温扩增方法(reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification,RT-... 草莓白化伴随病毒(strawberry pallidosis-associated virus,SPaV)能引起草莓白化病,与其他病毒复合侵染后会加重症状。本研究建立了SPaV的反转录环介导等温扩增方法(reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP),对反应体系的各条件进行评估优化后,检测了RT-LAMP的特异性和灵敏度,且对田间样品进行了测试。结果表明,优化后的反应体系包含2.5μL 10×Isothermal Amplification Buffer、6 mmol/L Mg^(2+)、1 mmol/L dNTPs、1μmol/L SPaV-FIP和SPaV-BIP,0.1μmol/L SPaV-F3和SPaV-B3,0.3μmol/L SPaV-LB,0.4 mol/L Betaine,0.256 U/μL WarmStart Bst 2.0 DNA Polymerase,0.12 U/μL WarmStart RTx Reverse Transcriptase,1μL RNA,反应条件为61℃恒温孵育40 min。采用优化后的反应体系,在特异性检测中,只有携带了病毒SPaV的样品才能发生阳性扩增。灵敏度测试中,RT-LAMP比RT-PCR灵敏度高10倍。田间应用中,RT-LAMP和RT-PCR检测结果一致。本研究建立的SPaV RT-LAMP检测方法操作简便、快速、特异,可供实验室及生产实践中应用,助力脱毒种苗的鉴定和田间病毒病调查。 展开更多
关键词 草莓白化伴随病毒 反转录环介导等温扩增 可视化 快速检测
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韦塞尔斯布朗病病毒RT-PCR快速检测方法的建立及应用
6
作者 王奕婷 张风荣 +5 位作者 冯之航 郁蕾 薛俊欣 陈翔 王艳 赵光伟 《中国动物检疫》 CAS 2024年第10期96-101,共6页
为实现对韦塞尔斯布朗病病毒(Wesselsbron virus,WSLV)的快速检测,根据WSLV NS5基因保守序列,设计特异性扩增引物和探针,建立WSLV的TaqMan荧光定量RT-PCR和RT-PCR检测方法,并验证方法的敏感性、特异性及临床可行性。结果显示:所建立的... 为实现对韦塞尔斯布朗病病毒(Wesselsbron virus,WSLV)的快速检测,根据WSLV NS5基因保守序列,设计特异性扩增引物和探针,建立WSLV的TaqMan荧光定量RT-PCR和RT-PCR检测方法,并验证方法的敏感性、特异性及临床可行性。结果显示:所建立的两种方法的核酸检测下限分别为10、100 copies/μL,对日本脑炎病毒、西尼罗病毒和坦布苏病毒核酸均无交叉反应;分别利用建立的两种检测方法对100份入境马匹样品进行检测,未检出WSLV阳性,与南非参考实验室提供的双重荧光RT-PCR检测方法结果一致。结果说明,所建的两种方法敏感性高、特异性强,可用于临床样本检测,为韦塞尔斯布朗病的出入境检验检疫、流行病学调查及防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 韦塞尔斯布朗病病毒 荧光定量rt-PCR rt-PCR 快速检测
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SARS-COV-2 Rapid Antigen Test in Comparison with RT-PCR for Laboratory Diagnosis of COVID-19 in a Southwest State of Nigeria
7
作者 Elvis Efe Isere Matthew Temitope Oluwole +6 位作者 Moses Adewale Adejugbagbe Temitope Olajumoke Omoju Oluwatosin Oni Ikeoluwapo Ajayi Nosa Eniye Omorogbe Tolulope Aderonke Fagbemi Stephen Fagbemi 《Open Journal of Epidemiology》 2022年第4期387-400,共14页
Objectives: Rapid and accurate identification of persons infected with SARS-CoV-2 which causes COVID-19 is key to managing the pandemic. The urgent need to scale up access to COVID-19 testing in Nigeria has led to the... Objectives: Rapid and accurate identification of persons infected with SARS-CoV-2 which causes COVID-19 is key to managing the pandemic. The urgent need to scale up access to COVID-19 testing in Nigeria has led to the government’s introduction of the use of COVID-19 Ag rapid diagnostic test (RDT) across various settings in the country. However, field performance evaluation of the rapid SARS-CoV-2 antigen detection test is required to be conducted periodically and compared with the gold standard real-time reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) test for diagnosis of COVID-19 cases. Design: A prospective COVID-19 screening and un-blinded verification of the performance of the STANDARD Q COVID-19 Ag test kit. Setting: The rapid SARS-CoV-2 antigen detection test, Standard<sup>TM</sup> Q COVID-19 Ag kit was compared with the RT-PCR test for detection of SARS-CoV-2 in nasopharyngeal samples for COVID-19 screening from persons and personnel attending a national youth camp orientation exercise during the second wave of the COVID-19 outbreak (January to March 2021) in Ondo state, southwest Nigeria. Participants: Three hundred fifty-one persons and personnel were screened for COVID-19 infection. Results: Of 351 respondents screened, 68 (19.4%) were positive, and 264 (75.2%) were negative for both COVID-19 Ag RDT and RT-PCR assay. The rapid SARS-CoV-2 antigen detection test’s sensitivity and specificity were 78.16% (95% CI = 68.02% - 86.31%) and 100.0% (95% CI = 98.61% - 100.0%), respectively and the diagnostic accuracy was 94.59% (95% CI: 92 - 97). Respondents that were symptomatic had a higher test sensitivity of 78.6% (49.2 - 95.3) compared to those without symptoms 78.1% (66.9 - 86.9) (p Conclusions: Our study shows evidence that Standard<sup>TM</sup> Q COVID-19 Ag kit can be an appropriate rapid antigen test that could be used to screen for positive COVID-19 tests to guide decision-making for clinical management of persons infected with COVID-19, especially for closed settings and other clinical care settings. 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 COVID-19 rapid Antigen rt-PCR Sensitivity NIGERIA
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H1亚型禽流感病毒RT-RPA-LFD快速检测方法的建立及应用
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作者 曾婷婷 李孟 +9 位作者 谢芝勋 李丹 谢丽基 罗思思 张民秀 王盛 谢志勤 范晴 阮志华 粟永春 《江西农业学报》 CAS 2024年第3期61-66,共6页
以H1亚型AIV的HA基因为研究对象,采用重组聚合酶核酸等温扩增技术(RPA),通过RT-PCR方法优选出1套引物,进而优化体系的反应温度、最佳探针及引物浓度,使用优化后的最佳反应体系进行敏感性及特异性试验,并探索该方法能达到的最短反应时间... 以H1亚型AIV的HA基因为研究对象,采用重组聚合酶核酸等温扩增技术(RPA),通过RT-PCR方法优选出1套引物,进而优化体系的反应温度、最佳探针及引物浓度,使用优化后的最佳反应体系进行敏感性及特异性试验,并探索该方法能达到的最短反应时间,利用侧向流动免疫(LFD)试纸条观测反应后的结果,最终建立检测H1亚型AIV的RT-RPA-LFD快速检测方法。结果表明:建立的RT-RPA-LFD快速检测方法在探针工作浓度为0.14 mmol/L,37℃条件下反应20 min,可最低检测到1.5×10^(2)copies/反应的H1亚型AIV RNA,其他常见家禽病原体未见阳性反应。该方法与RT-PCR及鸡胚分离鉴定测序结果完全一致,可满足H1亚型AIV临床快速鉴别诊断的需求,为基层兽医现场快速检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 H1亚型AIV 等温扩增技术 快速检测 rt-RPA-LFD
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The Principle of Square Hole Machining and It's Tooling Structure Design
9
作者 Jinxia NIU 《International Journal of Technology Management》 2015年第2期7-8,共2页
In order to meet the rapid needs of processing square hole in mechanical equipment, the paper expounds the square hole processing method: planetary wheel method, and analyze the principle of tooling structure and pro... In order to meet the rapid needs of processing square hole in mechanical equipment, the paper expounds the square hole processing method: planetary wheel method, and analyze the principle of tooling structure and process with computer graphics parameters design. The results that, as long as the appropriate parameters, using the above method not only can punch the square hole, can also be processed triangle, the five angle and hexagonal regular polygon holes. The square hole processing method can provide theoretical basis and engineering reliable reference for related engineering and technical personnel. 展开更多
关键词 Abstract: In order to meet the rapid needs of processing square hole in mechanical equipment the paper expounds the square hole processing method: planetary wheel method and analyze the principle of tooling structure and process with computer graphics parameters design. The results that as long as the appropriate parameters using the above method not only can punch the square hole can also be processed triangle the five angle and hexagonal regular polygon holes. The square hole processing method can provide theoretical basis and engineering reliable reference for related engineering and technical personnel. Keywords: Square hole processing Planet wheel Lelo triangle Square hole drilling
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基于RP/RT技术的不锈钢快速模具制造工艺 被引量:10
10
作者 谷诤巍 全永义 +2 位作者 张人佶 颜永年 张欣 《模具工业》 北大核心 2003年第12期50-53,共4页
用基于RP/RT技术的等离子喷涂制模技术制造不锈钢快速模具 ,与传统钢制模具相比 ,该工艺可以缩短模具开发周期60% ,成本也只有传统钢模的15%~20% ,非常适合新产品的开发和单件小批量产品的生产。介绍了该工艺的原理 ,讨论了成形的技术... 用基于RP/RT技术的等离子喷涂制模技术制造不锈钢快速模具 ,与传统钢制模具相比 ,该工艺可以缩短模具开发周期60% ,成本也只有传统钢模的15%~20% ,非常适合新产品的开发和单件小批量产品的生产。介绍了该工艺的原理 ,讨论了成形的技术关键,运用该工艺进行不锈钢快速模具试制 ,不锈钢喷涂层厚度达到5mm ,表面硬度达到34.4HRC ,抛光后表面粗糙度达到Ra=0.2μm。 展开更多
关键词 快速原型 快速模具 等离子喷涂
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RP/RT技术在迷宫型滴头快速研制中的应用 被引量:6
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作者 魏正英 王伊卿 卢秉恒 《西安理工大学学报》 CAS 2001年第3期257-260,共4页
为实现迷宫型滴头的快速研制 ,利用快速成型制造技术 ( RPM)在迷宫型滴头的参数化 CAD实体造型的基础上进行滴头原型件的制造 ,用以滴头的流量实验和参数定型 ;再应用快速制模 ( RT)技术进行滴头快速喷涂模具的制造 ,用以滴头的试制 ,... 为实现迷宫型滴头的快速研制 ,利用快速成型制造技术 ( RPM)在迷宫型滴头的参数化 CAD实体造型的基础上进行滴头原型件的制造 ,用以滴头的流量实验和参数定型 ;再应用快速制模 ( RT)技术进行滴头快速喷涂模具的制造 ,用以滴头的试制 ,使滴头可直接用于节水灌溉实际中。 展开更多
关键词 迷宫型滴头 快速喷涂模具 RP技术 rt技术
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用RT-PCR法快速检测鲤春病毒血症病毒基因 被引量:30
12
作者 高隆英 史秀杰 +1 位作者 刘荭 江育林 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期452-456,共5页
用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法快速、灵敏、特异地检测鲤春病毒血症病毒(SVCV) ,根据SVC病毒糖蛋白基因序列设计的引物经过RT PCR和半嵌套PCR(semi nested PCR)可扩增出SVC病毒核酸中的 71 4bp和 60 6bp片段。与其他弹状病毒IHNV... 用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法快速、灵敏、特异地检测鲤春病毒血症病毒(SVCV) ,根据SVC病毒糖蛋白基因序列设计的引物经过RT PCR和半嵌套PCR(semi nested PCR)可扩增出SVC病毒核酸中的 71 4bp和 60 6bp片段。与其他弹状病毒IHNV、VHSV、PFRV没有交叉 ,具有特异性。灵敏度检测 ,表明不小于 1 0 0 0个病毒就可检测出阳性结果。本文还对复性温度 ,引物 ,Mg2 +,Tag酶以及反转录酶的浓度对检测结果的影响进行了探讨。 展开更多
关键词 rt-PCR法 快速检测 鲤春病毒血症 病毒基因 鱼病
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实时荧光RT-PCR检测冷冻草莓中诺如病毒 被引量:15
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作者 周阳 栾军 +6 位作者 蒋鲁岩 唐泰山 杨军 张常印 张弛 付瑞燕 祝长青 《食品安全质量检测学报》 CAS 2013年第2期515-520,共6页
目的建立冷冻草莓中的GI、GII型诺如病毒实时荧光RT-PCR检测方法,并应用于实际样品的检测。方法对草莓样品进行前处理、病毒富集、病毒RNA的提取和纯化,然后采用实时荧光RT-PCR进行检测。结果核酸提取方法能够有效地去除抑制因子,同时对... 目的建立冷冻草莓中的GI、GII型诺如病毒实时荧光RT-PCR检测方法,并应用于实际样品的检测。方法对草莓样品进行前处理、病毒富集、病毒RNA的提取和纯化,然后采用实时荧光RT-PCR进行检测。结果核酸提取方法能够有效地去除抑制因子,同时对104份送检样品进行检测,结果均为阴性。结论所建立的核酸提取与实时荧光RT-PCR结合的检测体系适合于草莓样品中诺如病毒GI、GII型的检测。 展开更多
关键词 冷冻草莓 诺如病毒 实时荧光 rt-PCR 快速检测
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鸡传染性法氏囊病病毒RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:5
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作者 孙洁 卢体康 +13 位作者 曾少灵 杨俊兴 詹爱军 林庆燕 曹琛福 陈兵 廖立珊 阮周曦 陶虹 张彩虹 刘建利 花群义 吕建强 秦智锋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第12期6-10,共5页
鸡传染性法氏囊病(IBD)是危害我国养禽业的主要疫病之一,呈世界性分布,对养鸡业造成重大危害。在国际种禽贸易中,对IBDV检测是口岸检疫的主要对象之一。为了建立标准的鸡传染性法氏囊病病毒分子检测方法,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐... 鸡传染性法氏囊病(IBD)是危害我国养禽业的主要疫病之一,呈世界性分布,对养鸡业造成重大危害。在国际种禽贸易中,对IBDV检测是口岸检疫的主要对象之一。为了建立标准的鸡传染性法氏囊病病毒分子检测方法,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的带有通用引物和酶切位点的特异性引物,通过对6株不同毒株的反复试验,优化了针对A片段VP2基因的常规反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法 (IBDV-VP2(604)-RT-PCR)和针对B片段VP1基因的RT-PCR检测方法(IBDV-VP1(642)-RT-PCR);针对A片段VP2基因设计特异性引物和探针,建立了优化IBDV特异性实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法(IBDV-VP2-rRT-PCR)。将传染性法氏囊病疫苗-法倍灵(IBDV-BLEN)疫苗株进行系列稀释,两种RT-PCR检测方法的灵敏度均为10-3,而IBDV-VP2-rRT-PCR检测方法灵敏度为10-4。所建立的三种分子生物学检测方法特异,与其他家禽病毒无任何交叉反应。通过对自2007年以来18批221份田间样品检测表明,所建立的方法准确可靠,适合对鸡传染性法氏囊病病毒进行快速灵敏检测和监测。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病 常规rt-PCR 实时荧光定量rt-PCR 快速检测
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鸭坦布苏病毒可视化RT-LAMP快速检测方法的建立与初步应用 被引量:9
15
作者 吴植 夏文龙 +3 位作者 蔡树东 郭长明 袁维峰 王永娟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第11期3334-3339,共6页
为实现鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus,DTMUV)的快速检测,本研究根据GenBank中公布的DTMUV E蛋白基因的高度保守序列设计了1套引物,通过优化反应体系各组分的浓度、反应时间和温度,建立了一种灵敏、便捷的RT-LAMP扩增方法。结果显示,... 为实现鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus,DTMUV)的快速检测,本研究根据GenBank中公布的DTMUV E蛋白基因的高度保守序列设计了1套引物,通过优化反应体系各组分的浓度、反应时间和温度,建立了一种灵敏、便捷的RT-LAMP扩增方法。结果显示,在最佳条件下甜菜碱对反应体系影响不明显;该方法灵敏度是常规RT-PCR的100倍;只能特异性扩增坦布苏病毒,对于其他常见的禽源病毒无特异性扩增;检测结果可直接通过肉眼观察来判断;对临床74份疑似病料,可检出65份。本试验建立的方法灵敏性高、特异性强,可用于鸭坦布苏病毒病的临床诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒(DTMUV) 环介导等温扩增 可视化 快速检测
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应用RT-PCR技术快速检测鉴定猪瘟病毒 被引量:14
16
作者 李春阳 单松华 华修国 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2003年第1期34-39,共6页
根据所有已报道的猪瘟病毒株(HCV)和牛病毒性腹泻病毒株(BVDV)的序列设计了3条引物Pa、Pb、Pc。应用RT-PCR技术,引物对Pa/Pb从猪瘟HCLV株、猪瘟Thiveral株、3株猪瘟野毒株都扩增出了预期185bp的片断,Pa/Pc从BVDVOregonC24V株中也扩增出... 根据所有已报道的猪瘟病毒株(HCV)和牛病毒性腹泻病毒株(BVDV)的序列设计了3条引物Pa、Pb、Pc。应用RT-PCR技术,引物对Pa/Pb从猪瘟HCLV株、猪瘟Thiveral株、3株猪瘟野毒株都扩增出了预期185bp的片断,Pa/Pc从BVDVOregonC24V株中也扩增出了240bp的片断,而Pa/Pb与牛睾丸原代细胞、PK-15细胞、BVDVOregonC24V株均无反应,Pa/Pc也不与所试验的5株猪瘟毒株反应。采用多重PCR可以从同时含有HCV和BVDV核酸的样品中扩增出各自的特异性条带。针对猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的特异性插入序列,设计了引物Pr、Pra、Prb,可以从HCLV细胞毒或用HCLV人工感染的兔脾组织毒中扩增出预期200bp的片断,而Pr、Pra、Prb与猪瘟Thiveral株和3株猪瘟野毒株均不反应。通过含毒量梯度试验,得出了RT-PCR可检测猪瘟病毒量的下限为200RID或200TCID50。 展开更多
关键词 应用 rt-PCR技术 猪瘟病毒 牛病毒性腹泻病毒
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辣椒黄脉病毒RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量:10
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作者 汤亚飞 何自福 +1 位作者 佘小漫 蓝国兵 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期100-104,共5页
辣椒黄脉病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)是影响世界辣椒生产的重要病毒,也是广东省辣椒上主要病原病毒之一。本研究根据PeVYV基因组P3蛋白基因序列设计了2对引物,建立了该病毒的反转录-环介导等温扩增(reverse transcription lo... 辣椒黄脉病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)是影响世界辣椒生产的重要病毒,也是广东省辣椒上主要病原病毒之一。本研究根据PeVYV基因组P3蛋白基因序列设计了2对引物,建立了该病毒的反转录-环介导等温扩增(reverse transcription loop mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法。该方法70min便可完成对PeVYV的检测,无需特殊的设备,灵敏度比普通RT-PCR高10倍,对田间疑似病样的检出结果与RT-PCR的结果一致。本研究建立的PeVYV RT-LAMP检测方法具有快速、灵敏和操作简便等优点,适合于对PeVYV病样快速、准确检测与鉴定。 展开更多
关键词 辣椒黄脉病毒 rt-LAMP 快速检测
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RT-PCR快速检测腮腺炎病毒 被引量:9
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作者 严菊英 卢亦愚 姚亚萍 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期347-349,共3页
目的 建立腮腺炎病毒的核酸快速诊断技术。方法 在腮腺炎病毒核蛋白基因 (NP)的保守区域设计一对半引物 ,采用逆转录聚合酶链 (RT -PCR)和半巢式PCR方法扩增腮腺炎病毒特异性核酸片段。结果 该方法能特异性地扩增腮腺炎病毒 3 5 7bp... 目的 建立腮腺炎病毒的核酸快速诊断技术。方法 在腮腺炎病毒核蛋白基因 (NP)的保守区域设计一对半引物 ,采用逆转录聚合酶链 (RT -PCR)和半巢式PCR方法扩增腮腺炎病毒特异性核酸片段。结果 该方法能特异性地扩增腮腺炎病毒 3 5 7bp和 2 3 2bp的核酸片段 ,而对麻疹、风疹和流感病毒无交叉反应。检测腮腺炎病毒的灵敏度 ,1次PCR可检测出 10CCID50 ,2次PCR反应可达 0 1CCID50 。采用该方法从流行性腮腺炎患者含漱液标本中能直接检出腮腺炎病毒核酸条带。结论 该方法能特异、敏感地检测临床标本中腮腺炎病毒 。 展开更多
关键词 rt-PCR 腮腺炎病毒 临床标本 快速诊断 流行性腮腺炎
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荧光定量RT-PCR和RT-LAMP检测BVDV方法的建立及应用比较 被引量:6
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作者 段进刚 樊新丽 +5 位作者 葛婷 卞赛赛 高窦 代婧 阿热阿依.海依拉提 雷程红 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期170-174,179,共6页
为建立一种快速、灵敏诊断牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的方法,试验采用RT-LAMP和荧光定量RT-PCR两种检测方法,与通用RT-PCR方法在特异性、灵敏性、样品检出率、试验设计复杂程度、扩增反应效率、使用仪器简单... 为建立一种快速、灵敏诊断牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的方法,试验采用RT-LAMP和荧光定量RT-PCR两种检测方法,与通用RT-PCR方法在特异性、灵敏性、样品检出率、试验设计复杂程度、扩增反应效率、使用仪器简单程度和检测成本高低七个方面对BVDV进行了综合性比较分析。结果表明:试验建立的RT-LAMP方法与荧光定量RT-PCR、通用RTPCR方法相比具有特异性强、灵敏度高、样品检出率和扩增反应效率高、操作简便快速、低成本等特点。说明RT-LAMP方法对快速、灵敏诊断牛病毒性腹泻病、防止疫情的扩散具有重要意义。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral DIARRHEA virus BVDV) 牛病毒性腹泻病 荧光定量rt-PCR rt-LAMP 通用rt-PCR 快速检测
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荧光定量RT-PCR快速检测B型流感病毒的研究 被引量:8
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作者 何建凡 张然 +2 位作者 吴春利 程小雯 吕星 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2005年第8期981-983,共3页
目的:利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测B型流感病毒的方法。方法:根据B型流感病毒HA基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特... 目的:利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测B型流感病毒的方法。方法:根据B型流感病毒HA基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与普通RT-PCR法进行比较。结果:B型流感病毒检测反应的灵敏度为5.0×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.998,扩增效率为107.8%,5种非B型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法具有很好的稳定性、重现性和特异性。结论:本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测B型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。 展开更多
关键词 B型流感病毒 荧光定量rt-PCR 快速检测
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