Ras相关C3肉毒毒素底物1(Rac1)多克隆抗体的制备及应用

目的制备抗Ras相关C3肉毒毒素底物1(Rac1)兔多克隆抗体并进行初步应用。方法以人宫颈癌细胞系He La细胞c DNA为模板,构建重组表达质粒p ET-32a-Rac1。His-Rac1融合蛋白在大肠杆菌中成功表达,将纯化后的融合蛋白作为免疫原免疫家兔制备兔多克隆抗体。分别采用ELISA、Western blot法和免疫组织化学技术对抗Rac1抗血清的效价及特异性进行鉴定。结果 His-Rac1融合蛋白成功构建并高效表达。制备的抗Rac1兔多克隆抗体可以检测到He La细胞、MCF-7细胞的Rac1蛋白,并能识别人肾组织中的Rac1蛋白。结论成功制备了兔抗人Rac1多克隆抗体,该抗体可以识别多种天然样本中的Rac1蛋白。

电针对佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜VEGF/Vav2/Rac1信号通路的影响

目的观察电针对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠膝关节滑膜组织内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、鸟嘌呤核苷酸交换因子2(vav guanine nucleotide exchange factor 2,Vav2)和Ras相关C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达的影响,探究电针干预类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)血管新生的可能机制。方法将40只SPF级SD雄性大鼠随机分成4组(空白组、模型组、西药组和电针组),每组10只。除空白组,其他3组采用尾根部皮下注射完全弗氏佐剂制成AA大鼠模型。造模后第2天开始干预,电针组进行电针干预,以左侧足三里与关元穴配穴,右侧足三里与同侧阿是穴配穴,每次20 min,每天干预1次,共干预21次;西药组给予甲氨蝶呤灌胃给药,每周1次,共干预3次。观察各组体质量、关节红肿等一般情况,每3天测量1次大鼠后双侧足跖容积。干预结束后,通过大鼠一般情况、体质量、足跖容积分析各组大鼠足跖肿胀程度,HE染色观察AA大鼠膝关节滑膜组织的病理形态学,免疫组织化学法检测膝关节滑膜组织内CD31表达变化,Western blot法检测大鼠膝关节滑膜组织VEGF、Vav2和Rac1蛋白表达量。结果与空白组相比,模型组大鼠第21天足跖容积均明显增大(P<0.01),膝关节滑膜组织出现显著性病理改变,CD31表达量明显升高(P<0.05),VEGF、Vav2、Rac1蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与模型组相比,西药组足跖容积在第21天显著减小(P<0.01),膝关节滑膜组织病理改变明显改善,VEGF、Vav2表达量明显下降(P<0.05),Rac1蛋白表达量显著下降(P<0.01);电针组足跖容积在第21天显著减小(P<0.01),膝关节滑膜组织病理改变明显改善,VEGF、Rac1表达量明显下降(P<0.05),Vav2蛋白表达量显著下降(P<0.01)。结论电针改善RA的作用机制可能与抑制VEGF/Vav2/Rac1信号通路,进而抑制血管新生有关。

溃疡性结肠炎患者血清Rac1、ACE2水平与肠道功能损害的相关性

目的探讨溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者血清Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)、血管紧张素转化酶2(ACE2)水平与肠道功能损害的相关性。方法选取2020年3月至2022年3月驻马店中心医院就诊的UC患者60例为病例组,依据Mayo评分将病例组分为活动期组(36例)、缓解期组(24例),同时以同期健康体检者40例为对照组。分别静脉抽取所有研究对象空腹血液,ELISA法检测血清ACE2水平;q RT-PCR检测血清中Rac1 m RNA水平;同时检测肠道屏障指标(血清二胺氧化酶、细菌内毒素、D-乳酸)水平;采用Pearson法分析UC患者血清中ACE2、Rac1 m RNA水平的相关性以及两者分别与血清二胺氧化酶、细菌内毒素、D-乳酸的相关性。结果与对照组相比,病例组血清中ACE2、Rac1 m RNA水平显著下降,二胺氧化酶、细菌内毒素、D-乳酸水平显著增加(P<0.05);与缓解期组相比,活动期组ACE2、Rac1 m RNA水平显著下降(P<0.05);Pearson法结果显示,UC患者血清中ACE2与Rac1水平呈明显正相关(r=0.390,P<0.05),且分别与二胺氧化酶、细菌内毒素、D-乳酸呈负相关(P<0.05)。结论UC患者血清中ACE2与Rac1水平呈正相关,且分别与肠道屏障指标呈负相关,检测两者水平对于评定肠道功能损害可能具有一定临床价值。

前列腺癌组织TGF-β1/Rac1通路蛋白表达与根治术后生化复发的相关性

目的:探讨前列腺癌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)/Ras相关C3肉毒素底物1(Rac1)通路蛋白表达与根治术后生化复发的关系。方法:回顾性分析2015年02月至2018年02月在本院行前列腺癌根治性切除术的200例患者的临床资料,均于手术时留存前列腺癌组织与癌旁组织标本。采用免疫组织化学法检测前列腺癌组织与癌旁组织中TGF-β1、Rac1、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达情况并比较阳性表达率。另统计根治术后随访3年期间患者生化复发情况并据此将其归为生化复发组与未生化复发组,对比生化复发组与未生化复发组前列腺癌组织中TGF-β1、Rac1、Vimentin、E-cadherin蛋白阳性表达率,采用Cox回归模型分析前列腺癌组织中TGF-β1、Rac1、Vimentin、E-cadherin蛋白表达情况与患者根治术后生化复发的关系。结果:前列腺癌组织中TGF-β1、Rac1、Vimentin蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织,E-cadherin蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05);根治术后随访3年,生化复发率为14.50%(29/200),生化复发组前列腺癌组织中TGF-β1、Rac1、Vimentin蛋白阳性表达率高于未生化复发组(P<0.05),E-cadherin蛋白阳性表达率低于未生化复发组(P<0.05);经Cox回归模型分析显示,术前PSA水平、标本Gleason评分、包膜侵犯、精囊侵犯、神经周围侵犯、血管侵犯、手术切缘阳性、TGF-β1蛋白阳性、Rac1蛋白阳性、Vimentin蛋白阳性均是前列腺癌患者根治术后生化复发的危险因素(HR=3.350、3.117、4.702、5.618、6.328、5.114、6.007、3.019、3.077、2.740,P<0.05),E-cadherin蛋白阳性是其保护因素(HR=0.471,P<0.05)。结论:前列腺癌组织中TGF-β1、Rac1、Vimentin蛋白均高表达,而E-cadherin蛋白低表达,其表达情况均与患者根治术后生化复发存在一定的关系,TGF-β1、Rac1、Vimentin蛋白阳性表达可增加术后生化复发的概率,而E-cadherin蛋白阳性表达可降低术后生化复发的风险,此对临床具有一定的指导作用。

miR-7a-5p负调控Rac1表达参与HepG2细胞胰岛素抵抗

目的:探讨软脂酸诱导胰岛素抵抗的HepG2细胞中微小RNA-7a-5p(microRNA-7a-5p,miR-7a-5p)是否通过调控Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达参与细胞胰岛素抵抗。方法:应用生物信息学分析预测其下游靶分子,构建含Rac13'端非翻译区的野生型及突变型hsa-Rac1萤光素酶报告质粒,与miR-7a-5p表达慢病毒或对照空载慢病毒共转染293T细胞,检测萤光素酶活性。HepG2细胞分为软脂酸诱导的胰岛素抵抗组和正常对照组,RT-qPCR分析两组细胞miR-RNA-7a-5p的表达,Western blot分析下游靶分子蛋白的表达。HepG2细胞分为干扰慢病毒转染组和对照慢病毒转染组,转染之后,软脂酸诱导两组细胞胰岛素抵抗,分析两组HepG2细胞中脂质堆积及葡萄糖消耗情况。结果:生物信息学预测Rac1为miR-7a-5p下游分子。野生型hsa-Rac1萤光素酶报告质粒与miR-7a-5p表达慢病毒共转染后,萤光素酶较对照组显著降低(P<0.05)。胰岛素抵抗的HepG2与对照细胞组相比,miR-7a-5p表达显著下调(P<0.05),Rac1蛋白表达显著上调(P<0.05)。较对照相比,Rac1 mRNA的表达抑制增加了胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗(P<0.05),降低了胞质内脂质堆积(P<0.05)。结论:miR-7a-5p的一个潜在靶点是Rac1。miR-7a-5p通过负调节Rac1表达参与软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。

小GTP酶Rac1对肺癌A549细胞凋亡和吞噬作用的影响

目的:分析肺癌A549细胞Rac1的表达水平及其对细胞吞噬功能的影响。方法:采用姜黄素诱导A549细胞凋亡;采用流式细胞术检测Rac1抑制剂对A549细胞凋亡的影响;将A549细胞与同系凋亡细胞共培养,应用荧光显微镜技术观察Rac1下调对A549细胞清除凋亡细胞能力的影响。用qRT-PCR检测细胞Rac1 mRNA表达水平。结果:流式双染和Hoechst染色荧光显微镜观察结果显示,Rac1抑制剂能够明显增强姜黄素诱导的A549细胞凋亡,凋亡细胞率相对于未加入Rac1抑制剂时显著上升,且呈现与Rac1抑制剂的剂量依赖特性。此外,Rac1抑制剂能明显下调A549细胞的吞噬能力。结论:Rac1可抑制肺癌A549细胞的凋亡,增强其吞噬功能。

miR-101对结直肠癌细胞放疗敏感性的影响及机制探讨

目的观察miR-101对结直肠癌细胞放疗敏感性的影响,并探讨其分子机制。方法取结直肠癌细胞株SW620、SW480,稳定过表达miR-101细胞株SW620(miR101-SW620)及其阴性对照GV209-SW620,瞬时沉默miR-101表达细胞株SW480(SW480-miR101)及其阴性对照SW480-NC,采用Western blotting法检测细胞中miR-101靶基因Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)及其下游关键蛋白细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)、人Ras同源基因家族成员A(Rho A)。取SW620、GV209-SW620、miR101-SW620细胞,分别给予0、2、4、6、8 Gy射线处理24 h;Western blotting法检测DNA损伤标志性蛋白γ-H2AX、细胞凋亡标志蛋白Caspase-3判断细胞放疗敏感性变化,同时检测细胞Rac1、Cdc42、Rho A蛋白。结果与SW620、GV209-SW620细胞比较,miR101-SW620细胞Rac1、Cdc42、Rho A蛋白表达降低(P均﹤0.05);与SW480、SW480-NC细胞比较,SW480-miR101细胞Rac1、Cdc42、Rho A蛋白表达均增高(P均﹤0.05)。随着照射剂量增加,结直肠癌细胞γ-H2AX、Caspase-3表达均增高,而Rac1、Rho A、Cdc42蛋白表达均降低(P均﹤0.05);与同等照射剂量下SW620、GV209-SW620细胞比较,miR101-SW620细胞γ-H2AX、Caspase-3蛋白表达均增高,而Rac1、Rho A、Cdc42蛋白表达均降低(P均﹤0.05)。结论 miR-101可能通过调控Rac1/Cdc42/Rho A信号通路增强结直肠癌细胞对放疗的敏感性。

Rac1和NF-κBp65的表达与非小细胞肺癌转移及预后的关系

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和核转录因子(NF)-κBp65的表达及其临床意义。方法采用免疫组化Super Pic TureTM Polymer二步法,检测112例石蜡包埋的NSCLC组织及112例相同患者石蜡包埋的正常余肺组织Rac1和NF-κBp65的表达。结果 NSCLC组织中Rac1及NF-κBp65的表达明显高于正常余肺组织,且两者的表达强度在NSCLC组织中呈正相关(r=0.549,P<0.001)。在肿瘤不同分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况的NSCLC患者的Rac1的表达强度差异有统计学意义;在不同TNM分期及淋巴结转移情况的NSCLC患者的NF-κBp65的表达强度差异有统计学意义;而在低分化、高分期及有淋巴结转移的NSCLC患者组织中,2种指标协同表达的现象更容易出现,且差异有统计学意义(P<0.05)。Rac1高表达组的3年生存率(35.29%)低于低表达组(79.07%);NF-κBp65高表达组的3年生存率(40.28%)低于低表达组(74.36%);Rac1与NF-κBp65共同高表达组的3年生存率(37.70%)低于仅1种蛋白高表达(61.11%)及共同低表达者(81.25%)。Rac1和NF-κBp65共同高表达及淋巴结转移是预后的不良因素(P<0.05)。结论在NSCLC组织中,Rac1和NF-κBp65的表达呈现较好的相关性,检测两者的表达会对NSCLC患者的临床病理学特征及预后起一定的提示作用。

RAC3基因对早期滋养层细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨ras相关C3肉毒杆菌毒素底物3(RAC3)对早期滋养层细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集2015年5月至2016年5月在海军军医大学(第二军医大学)长征医院门诊或住院的不明原因自然流产和人工流产妊娠妇女的绒毛组织各20例,应用q PCR法检测绒毛组织中RAC3 m RNA的表达。取C57/B6小鼠孕6.5、14.5和19.5 d的胎盘组织进行m RNA芯片检测。在早期人滋养层细胞系HTR-8/SVneo中干扰和过表达RAC3后,应用CCK-8法和Transwell实验检测RAC3对HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果不明原因自然流产绒毛组织中RAC3 m RNA的表达低于人工流产绒毛组织(P<0.05)。小鼠孕6.5、14.5 d胎盘组织中Rac3m RNA的表达高于孕19.5 d(P均<0.05)。与对照组相比,干扰RAC3表达后HTR-8/SVneo细胞的增殖、迁移和侵袭能力均减弱(P均<0.05),过表达RAC3后HTR-8/SVneo细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强(P均<0.01)。结论 RAC3对早期滋养层细胞的增殖、迁移和侵袭能力具有重要调控作用。

HIF-1α和Rac-1在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨HIF-1α和Rac-1在胃癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学法检测63例人胃癌组织和40例癌旁组织标本中HIF-1α和Rac-1的表达,采用半定量计数法判定,并结合临床资料进行分析。结果HIF-1α和Rac-1在胃癌组织中表达的阳性率分别为68.25%和63.49%,而在癌旁组织中的阳性率分别为5.00%和17.50%(P<0.01);HIF-1α和Rac-1在胃癌组织中的表达与TNM分期、浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.05),而与性别、年龄、原发部位及肿瘤大小无关(P>0.05),且Rac-1与胃癌组织分化程度呈正相关,而HIF-1α与胃癌组织分化程度无显著相关性;在胃癌组织中HIF-1α和Rac-1的表达呈正相关。结论胃癌组织中HIF-a和Rac-1的表达显著增加,与胃癌的侵袭性生物学行为密切相关,两者的联合检测可能成为预测胃癌转移及预后的重要指标。

PI3K/Akt信号通路参与LPS诱导大鼠肺微血管内皮细胞表达RACK1及rac1

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)表达活化的蛋白激酶C受体1(RACK1)和ras相关C3肉毒菌毒物底物1(rac1)的影响。方法体外培养大鼠PMVEC:①LPS量效组:0、1、5、10 mg/L LPS与大鼠PMVEC孵育12 h;②LPS时效组:10 mg/L LPS与PMVEC孵育0、3、6、8、12、24 h;③IGF-1时效组:100 ng/ml IGF-1与PMVEC孵育0、3、6、8、12、24 h;④LPS+LY294002组:100 ng/ml LY294002预孵育PMVEC 1 h后加入10 mg/L LPS继续孵育12 h,设空白组、LPS组和LY294002组为对照。所有干预结束后Western blot法检测RACK1、rac1及p-Akt蛋白表达。结果①LPS量效组:RACK1、rac1及p-Akt蛋白表达量均呈浓度依赖性增加,各蛋白组组内比较差异均有统计学意义:(F=120.455,P<0.001)、(F=165.813,P<0.001)及(F=309.346,P<0.001)。②LPS时效组:RACK1和rac1蛋白表达呈时间依赖性增加,LPS刺激24 h后达最高,各蛋白组组内比较差异均有统计学意义:(F=454.034,P<0.001)和(F=423.630,P<0.001);p-Akt表达自3 h(0.460±0.089)上调,12 h达最高(2.022±0.244),24 h(1.264±0.074)仍高于0 h(0.237±0.063),组间比较差异有统计学意义(F=137.726,P<0.001)。③IGF-1时效组:IGF-1诱导PMVEC表达RACK1、rac1及p-Akt呈时间依赖性增加,各组组间比较差异有统计学意义(F=188.293,P<0.001)、(F=115.071,P<0.001)及(F=60.175,P<0.001)。④LY294002干预组:LPS+LY294002作用PMVEC后:RACK1蛋白表达量较LPS组下调[(0.732±0.137)vs(1.498±0.167),P<0.001];rac1蛋白表达量较LPS组下调[(0.758±0.084)vs(1.384±0.170),P<0.001];p-Akt蛋白表达量较LPS组下调[(0.492±0.148)vs(1.106±0.219),P<0.001]。结论 PI3K/Akt信号通路通过干预RACK1和rac1表达,参与LPS致PMVEC损伤。

HIF-1α和Rac1在肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和Ras相关的C3肉毒底物1(Racl)在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法选取正常肝组织20例、肝硬化组织42例及肝细胞癌组织58例,应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法检测组织中HIF-1α和Racl蛋白的表达,分析其表达与临床病理特征的关系,并结合临床资料进行分析。结果 HIF-1α主要为胞核或胞浆着色,Rac1为胞浆着色。HIF-1α蛋白在正常肝组织中的阳性表达率为0.0%(0/20),肝硬化组织为45.2%(19/42),原发性肝癌组织为81.0%(47/58),其中高分化阳性表达率为53.3%,中分化为83.3%,低分化为100.0%。HIF-1α蛋白在原发性肝癌发生、发展中的表达依次升高(P<0.05)。且原发性肝癌组织中HIF-1α蛋白表达与淋巴结转移有关。Rac1蛋白表达在正常肝组织中的阳性表达率为0.0%(0/20),癌旁肝硬化组织为40.5%(17/42),原发性肝癌组织为77.6%(45/58),其中高分化阳性表达率为60%,中分化为73%,低分化为94.7%。Rac1蛋白在肝癌发生、发展中的表达依次升高(P<0.05)。肝癌组织Rac1蛋白表达与淋巴结转移有关。HIF-1α蛋白的阳性表达率与Rac1蛋白的阳性表达率呈正相关(P<0.05)。结论 HIF-1α、Rac1与原发性肝癌癌变及进展有关,联合检测两者蛋白的表达有助于判断肝癌的病变程度及预后。

流体静压力调控下Rac1信号通路在大鼠BMSCs成软骨响应中的作用

目的:观察流体静压力作用下Rac1信号通路对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、细胞骨架改建及成软骨向分化的影响。方法:体外分离培养大鼠BMSCs,并随机分为对照组、Rac1激动剂组、Rac1拮抗剂组、压力组、Rac1激动剂+压力组、Rac1拮抗剂+压力组;其中各压力组均置于细胞加载装置中施加90 k Pa流体静压力,每天1 h,其他各组常规条件下进行培养。分别对各组细胞处理后,采用流式细胞仪检测细胞周期、共聚焦显微镜观察细胞骨架、Real-time PCR检测成软骨标志基因(Sox9、Aggrecan、Col-Ⅱm RNA)的表达水平。结果:流体静压力下BMSCs中DNA合成期的细胞比例及细胞增殖指数显著高于对照组(P≤0.05),且该过程依赖Rac1活性;而Rac1在流体静压力导致的细胞骨架光密度值升高(P≤0.05)的过程中呈负调控作用;流体静压力可促BMSCs中成软骨标志基因的表达量显著升高(P≤0.05),该过程依赖Rac1活性。结论:Rac1在流体静压力导致的细胞周期启动、骨架装配及成软骨分化的过程中均具有调控作用。

Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物3在1型糖尿病和树突状细胞中的作用初探

目的初步探索ras相关C3肉毒杆菌毒素底物3(RAC3)在1型糖尿病(T1DM)和树突状细胞(DC)中的作用。方法选取来自广东省T1DM转化医学研究中2011至2016年入组后规律随访的T1DM患者作为病例组,选择2011至2016年来自中山大学附属第三医院就诊的正常糖耐量者作为健康对照组。病例组和对照组均在筛选阶段进行全外显子组测序,在验证阶段进行基因分型。使用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建C57BL/6小鼠背景的RAC3全身敲除(KO)小鼠模型。使用聚合酶链反应(PCR)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting法分别验证RAC3在DNA、RNA和蛋白水平是否被敲除。通过流式细胞染色检测RAC3 KO小鼠和同窝野生对照(WT)小鼠(每组3只)的DC分化比例以及主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(MHCⅡ)、CD86和CD80等成熟活化指标的表达水平。采用logistic回归分析法比较病例组和对照组之间等位基因频率分布的差异。组间比较采用独立样本t检验。结果筛选阶段共纳入72例T1DM患者和487名健康对照,验证阶段共纳入122例T1DM患者和577名健康对照。筛选阶段结果显示,T1DM患者中RAC3 rs4969478位点的等位基因T频率高于健康对照[分别为7.64%(11/144)和1.13%(11/974),OR=9.38,P<0.001]。验证阶段基因分型结果同样显示,T1DM患者中RAC3 rs4969478位点的等位基因T频率高于健康对照[分别为4.50%(11/244)和1.13%(13/1154),OR=4.14,P<0.01]。WT小鼠和RAC3 KO小鼠的DC分化比例差异无统计学意义(分别为85.6%±1.1%和83.3%±0.25%,P=0.08)。WT小鼠和RAC3 KO小鼠DC中MHCⅡ、CD86和CD80等成熟活化指标的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论遗传学研究提示RAC3可能是人类T1DM的易感基因,但可能不通过DC参与T1DM的发生。

FAP-1和RAC-1在原发性胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Fas相关磷酸酯酶1(FAP-1)和RAC-1在原发性胰腺癌中的表达及其与胰腺癌侵袭转移之间的关系。方法应用免疫组化SP技术,检测40例原发性胰腺癌组织中FAP-1和RAC-1的表达,分析其与胰腺癌侵袭转移之间关系。结果胰腺癌组织中FAP-1和RAC-1的表达明显高于胰腺正常组织(P<0.01),且两者存在相关性(P<0.05),同时FAP-1和RAC-1的表达有淋巴结转移表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.05)。FAP-1和RAC-1阳性表达与胰腺癌病理组织学分类无相关性(P>0.05)。结论 FAP-1和RAC-1的表达能反映原发性胰腺癌的侵袭转移能力,联合检测两种蛋白的表达对诊断胰腺癌具有一定临床意义。

Rac1基因在子宫内膜癌组织表达及其临床意义

目的探讨Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)基因在子宫内膜癌组织中表达情况及其临床意义。方法应用实时荧光定量PCR检测96例子宫内膜癌和40例正常子宫内膜组织Rac1基因的表达,并分析其与子宫内膜癌病人生存的关系以及子宫内膜癌病人预后的影响因素。结果子宫内膜癌组织Rac1 mRNA相对表达量为1.75±0.16,显著高于正常子宫内膜组织(1.38±0.14),差异有统计学意义(t=14.095,P<0.01)。子宫内膜癌组织Rac1 mRNA相对表达量与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移和血管浸润有关(t=5.322~9.739,P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,Rac1低表达组病人平均生存时间为58.82个月,高表达组为45.98个月,两组比较差异有显著性(χ2=4.972,P<0.05)。Cox比例风险回归模型分析显示,肿瘤分化程度、淋巴结转移和Rac1 mRNA相对表达量是影响子宫内膜癌病人预后的风险因素(HR=2.449~13.582,P<0.05)。结论Rac1基因在子宫内膜癌组织中呈高表达,是影响预后的风险因素之一。

四君子汤含药血清通过抑制RhoA/Rac1/Cdc42通路影响卵巢癌细胞的上皮间质转化

目的探索四君子汤含药血清对卵巢癌细胞增殖迁移、侵袭及上皮间质化的影响,并初步研究其作用机理。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3)和人卵巢上皮细胞,随机分为空白对照组、舒尼替尼组、四君子汤Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。噻唑蓝法检测各组SKOV3细胞和人卵巢上皮细胞增殖变化情况;划痕实验和侵袭(transwell)实验检测各组SKOV3细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹分析法检测各组SKOV3细胞上皮型钙粘蛋白(Ecadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组SKOV3细胞RhoA、Rac1和Cdc42 mRNA表达变化。结果各组人卵巢上皮细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,舒尼替尼组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、RhoA、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。四君子汤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、RhoA、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达依次降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达依次升高(P<0.05),呈剂量依赖性。四君子汤Ⅲ组上述指标和舒尼替尼组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论四君子汤含药血清能够抑制人卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质化,可能与RhoA/Rac1/Cdc42信号通路激活受阻相关。

miR-223-3p通过靶向RAC1调控肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖和凋亡

目的:探讨miR-223-3p通过调控Ras相关C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,RAC1)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:选用2016年8月至2018年8月吉林市中心医院手术切除的30例HCC组织及其癌旁组织标本和人HCC细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2及人正常肝细胞QSG-7701,用qPCR检测HCC组织和细胞系中miR-223-3p的表达水平。分别将miR-223-3p mimics、miR-223-3p inhibitor和siRAC1转染至SMMC-7721细胞,通过CCK-8、克隆形成实验和Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测SMMC-7721细胞的增殖、克隆形成和凋亡水平。用双荧光素酶报告基因实验检测miR-223-3p与RAC1的靶向关系,Western blotting检测细胞中RAC1蛋白的表达水平。结果:miR-223-3p在HCC组织的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01),其表达水平与肿瘤大小、TNM分期及肿瘤分化病理特征相关(P<0.05或P<0.01);miR-223-3p在HCC细胞系表达水平显著低于QSG-7701细胞(均P<0.01),以在SMMC-7721细胞中表达水平最低。双荧光素酶报告基因实验证实RAC1是miR-223-3p靶基因,miR-223-3p靶向负调控RAC1的表达。转染miR-223-3p mimics显著抑制SMMC-7721细胞的增殖和克隆形成能力(P<0.05或P<0.01),并促进细胞凋亡(P<0.01);转染miR-223-3p inhibtor则逆转miR-223-3p mimics对细胞的抑制作用。结论:过表达miR-223-3p抑制HCC细胞增殖和克隆形成能力并促进细胞凋亡,其机制可能与靶向下调RAC1表达有关。

Rac1蛋白参与2型糖尿病发病

Rac1即Ras相关的C3肉毒素底物1,是Rho GTP酶家族Rac亚家族成员之一。Rho家族GTP酶是一类分子量为20-30 ku的单体G蛋白,又称小G蛋白。Rac1是细胞内重要的信号转导分子,其激活与一些疾病如2型糖尿病密切相关。本文就Rac1参与肌动蛋白骨架重构、参与调控NADPH氧化酶类及Rac1活化影响骨骼肌葡萄糖转运体-4调控葡萄糖摄取及其参与2型糖尿病的发病机制进行了综述。

宿主Rac1对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵DF-1细胞的影响

Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)是Rho家族的一种小分子GTP酶,本文研究了宿主Rac1对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵DF-1细胞的影响.克隆鸡Rac1基因并构建原核重组质粒pGEX-4T-1-Rac1,表达、纯化重组蛋白Rac1-GST,用Western blot对重组蛋白进行验证;使用qPCR、Western blot和间接免疫荧光分别对柔嫩艾美耳球虫子孢子感染后DF-1细胞中Rac1的mRNA转录水平、蛋白表达水平和分布变化进行了检测;并利用体外入侵试验检测了Rac1多克隆抗体及其抑制剂NSC23766处理DF-1细胞后对子孢子入侵的影响.结果显示:成功克隆了579 bp的Rac1基因,并获得47.5 kDa的重组Rac1-GST蛋白.qPCR结果显示,在柔嫩艾美耳球虫子孢子感染DF-1细胞60~72 h时,DF-1细胞中Rac1的转录水平显著升高,但Western blot结果显示,Rac1蛋白的表达水平在感染前后无明显差异.间接免疫荧光的结果显示,子孢子入侵DF-1细胞15~30 min时,Rac1的荧光强度在子孢子顶端增加.体外入侵试验结果显示,用Rac1多克隆抗体孵育DF-1细胞后对子孢子的入侵没有明显影响,而利用NSC23766抑制Rac1的内源性活性后能够显著降低子孢子的入侵效率,且抑制作用与抑制剂的使用浓度成正比.以上结果表明:宿主Rac1的内源性活性会影响柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵DF-1细胞的效率,在子孢子的入侵过程中具有积极作用.