胶体金免疫层析试纸条在生物毒素检测领域的研究进展

胶体金免疫层析试纸条是一种常用的检测方法,广泛应用于疾病诊断、生物毒素检测等领域。该技术基于胶体金标记的特异性抗原(抗体)与待检样品中的目标分子相互作用,在试纸条上形成可见的测试线或信号变化。其流程包括样品预处理、标记抗体制备、试纸条组装步骤。胶体金免疫层析试纸条可以用于快速检测食品中的毒素残留、环境中的有害物质以及临床诊断中的相关指标。该技术具有无创、快速、灵敏和准确的特点,在临床应急检测和大规模筛查中能快速获得结果。文章总结了胶体金免疫层析试纸条技术及其在生物毒素检测中的研究进展,并分析了当前胶体金免疫层析试纸条技术的优缺点,展望了该技术在生物毒素检测领域的未来发展方向。

胶体金免疫层析法快速检测山药中的咪鲜胺

目的建立胶体金免疫层析法快速检测咪山药基质中的鲜胺残留量的方法。方法优化前处理过程中提取剂的pH和用量,将胶体金免疫层析快速检测方法应用于山药基质,验证方法的检出限、特异性、假阴性率和假阳性率,并通过液相色谱-串联质谱法确认方法的准确性。结果胶体金免疫层析法快速检测山药中咪鲜胺的检出限为0.3 mg/kg,假阳性率为2%,假阴性率为0;与咪鲜胺-脱氨基咪唑、咪鲜胺锰盐和咪鲜胺-脱咪唑甲酰胺基的交叉反应率分别为200%、100%、100%,可同时检测咪鲜胺及含有2,4,6-三氯苯酚部分的代谢物,实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法的符合率为88.2%。结论本方法操作简便,检测速度快,准确性高,可应用于基层行政、农产品交易市场或餐饮配送公司快速检测实验室,从源头上保障食品安全。

农产品中赭曲霉毒素A免疫层析试纸条快速检测技术研究

基于胶体金免疫层析原理建立了一种快速检测赭曲霉毒素A(ochrotaxin A,OTA)的胶体金试纸条的研制方法,包括胶体金的制备、金标记探针的制备、试纸条各条件参数的测试和优化等。试纸条检测OTA的肉眼可视检测限为0.25ng/mL,检测时间为10min,试纸条能特异性识别OTA而不与赭曲霉毒素B及其他真菌毒素发生交叉反应,使用简单、方便、成本低,重复性好,保质期长,尤其适用于农产品中OTA的现场快速筛查。

食品中镉离子胶体金免疫层析快速检测方法的建立及应用

目的:建立更加灵敏、特异的食品镉离子胶体金免疫层析快速检测方法。方法:用1-(4-异硫氰苄基)乙烯基二胺-N,N,N’,N’-四乙酸(1-(4-isothiocyanobenzyl)ethylenediamine-N,N,N’,N’-tetraacetic acid,iEDTA)鳌合镉离子合成Cd^(2+)-iEDTA半抗原,异硫氰酯法制备免疫原Cd^(2+)-iEDTA-牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和包被原Cd^(2+)-iEDTA-鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA),电感耦合等离子体发射光谱法和聚丙烯酰胺凝胶法进行鉴定;用Cd^(2+)-iEDTA-BSA免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术筛选Cd^(2+)-EDTA单克隆抗体(mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备Cd^(2+)-EDTA mAb;应用Cd^(2+)-EDTA mAb建立Cd^(2+)残留胶体金免疫层析快速检测方法 (Cd^(2+)-Strip),并测定其性能。结果:免疫原偶联成功,Cd^(2+)-iEDTA-BSA中BSA与Cd^(2+)的含量分别为7.1 mg/mL和191.7μg/mL;筛选出1A3C11、2B7D8、2E10G9、4F3E7共4株杂交瘤细胞,经9次传代分泌抗体稳定,亲和力最高的2E10G9株亲和常数(Ka)为7.58×10~8 L/mol,对Cd^(2+)-iEDTA的半数抑制浓度为16.3μg/L,与Hg^(2+)-EDTA的交叉反应(cross-reaction,CR)率为18.6%,与其他重金属离子无CR;Cd^(2+)-Strip的检测时间为10 min,检出限为5μg/L,其检测结果与竞争ELISA试剂盒(Cd^(2+)ELISA-Kit)、电感耦合等离子体发射光谱法符合率为100%。结论:制备出了亲和力高、特异性强的Cd^(2+)mAb,建立了灵敏、特异、快速、简便的食品镉离子胶体金免疫层析快速检测方法。

沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条的研制与应用

本试验目的为提供一种食品中国家强制检验的沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条,并对购自超市和农贸市场的肉蛋进行检测。该试纸条由吸收垫、样品垫、偶联垫和硝酸纤维素膜等组成,包被对照线和检测线,以及喷涂于偶联垫上的金标沙门氏菌多抗组装建立。结果表明该试纸条对沙门氏菌的最低检测量为1.07×107 cfu/mL,检测时间仅需5~10min。该试纸条特异性强,重复性好,可在4℃或室温存放9个月,检测结果稳定。

胶体金标记免疫分析及其在小分子化合物快速检测中的应用

胶体金标记免疫分析法是近十几年来迅速发展的一种新型的免疫标记分析技术 ,在生物医学中己经有比较广泛的研究和应用 ,但在小分子化合物残留检测中却很少见报道。文章比较详细地介绍了用于检测小分子化合物的胶体金检测试纸的检测原理、制备和应用。

基于侧流免疫层析技术制备胶体金试纸条检测莲子中黄曲霉毒素B_1的研究

目的基于侧流免疫层析技术制备一种适用于快速检测莲子中黄曲霉毒素B1(AFB1)的试纸条。方法利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,金颗粒标记单克隆抗体制成金标偶联物作为结合垫,特异性抗原(AFB1-BSA)和羊抗鼠Ig G二抗分别作为检测线和控制线。结果经组装测试,试纸条的灵敏度为2.5ng·m L-1,检测时间在10 min以内。在检测的23份莲子样品中,6份样品有AFB1,阳性样品经UFLC-MS/MS确证,试纸条假阳性和假阴性率为0。结论所制备的试纸条检测快速、操作简便、结果准确,适合大批量莲子中AFB1的现场检测。

软骨藻酸快速检测方法技术研究

为比较研究海产品中软骨藻酸日常分析的快速检测技术,筛选出适合不同检测目的的检测技术。本文通过对直接ELISA法、间接ELISA法、胶体金免疫层析法和高效液相色谱法的检测时间、检出限、保质期等进行研究,并对贝类样品中软骨藻酸含量进行测定。结果表明,间接ELISA法的检出限为18ng/L,检测时间为2.5h,在4℃条件下可保存7d;直接ELISA法的检出限为3.58ng/L,检测时间为1.5h,在4℃条件下可保存7d;免疫胶体金试纸条检出限为20ng/L,检测时间15min,在4℃条件下可保存6个月;高效液相色谱法(HPLC)检出限为0.25ng/L,检测时间为6min。从而可以推断这4种检测技术均能达到各国水产品条例软骨藻酸20μg/g限值的要求,而高效液相色谱法检出限最低,免疫胶体金试纸条具有更短的检测时间和较强的稳定性。

链霉素金标单克隆抗体快速检测试纸的研制及其特性鉴定

建立了分泌抗链霉素单克隆抗体(STRmAb)杂交瘤细胞株并生产了STRmAb,采用胶体金免疫层析试验(GICA)技术成功研制出STR残留快速检测试纸(STR-Strip),并对其性能进行了鉴定。结果显示,目测检测限为12.5μg/kg;与氯霉素等药物无交叉反应;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100%。研制的快速检测试纸可以在10min内显示结果,具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合STR残留的现场快速检测。

食品中四环素残留快速检测方法的初步建立

为了建立金标记快速检测试纸条检测食品中四环素(TC)残留的新方法,用硝酸纤维素微孔滤膜(NC膜)作为包被材料;实验室自制金标记抗TC单抗,选择原溶胶40%制备金标记抗体溶胶;以TC-BSA包被检测线(T线),包被浓度选择1.5 mg/mL;实验室自制兔抗鼠IgG包被质控线(C线),包被浓度选择2.5 mg/mL.该试纸条灵敏度可达50 ng/mL,与酶联免疫法试剂做对比,100份牛奶样品的灵敏度等各项指标符合率为100%.该试纸条具有质量优良、操作简便、不需仪器设备、保质期长等特点,适用于食用动物养殖场、食品加工企业和食品进出口检验检疫等单位食品中TC的快速检测.

牛奶中新霉素残留胶体金免疫层析快速检测技术的研制

建立了一种快速、简单的检测牛奶中新霉素残留量的胶体金免疫层析法,将抗新霉素单克隆抗体-胶体金标记物冻干于微孔板中,将新霉素人工抗原和羊抗鼠抗抗体分别包被在醋酸纤维素膜上作为检测线（T线）和质控线（C线）,T线的新霉素人工抗原与待测牛奶样品中的新霉素竞争结合新霉素单克隆抗体-胶体金标记物,通过T线和C线的显色情况读出结果。试纸条对牛奶样品的检测限为200μg/L,牛奶样品无需稀释,可直接检测,检测时间只需3~5min,与磺胺类、四环素类、氯霉素类等药物均无交叉反应,检测结果重复性好,可作为现场快速筛查牛奶中新霉素残留的有效手段。

单克隆抗体-胶体金标记技术快速检测柑桔黄龙病

应用单克隆抗体一胶体金标记技术,采用徒手切片法和斑点试验法检测柑桔黄龙病获得成 功。该方法检测速度快,操作简单,成本低,适合柑桔种苗大批量检测和田间普查。采用单抗金标技术 对田间栽培的柑桔品种、柑桔实生苗、试管微芽嫁接苗、热处理脱毒后的嫁接苗进行检测,结果表明 田间栽培的6个柑桔品种不论是否显示黄龙病症状均检测到柑桔黄龙病病菌,而消毒种子播种所得 实生苗及试管微芽嫁接苗为无病株,带病株经过30d 40℃恒温热处理后产生的新梢及其嫁接苗绝大 部分也是无病株。

快速检测流感病毒抗原方法的建立

目的建立有效、简便的胶体金免疫层析方法(G ICA)快速检测流感病毒感染抗原方法。方法分别对1145例急性呼吸道疾病住院患者应用G ICA法检测患者鼻咽部分泌物的流感病毒A、B(FluA、B)抗原,并同时用IFA法作对照,对G ICA法做出评价。对以上患者分别应用鼻、咽拭子法和鼻咽部细导管负压吸引法两种不同方法采集患者鼻咽部分泌物,均经G ICA法快速检测分泌物标本中的Flu A、B抗原,对两种不同采集方法的结果做出评价。结果以上两种检测方法及采集方法所得结果,均有较好的一致性,之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论鼻、咽拭子采集法配合G ICA法是简便、快捷、敏感的检测流感病毒抗原的好方法。

动物性食品中磺胺二甲嘧啶快速检测方法

根据竞争抑制免疫层析原理,应用胶体金免疫层析技术进行磺胺二甲嘧啶在鸡肉和鲫鱼中的残留检测研究。磺胺二甲嘧啶半抗原-OVA和羊抗兔二抗分别作为检测带(T线)和质控带(C线)包被在硝酸纤维素膜上,金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,制成免疫层析快速检测试纸条。所建立的检测体系对标准溶液的灵敏度达到1μg/L。成功检测了鸡肉和鲫鱼中的磺胺二甲嘧啶残留。该方法灵敏度高,所用试剂无毒、无污染,无需借助仪器,样品前处理简便,快速,检测过程可在10 min内完成,可以作为现场快速检测动物源性食品中磺胺二甲嘧啶残留的有效手段。

除草剂扑草净胶体金免疫层析检测试纸条的研制

制备了扑草净胶体金免疫层析检测试纸条,建立了水样中扑草净的快速检测方法。采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备胶体金,对胶体金免疫层析方法的工作条件(NC膜的封闭条件、金标垫的处理方法)进行优化。最终建立的方法检出限为5 ng/mL,5 min内可以通过目测进行结果判断。河水样品不需要任何处理可以直接进行检测,检出限为5 ng/mL。本研究建立的快速免疫检测方法适用于水中扑草净残留的现场检测。

氰戊菊酯残留胶体金免疫层析试纸条研制

应用胶体金免疫层析技术研制出一种准确、快速、简便检测氰戊菊酯农药残留的试纸条。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记氰戊菊酯单克隆抗体,以硝酸纤维素膜为载体,包被氰戊菊酯抗原作为检测线(T线),包被兔抗鼠IgG抗体作为质控线(C线),经过竞争反应后目测结果。实验结果表明,该快速检测试纸条100%抑制浓度为800 ng/mL(检测线无色),检测时间为10 min,批次内和批次间重复性为100%。采用该试纸条检测农产品中残留的氰戊菊酯特异性强、灵敏度高而且无需特殊仪器设备,适用于农产品中氰戊菊酯残留的快速检测。

免疫学技术在食品安全快速检测中的应用研究进展

随着人们对于食品安全问题的关注程度不断增加,食品安全快速检测方法得到了广泛应用。目前常用的食品安全快速检测技术包括免疫学技术、酶抑制技术、传感器技术、生物芯片技术等。免疫学检测技术具有灵敏度高、特异性强、方便、快速和经济等优点,在食品安全快速检测中发挥了重要的作用。免疫学技术在食品安全领域广泛应用的主要有免疫吸附法和免疫层析法两大体系,其中免疫吸附法以酶联免疫吸附检测法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)最常用,而免疫层析法则以胶体金免疫层析技术(colloidal gold immunochromatographic assay,GICA)为代表。本文介绍了免疫学技术在食品安全快速检测中应用的原理及特点,并对酶联免疫吸附检测技术和胶体金免疫层析技术近几年来在食品安全快速检测中的应用进展进行了综述。

油脂中黄曲霉毒素B_1快速检测试剂盒研究

在胶体金免疫层析技术的基础上,建立了一种快速检测油脂中黄曲霉毒素B1(AFB1)的新方法.本研究的AFB1快速检测试剂盒突破了常规胶体金免疫层析检测试纸只能检测水溶液样品的限制,可对含油脂样品直接检测,工作时无需复杂的油脂样品处理工艺,缩短了预处理时间.其基本原理是利用吐温(Tween 20)对油脂样品进行乳化处理,使油脂在油脂处理液(甲醇-吐温-磷酸缓冲溶液)中均匀分散为微小油滴,形成稳定的水包油型乳化体系,从而使水相中的抗原、抗体反应不受油脂干扰.测试结果表明本试剂盒对油脂中的AFB1的检测限为10ng.mL-1,检测时间为10min,无假阳性、假阴性.

胶体金免疫检测水产品中孔雀石绿残留的前处理方法优化

目的优化胶体金免疫检测水产品中孔雀石绿残留的前处理方法。方法采用超静音可调节式气泵代替氮吹仪或空气吹干仪,对商品化孔雀石绿胶体金免疫层析试剂盒前处理方法中的样品用量、提取剂用量、吹干体积量及吹干温度等条件进行优化,并将优化后的前处理方法在10种水产品中进行应用验证。结果在保证原有试剂盒检出限2μg/kg的前提下,减少样品用量和提取剂用量,节约检测成本;不需用大型仪器,降低检测人员操作要求;样品前处理步骤更加简便,单个样品前处理和检测总时间少于15 min;在10种水产品中具有较好的实际适用性。结论优化后的孔雀石绿免疫胶体金层析试剂盒前处理方法更加简便、快捷,可实现水产品中孔雀石绿的基层现场快速检测。

基于定向标记抗体的虾原肌球蛋白量子点免疫层析方法的建立及应用

目的利用量子点定向标记的单克隆抗体,建立竞争荧光免疫层析方法快速检测食品中虾原肌球蛋白(tropomyosin,TM)。方法使用杂交瘤细胞株免疫Balb/c小鼠,从小鼠腹水中制备得到单克隆抗体,将氨基化量子点通过具有抗体Fc端生物亲和性的重组蛋白共价固定于抗体Fc端。以量子点定向标记抗体作为检测抗体,以南美白对虾中的TM作为检测靶标,基于竞争法原理组装免疫层析试纸条。在对条件参数进行优化后,应用于市售食物样品中TM的检测。结果所建立方法的灵敏度为0.96μg/mL(%P=50%),检出限为0.15μg/mL(%P=20%),检测结果与文献中报道的相当。试纸条批内差和批间差的变异系数分别为6.81%~8.86%和8.27%~14.67%,均小于15%,在可接受范围之内。同时试纸条显示出了良好的特异性与准确性,实际样品的检测结果与过敏原标签一致。结论本研究所建立的荧光免疫层析试纸条检测方法适用于TM的快速、高效检测。