核酸斑点杂交技术快速鉴定转基因大豆品系

为了建立转基因大豆品系高通量检测方法,本研究以转基因大豆DAS-68416-4、DAS-44406-6、DAS-81419、DP305423作为试验对象,根据品系特异的宿主与插入片断间连接区域的基因序列作为检测靶标,设计特异性引物。以转基因标准品为材料,提取DNA作为模板进行定性PCR扩增,尼龙膜点样,生物素探针制备,杂交与显色,并对探针浓度、杂交温度与时间与显色时长进行优化,利用优化后的反应条件对转基因大豆DAS-68416-4、DAS-44406-6、DAS-81419、DP305423及空白对照样品进行检测,验证体系的特异性。将4种转基因大豆的DNA进行10倍系列稀释,利用优化后的反应条件测定灵敏度。对实验室收集的7个品系的转基因大豆标准品和8个能力验证样品进行适用性检测分析,并采用双盲验证法对17份盲样进行核酸斑点杂交测试分析,进一步验证体系的可靠性。结果表明,以转基因大豆DAS-68416-4、DAS-44406-6、DAS-81419、DP305423为模版的扩增产物均有且只有一条清晰明亮的条带,大小均与理论相符,空白对照与内参照基因结果正常。4种转基因大豆特异性探针除对应样品有显色反应,对其他3种样品均未显色,具有方法特异性。样品DAS-68416-4、DAS-81419、DP305423最低检出限为20 pg·μL^(-1),样品DAS-44406-6最低检出限为2 pg·μL^(-1),具有较高的灵敏度。对7个标准品、8个能力验证样品和17份盲样的测试结果与SN/T 1204-2016《植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检测方法》中的结果一致,可用于日常样品检测。本研究建立的定性PCR结合的核酸斑点杂交方法能对4种转基因大豆进行快速准确鉴定,对有序推进生物育种产业化应用,严查非法转基因种子市场流通和田间种植,保障粮食安全具有重要意义。

DNA电化学传感器在DNA损伤研究中的应用

利用单链ＤＮＡ分子共价固定在石墨电极表面，采用核酸分子杂交技术，以道诺霉素作为杂交指示剂形成ＤＮＡ电化学传感器．研究了在不同致突变剂的作用下，特定碱基序列的ＤＮＡ在电极表面能否杂交及杂交程度的差异，探讨了ＤＮＡ突变情况及可能的突变机理．

小麦矮缩病毒NASH快速检测方法的建立及应用

以非放射性物质地高辛为标记物,采用PCR法制备了特异性强、灵敏度高的DNA探针。通过优化反应体系,建立了小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus,WDV)的核酸斑点杂交(nucleic acid spot hybridization,NASH)快速检测技术体系。该方法诊断准确率高,操作简单,周期短,整个检测过程仅需5h左右。利用建立的NASH技术开展WDV流行学调查,发现近年来WDV在我国陕西韩城、山西太原和河北石家庄等地区点片发生,没有大面积暴发成灾。

人乳头状瘤病毒及其L1蛋白检测在宫颈病变诊断中的应用

宫颈癌（cervical cancer,CC）是全球妇女中最常见的恶性肿瘤之一,仅次于乳腺癌而居于第二位,在发展中国家尤为常见,是妇科三大恶性肿瘤之一,全世界每年都有约20万的妇女死于该疾病.宫颈癌的发生、发展在近二十年中呈现明显上升趋势,其发病与许多因素有关,且农村高于城市,近10年来有持续上升并趋于年轻化.从癌前病变发展到宫颈癌大约需10年的时间,而早期宫颈癌的治疗效果和5年生存率位于恶性肿瘤的前列.为此我们采用聚合酶链反应（Polymerase chain rection,PCR）、基因芯片和免疫组化技术对胜利医院妇科门诊104例疑似宫颈癌或癌前病变的患者和34例健康查体女性,进行了宫颈细胞HPV检测.

生物战剂检测技术及其研究进展

生物武器是由生物战剂及其释放装置所组成的一种大规模杀伤性武器,具有致病性强、污染面积大、传染途径多、成本低、使用方法简单、影响因素复杂等特点。虽然联合国明令禁止使用生物武器,但仍有一些国家和地区在继续进行生物武器的研究。另外,生物战剂在恐怖主义活动和非军事领域的非法使用对社会公共安全造成了严重的威胁。尽早发现生物战剂施放并确定其种类是生物武器防御与疫情控制的关键。因此,加强对生物战剂快速检测与预警技术的研究意义重大。该文对当前应用于生物战剂检测领域的主要技术及其研究进展进行了综述。

5434例女性泌尿生殖道HPV感染情况及HPV亚型分析

目的了解泰顺地区女性易感人群人乳头瘤病毒(HPV)感染率和HPV亚型分型情况。方法收集2017年1月至2017年12月于泰顺县人民医院体检及就诊的女性患者泌尿生殖道标本,共5434例。采用PCR反向点杂交法进行HPV分型检测,并对结果进行分析。结果5434例标本中HPV阳性1895例,HPV阳性1309人次。高危型HPV检出1127例,占59.4%;低危型HPV检出356例,占18.8%。入选患者中单一感染935例,占71.4%;多重感染374例,占28.6%。高危型中检出最多的是HPV52型,共210例,占11.1%;其次是HPV58型137例,占7.2%;HPV16型124例,占6.5%;HPV18型62例,占3.3%。HPV52阳性患者集中于41~50岁,HPV53阳性患者集中于31~40岁,HPV16、HPV18阳性患者集中于20~40岁及>60岁。随着患者年龄的增长各HPV亚型的阳性率也在增长,且各年龄段患者均以高危型HPV感染为主(62.36%)。结论泰顺地区女性患者HPV亚型及患者年龄分布情况与我国南方女性HPV感染情况相符,HPV感染率随患者年龄增加而增高。高危型HPV检测对子宫颈癌等相关疾病的筛查及预防具有较高的应用价值。