p21ras、核转录因子-κB、cyclinD1在胰腺癌中的表达及其意义

目的 探讨p2 1ras、核转录因子 -κB(nucleartranscriptionfactor-κB ,NF -κB)和cyclinD1在胰腺癌中的作用及其相互关系。方法 应用免疫组化方法检测p2 1ras、NF -κB和cyclinD1在胰腺癌中的表达。结果 p2 1ras、NF -κB和cyclinD1在胰腺癌中的阳性表达率分别为 72 5、6 7 5 %和 6 0 0 %;NF -κB与p2 1ras ,NF -κB与cyclinD1的表达呈正相关 (P <0 .0 5 ) ;p2 1ras与cyclinD1的表达呈正相关 (P <0 .0 1)。结论 胰腺癌发生机制涉及ras信号通路中p2 1ras、NF -κB和cyclinD1多个基因的异常 ,p2 1ras、NF -κB和cyclinD1过表达可能在胰腺癌发生中具有协同作用。

植物雌激素α-玉米赤霉醇降低组织因子及核转录因子AP-1和NF-κB水平的作用

目的 :探讨天然植物雌激素α 玉米赤霉醇对组织因子含量的影响及对内皮细胞表达核转录因子AP 1和NF κB的作用。方法 :建立大鼠去卵巢模型 ,进行人脐静脉内皮细胞体外培养。用放射免疫法测定大鼠血浆雌二醇水平 ;酶联免疫吸附法测定血浆及内皮细胞组织因子水平。用WesternBlot法测定核转录因子AP 1和NF κB的含量。结果 :去卵巢后 ,大鼠血浆组织因子水平升高 ,补充α 玉米赤霉醇后可使升高的血浆组织因子接近正常 ;α 玉米赤霉醇亦可降低内皮细胞组织因子含量 ,且可下调内皮细胞核转录因子AP 1和NF κB的水平 ,以上作用均与 17β 雌二醇类似。结论 :α 玉米赤霉醇可能具有抗血栓形成 。

大鼠心肌缺血缺氧损伤核转录因子-κB与细胞间粘附分子-1的表达

目的 研究异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤对心肌核转录因子 κB(NF κB)以及细胞间粘附分子 1(ICAM 1)表达的影响。方法 大鼠皮下注射异丙肾上腺素造成心肌坏死模型,测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)活力和丙二醛(MDA)含量,观察心肌坏死程度,免疫组化检测心肌NF κBp65蛋白的表达,Western蛋白质印迹杂交检测IκBα的蛋白质表达,半定量RT PCR检测ICAM 1mRNA含量。观察腹腔注射地塞米松后上述指标的变化。结果 大鼠给予异丙肾上腺素后,血清LDH、CK和MDA含量升高,心肌坏死,NF κBp65蛋白大量表达,IκBα蛋白质表达减弱,ICAM 1mRNA表达上升。地塞米松使升高的LDH、CK和MDA明显下降,减轻心肌坏死程度,显著抑制NF κBp65蛋白和ICAM 1mRNA表达,IκBα蛋白质表达增强。结论 儿茶酚胺大量释放引起的心肌缺血缺氧损伤中,NF κB和ICAM 1mRNA表达增加,表明抑制NF κB激活,减少ICAM 1mRNA的表达及炎性细胞因子产生是减少心肌缺血缺氧损伤的关键点之一。

隐丹参酮调节Rac1/AKT/NF-κB信号通路对脓毒症大鼠肠损伤的影响

目的:探究隐丹参酮(CRY)调节Ras相关C3肉毒素底物1(Racl)/丝氨酸-苏氨酸蛋白酶(AKT)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对脓毒症大鼠肠损伤的影响。方法:建立脓毒症大鼠模型。大鼠分为Control组、Model组、隐丹参酮高、中、低剂量组(7.0mg·kg^(-1)·d^(-1)CRY-H组、14.0mg·kg^(-1)·d^(-1)CRY-M组、28.0mg·kg^(-1)·d^(-1)CRY-L组)和隐丹参酮高剂量+NF-κB通路激活剂组(28mg·kg^(-1)·d^(-1)CRY-H+5 mg·kg^(-1)·d^(-1)PMA组),每组12只,Control组与Model组使用同等剂量生理盐水进行处理,每天1次,连续21d。用试剂盒检测脓毒症大鼠血清炎症因子、氧化应激、肠黏膜屏障指标水平;HE染色观察大鼠肠组织病理形态;免疫组化和免疫印迹法分别检测大鼠肠组织中ZO-1、occludin和通路蛋白表达。结果:与Control组比较,Model组黏膜绒毛排列紊乱,部分黏膜脱落、坏死,大量炎细胞浸润,组织病理评分较高,血清TNF-α、IL-1β、MDA、内毒素、D-乳酸水平上升,SOD水平降低,Rac1、p-AKT/AKT、p-NF-κB/NF-κB表达上调,ZO-1、occludin下调表达(P<0.05);与Model组比较,CRY-L、CRY-M、CRY-H组肠黏膜绒毛相对完整,炎细胞浸润减轻,组织病理评分降低,血清TNF-α、IL-1β、MDA、内毒素、D-乳酸水平降低,SOD水平上升,Rac1、p-AKT/AKT、p-NF-κB/NF-κB表达下调,ZO-1、occludin上调表达(P<0.05);与CRY-H组相比,CRY-H+PMA组肠黏膜细胞有较多炎细胞浸润,组织病理评分升高,血清TNF-α、IL-1β、MDA、内毒素、D-乳酸水平升高,SOD水平降低,Rac1、p-AKT/AKT、p-NF-κB/NF-κB表达上调,ZO-1、occludin下调表达(P<0.05)。结论:隐丹参酮抑制Rac1/AKT/NF-κB信号通路改善脓毒症大鼠肠损伤。

AP1与NF-κB对PPARδ基因的转录调控作用

目的研究在过氧化物酶体增长因子活化受体δ(PPARδ)表达中的相关调控因子。方法用RT-PCR扩增人类PPARδ启动子序列,通过Deletion及观测各重组体转染活性,通过电泳迁移率变更分析(EMSA)、突变等方法确定核转录因子激活蛋白1(AP1)及NF-κB对PPARδ表达的作用。结果 Deletion及重组转染后发现AP1及NF-κB因子各自结合位点突变后转染活性明显降低,同时突变其转染活性无明显变化。结论 AP1及NF-κB均可以增强PPARδ的表达活性。

EYA4通过抑制NF-κB依赖的RAP1反式激活抑制肝细胞癌的生长和侵袭

背景与目的我们之前研究表明,眼缺失蛋白同源物4(eyes absent homolog 4,EYA4)是果蝇眼部发育相关的眼缺乏蛋白家族成员之一,在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)标本中常发生甲基化和沉默,并与患者生存期短密切相关。本研究旨在探讨EYA4在HCC中作为肿瘤抑制因子的作用机制。方法转染EYA4表达质粒(pEYA4)构建稳定表达EYA4的人HCC细胞系Huh-7和PLC/PRF/5(PLC)。通过BALB/c裸鼠皮下注射稳定转染细胞建立异种移植肿瘤。组织标本来自75例病理诊断为HCC的患者。采用实时定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)、蛋白质免疫印迹和免疫组织化学的方法检测EYA4在细胞系、异种移植物和临床标本中的表达;研究了稳定转染细胞系的细胞增殖、克隆形成、侵袭性和肿瘤形成。利用基因表达芯片筛选EYA4调节的基因。通过共转染EYA4和带Flag标签的RAS相关蛋白1A(RAS-related protein 1A,RAP1A)基因的表达质粒(pEYA4和Flag-RAP1A)、功能研究、染色质免疫共沉淀、免疫荧光染色和细胞泛素化分析等方法,研究了EYA4对核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/RAS相关蛋白1(RAS-related protein 1,RAP1)信号通路的影响。结果恢复HCC细胞系中EYA4的表达可抑制细胞的增殖、抑制克隆形成、降低细胞的侵袭性和抑制异种移植肿瘤生长,在体外实验中Flag-RAP1A可逆转pEYA4的抑制作用。用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)激活NF-κB通路可增加p65与RAP1A基因启动子的结合并上调RAP1蛋白的表达。用BAY 11-7085和p65 siRNA抑制NF-κB通路,成功阻断了TNF-α诱导的RAP1上调。EYA4拮抗了TNF-α诱导的NF-κB抑制因子α(inhibitor of NF-κBα,IκBα)的磷酸化和泛素化以及p65的核易位和反式激活,进而抑制了NF-κB的活性和RAP1的表达。用calyculin A阻断EYA4的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶活性可显著消除其对NF-κB活性的抑制作用。此外,EYA4的表达与HCC临床标本中IκBα/RAP1活性呈负相关。结论我们的研究结果为明确EYA4是真正的肿瘤抑制因子提供了功能和机制的理论基础,该肿瘤抑制因子可抑制NF-κB/RAP1信号通路的异常激活,从而抑制HCC生长和侵袭。

姜黄素通过调节HMGB1/NF-κB通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的:探讨姜黄素对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)的保护作用及可能机制。方法:100只健康8周龄Sprague-Dawley大鼠采用随机数字表法分为假手术组、模型组、地尔硫䓬组、姜黄素组,每组25只。H9c2细胞分为对照组、缺氧/复氧组、姜黄素组。采用冠状动脉结扎法构建大鼠MI/RI模型,H9c2心肌细胞缺氧/复氧体外模拟MI/RI。采用BL-420S生物功能实验系统采集心电图(ECG)测量值;四唑盐(MTT)法测定H9c2细胞活性;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清和细胞上清液中的炎性细胞因子水平;苏木精-伊红(HE)染色及2,3,5-三苯基氯化四唑(TTC)观察损伤的心肌组织情况。蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/核转录因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白水平。结果:TTC染色结果显示,姜黄素组心肌灰色改变较模型组少,地尔硫䓬组与姜黄素组心肌组织病理学无明显差异;苏木精-伊红(HE)染色结果显示,姜黄素组心肌组织纤维排列尚规则,无明显出血、水肿等改变,炎性细胞数量较少,地尔硫䓬组与姜黄素组心肌组织病理学则无明显差异。与假手术组比较,模型组ST段明显抬高(P<0.05);与模型组比较,姜黄素组ST段明显降低(P<0.05)。地尔硫䓬组与姜黄素组ST段比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,缺氧/复氧组、姜黄素组H9c2细胞活力降低(P<0.05);与缺氧/复氧组比较,姜黄素组H9c2细胞活力明显升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组、地尔硫䓬组、姜黄素组大鼠血清白细胞介素(IL-)6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,HMGB1、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,地尔硫䓬组、姜黄素组大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α、CK、LDH水平,HMGB1、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白水平明显降低(P<0.05)。与对照组比较,缺氧/复氧组、姜黄素组H9c2细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α、CK、LDH水平,HMGB1、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与缺氧/复氧组比较,姜黄素组H9c2细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α、CK、LDH水平,HMGB1、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:姜黄素对大鼠心肌MI/RI损伤有保护作用,其机制可能与其参与HMGB1/NF-κB通路的调控有关。

亚低温对心肺复苏后大鼠心肌NF-κB及HIF-1α蛋白表达的影响

目的 研究亚低温治疗对心肺复苏（CPR）后大鼠心肌核转录因子-κB（NF-κB）及缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白表达的影响.方法 取SD大鼠20只, 随机分为假手术组、常温治疗组、34 ℃治疗组、32 ℃治疗组,每组5只.假手术组行动静脉置管,气管插管,手术6 h后处死取心肌组织标本.其余各组大鼠均利用窒息法制作心脏骤停CPR模型,常温治疗组在CPR后置于室温下治疗;34 ℃治疗组（34.0±0.2）℃和32 ℃治疗组（32.0±0.2）℃在CPR 0.5 h后分别给予亚低温治疗,各组均于CPR后6 h取心肌组织,运用Western-blot法测定NF-κB及HIF-1α蛋白表达.采用光镜观察各组心肌组织损伤情况.结果 与假手术组比较,CPR后各组NF-κB及HIF-1α蛋白表达明显上调（P〈0.01）.与常温治疗组比较,低温组NF-κB及HIF-1α蛋白表达下调（P〈0.05）.其中32 ℃治疗组较34 ℃治疗组NF-κB蛋白表达进一步下调（P〈0.05）,但HIF-1α蛋白表达下调不明显（P〉0.05）.结论 亚低温治疗通过抑制CPR后大鼠心肌细胞内NF-κB及HIF-1α蛋白的表达,对复苏后心肌发挥保护作用.32 ℃低温相对于34 ℃低温对心肌再灌注损伤的保护作用更强,但同时引起肌颤增多,值得重视.

阿托伐他汀对慢性间歇性缺氧兔主动脉NF-κB和ICAM-1表达的影响

目的测定主动脉内膜核转录因子(NF)-κB和细胞间黏附分子(ICAM)-1表达情况,探讨主动脉结构变化与两者之间可能存在的联系及药物干预的可能作用。方法①利用常压间歇低氧舱制备慢性间歇性缺氧(CIH)兔模型:UC新西兰兔不予任何处理,实验周期为12 w;CIH组给予连续间歇性缺氧12 w;撤销干预组给予上述间歇性缺氧8 w,后4 w撤销缺氧干预;他汀干预组持续予以相同间歇性缺氧12 w,后4 w给予阿托伐他汀干预(1.5 mg·kg-1·d-1)。②形态学实验检测:观察动脉常规光镜下结构改变(HE染色);主动脉内膜NF-κB和ICAM-1蛋白的表达情况(免疫组化,SABC法)。结果①间歇性缺氧12 w组与空白对照组相比主动脉内皮出现早期动脉粥样硬化表现。他汀干预组及CIH 8 w+停止缺氧4 w组未出现早期动脉粥样硬化表现;②间歇性缺氧12 w组NF-κB和ICAM-1在主动脉内皮细胞的表达明显升高(P<0.05);他汀干预组及间歇性缺氧8 w+停止缺氧4 w组与间歇性缺氧12 w组相比NF-κB,ICAM-1在主动脉内皮细胞的表达明显减弱(P<0.05);而他汀干预组与间歇性缺氧8 w+停止缺氧4 w组相比,NF-κB,ICAM-1在主动脉内皮细胞的表达无显著性差异。③兔主动脉内皮细胞NF-κB表达与ICAM-1表达呈正相关(r=0.836,P<0.01)。结论 CIH可导致兔早期动脉粥样硬化改变,其机制与激活NF-κB,顺序激活NF-κB调控的炎性介质ICAM-1相关。阿托伐他汀可下调内皮细胞NF-κB活性,减弱ICAM-1的表达,可能控制炎症反应,达到抗动脉粥样硬化的目的。

沙格列汀抑制NF-κB信号通路下调LPS诱导的人肾小管上皮HK-2细胞MCP-1的表达

目的探讨二肽基肽酶4(DPP-4)竞争性抑制剂沙格列汀(saxagliptin)对脂多糖(LPS)诱导状态下人肾小管上皮HK-2细胞MCP-1表达的调节作用及相关的分子机制。方法将人肾小管上皮细胞HK-2细胞分为3组,分别为对照组(Control组)、LPS+沙格列汀(LPS+SAX组)和LPS组。在干预12小时后使用RT-PCR法和western blot法对HK-2细胞MCP-1mRNA和蛋白的表达水平进行检测;并使用western blot法对HK-2细胞NF-κB p65活化水平(phospho-NF-κB p65/total NF-κB p65比值)进行分析。结果与Control组相比较,在LPS干预12小时后HK-2细胞MCP-1mRNA和蛋白的表达水平以及phospho-NF-κB p65/total NF-κB p65比值均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);但LPS组较LPS+SAX组MCP-1mRNA和蛋白的表达的升高以及phospho-NF-κB p65/total NF-κB p65比值的增加更加显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 DPP-4抑制剂沙格列汀可以通过抑制NF-κB的磷酸化下调LPS诱导的人肾小管上皮HK-2细胞MCP-1合成和释放并对其产生保护作用。

国产红葡萄酒对食饵性AS血管壁NF-κB活化及MCP-1表达的影响

目的探讨国产红葡萄酒(RW)在细胞、分子、基因调控水平的抗动脉粥样硬化(AS)作用 ,从而为RW防治AS提供实验佐证。方法采用病理技术、电泳迁移率改变分析法(EMSA)和原位杂交术检测食饵性AS血管壁的病理变化、NF -κB活化及MCP -1mRNA表达情况及RW对其干预的影响。结果与食饵性AS组各相应的时相点相比国产红葡萄酒可显著抑制不同阶段AS血管组织的增生、组织细胞NF -κB活化、显著下调其MCP -1mRNA的表达 ,并具有时间依赖性 ,RW干预12周时作用最强。结论提示国产RW可能是通过抑制NF-κB活性 ,减少MCP -1mRNA表达 ,从而阻抑了AS组织的损伤 ,延缓病变的发展。

二肽酰肽酶-4抑制剂通过PKA/NF-κB信号通路调节LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应的实验研究

目的探讨二肽酰肽酶-4(DPP-4)竞争性抑制剂沙格列汀对LPS诱导的小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)炎症反应的调节作用及相关的分子机制。方法将RAW264.7细胞分为4组,分别为对照组(Control组)、LPS组、LPS+沙格列汀(LPS+SAX组)和LPS+沙格列汀+PKA抑制剂H-89组(LPS+SAX+H-89组)。在干预6小时后使用qPCR法和western blot法对细胞ICAM-1mRNA和蛋白的表达水平进行检测;并采用western blot法对细胞PKA和NF-κB p65活化水平进行分析。结果与Control组相比较,在LPS干预6小时后RAW264.7细胞ICAM-1mRNA和蛋白的表达水平及NF-κB p65活化水平均明显上升,而PKA活化水平明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);但LPS组较LPS+SAX组ICAM-1表达和NF-κB p65活化水平的增加更明显,而PKA活化下降更加明显,差异均有统计学意义(P均<0.05)。同时发现在LPS诱导状态下沙格列汀对于ICAM-1表达和NF-κB p65活化水平的抑制作用和PKA活化水平的促进作用可被PKA抑制剂H-89显著拮抗,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论本研究显示DPP-4抑制剂可以通过调控PKA/NF-κB信号通路下调LPS诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的炎症反应,为DPP-4抑制剂应用于炎症性疾病的治疗奠定了初步的理论基础。

氨磷汀对急性放射性肠炎小鼠NF-κB通路和VCAM-1、ICAM-1基因表达的影响

目的:研究氨磷汀对急性放射性肠炎小鼠小肠组织中核转录因子kappaB(NF-κB)通路和血管间粘附分子-1(VCAM-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)基因表达的影响和意义.方法:将小鼠分成对照组、实验组、氨磷汀腹腔注射干预组,采用6Gy 60Coγ-射线全身辐射,于第1、7、14天分批处死小鼠观察病理改变.实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测不同时间点对照组、实验组和氨磷汀干预组NF-κB、VCAM-1、ICAM-1基因mRNA表达水平的变化.结果:辐射后实验组、干预组均可见明显黏膜下层微血管损伤,干预组损伤较实验组轻.辐射后第1天实验组、干预组小鼠小肠组织中NF-κB、VCAM-1、ICAM-1基因mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),干预组升高水平显著低于实验组(P<0.05);第7天实验组各基因mRNA水平均呈下降趋势但仍高于对照组(P<0.05),干预组达到或接近对照组水平;第14天实验组、干预组各基因mRNA表达水平与对照组比较无统计学差异(P>0.05).结论:急性放射性肠炎早期即发生NF-κB、VCAM-1、ICAM-1基因mRNA的表达上调,可能在辐射后微血管损伤中发挥作用,氨磷汀可能通过下调上述基因表达对微血管起到保护作用.

Maresin-1对急性胰腺炎小鼠炎症因子及组织病理损伤的影响

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路,探究Maresin-1对急性胰腺炎(AP)小鼠的影响。方法随机将50只小鼠分为假手术组(sham组)、急性胰腺炎组(AP组)、Maresin-1低剂量组(Mar-1 L组)、Maresin-1高剂量组(Mar-1 H组)和p38 MAPK信号通路抑制剂组(SB203580组),每组各10只。除sham组外,其余各组小鼠均采用腹腔注射雨蛙素联合脂多糖(LPS)建立AP模型;sham组注射等量0.9%氯化钠溶液。Mar-1 L组、Mar-1 H组和SB203580组分别在注射Maresin-1和SB203580雨蛙素3 h后,第1次腹腔注射Maresin-1(25、50 ng/kg)和SB203580溶液(5 mg/kg),12 h后进行第2次腹腔注射;sham组和AP组注射等量0.9%氯化钠溶液。采用苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠胰腺组织病理损伤;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清淀粉酶、脂肪酶、炎性因子水平;试剂盒测定胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;免疫组化法检测胰腺组织中CD68表达;RT-qPCR检测胰腺组织炎性因子及p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测胰腺组织p38 MAPK、NF-κB p65蛋白表达。结果sham组小鼠胰腺组织结构完整,无细胞坏死和出血;与sham组比较,AP组可见胰腺组织结构紊乱,腺泡细胞水肿、坏死,胰腺组织病理评分、MPO活性、血清淀粉酶和脂肪酶浓度升高,血清和胰腺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平升高,IL-4、IL-10水平降低,巨噬细胞数增多(P均<0.05);胰腺组织p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。与AP组比较,Mar-1 L组、Mar-1 H组、SB203580组胰腺损伤明显减轻,仅见腺泡细胞少量坏死与出血,胰腺组织病理评分、MPO活性、血清淀粉酶和脂肪酶浓度降低,血清和胰腺组织TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低,IL-4、IL-10水平升高,胰腺组织p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA和蛋白水平降低,巨噬细胞数减少(均P<0.05)。结论Maresin-1能够缓解AP小鼠胰腺组织病理损伤,减轻胰腺组织中性粒细胞和巨噬细胞浸润,降低胰腺及全身炎症反应,其可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路发挥作用。

异丙酚对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织细胞间粘附分子-1及核转录因子-κB表达的影响

目的观察异丙酚对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织细胞问粘附分子-1(ICAM-1)及核转录因子-κB(NF-κB)基因表达的影响,探讨异丙酚脑保护作用的机制。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为假手术组(A组)、缺血再灌注对照组(B组)和缺血再灌注异丙酚预处理组(C组),按异丙酚用量又分为50mg·kg-1、100mg·kg-1和150mg·kg-1三个亚组,缺血前10min腹腔注射。全脑缺血10min再灌注24h时,断头处死大鼠。用逆转录-聚合酶链反应技术检测海马组织ICAM-1与NF-κBmRNA的表达,用免疫组织化学方法检测海马组织ICAM-1及NF-κB蛋白的表达,用电镜检测海马组织超微结构的改变。结果脑缺血再灌注后海马组织ICAM-1与NF-κBmRNA的表达水平增高,异丙酚可下调ICAM-1与NF-κBmRNA的表达;缺血再灌注亦可明显诱导ICAM-1与NF-κB蛋白在海马的表达,异丙酚预处理可显著抑制ICAM-1与NF-κB蛋自在海马的表达;缺血再灌注后海马线粒体超微结构发生明显损害,异丙酚可减轻海马线粒体的损伤程度。结论异丙酚可能通过抑制:ICAM-1与NF-κB基因的表达而对脑缺血再灌注损伤起一定的保护作用。

基于HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路探讨大黄牡丹汤对急性胰腺炎肠损伤大鼠的干预作用及机制

目的:基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨大黄牡丹汤对急性胰腺炎肠损伤大鼠的干预作用及机制研究。方法:120只SPF级Wistar大鼠采用5%牛?胆酸钠逆行胰胆管注射制备急性胰腺炎(AP)肠损伤模型。随机分为正常组、模型组、大黄牡丹汤低、中、高剂量组(3.5、7、14 g·kg^(-1)),灌胃给药,奥曲肽组(1×10^(-5)g·kg^(-1)),皮下注射,每组20只,正常组和模型组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃,于造模前1 h及造模后每隔12 h给药1次,造模后24 h收集样本。观察大鼠一般情况;生化法检测血清中淀粉酶(AMS)、C反应蛋白(CRP);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结肠组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察胰腺和结肠组织病理形态变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中HMGB1、RAGE、NF-κB抑制因子激酶(IKK)、核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)、NF-κB mRNA及蛋白表达水平。结果:观察大鼠一般情况显示,与正常组比较,模型组大鼠出现一般生存状态不佳、扭体反应、大便次数减少及便质干等情况的改变;与模型组比较,各治疗组大鼠上述症状改善;与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤高剂量组症状改善最为明显。生化法检测血清AMS、CRP含量显示,与正常组比较,模型组大鼠AMS、CRP含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄牡丹汤组大鼠AMS、CRP含量降低(P<0.05);与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤高剂量组大鼠AMS、CRP含量明显降低(P<0.05)。ELISA检测结肠组织中TNF-α、IL-1β和IL-6含量显示,与正常组比较,模型组大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄牡丹汤组大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低(P<0.05);与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤高剂量组和奥曲肽组大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低(P<0.05)。HE染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠出现胰腺、结肠组织坏死、充血、结构不完整;与模型组比较,各治疗组大鼠的胰腺、结肠组织水肿、坏死程度明显改善;与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤高剂量组改善最为明显。Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠HMGB1、RAGE、IKK、IκBα、NF-κBmRNA表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄牡丹汤各剂量组大鼠HMGB1、RAGE、IKK、IκBαmRNA表达水平明显降低(P<0.05);与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤中、高剂量组合奥曲肽组大鼠HMGB1、RAGE、IKK、IκBα、NF-κB mRNA表达水平降低,其中以大黄牡丹汤高剂量组表现最为明显(P<0.05)。Western blot结果与Real-time PCR分析结果趋势一致。结论:大黄牡丹汤对急性胰腺炎模型大鼠的一般情况、炎症指标及胰腺和结肠组织病理状态有较好的改善作用,其作用机制可能与抑制HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路,减轻急性胰腺炎大鼠结肠组织细胞炎症反应有关。

二陈汤加味通过HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路对COPD大鼠细支气管炎症的影响

目的:观测二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠细支气管中高迁移率族蛋白1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)通路中关键分子表达的影响,探讨二陈汤加味通过HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路对COPD细支气管炎症的作用及分子机制。方法:60只SD大鼠随机分为6组:正常组、模型组、二陈汤加味低、中、高剂量组(5、10、20 g·kg^(-1))和丙酮酸乙酯(EP)组(HMGB1抑制剂),每组10只。以烟熏联合气管滴注脂多糖的方法制备COPD大鼠模型。二陈汤加味各干预组灌胃(ig)给药,并腹腔注射林格溶液4 mL;EP组ig等体积生理盐水,并腹腔注射EP(0.04 g·kg^(-1));正常组和模型组等体积生理盐水ig、并等体积林格溶液腹腔注射,连续干预21 d。酶联免疫吸附测定法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中HMGB1、趋化因子CXCL1和CXCL2、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测肺组织中HMGB1、RAGE和NF-κB p65 mRNA表达,免疫组化(IHC)检测细支气管组织中HMGB1、RAGE、磷酸化(p)-κB p65和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组用力肺活量(FVC)、第1秒末时间肺活量(FEV1)和FEV1/FVC均显著降低(P<0.01);BALF中HMGB1、CXCL1、CXCL2和MCP-1的含量均显著升高(P<0.01);肺组织HMGB1、RAGE、NF-κB p65 mRNA表达显著增加(P<0.01);HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65和α-SMA蛋白表达明显增强(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,二陈汤加味中、高剂量组FEV1/FVC均明显提高(P<0.05,P<0.01);BALF中HMGB1、CXCL1、CXCL2和MCP-1含量均明显降低(P<0.05,P<0.01);HMGB1、RAGE、NF-κB p65 mRNA表达明显减少(P<0.05,P<0.01);HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65和α-SMA蛋白表达均明显减弱(P<0.05,P<0.01)。结论:二陈汤加味能有效对抗COPD细支气管炎症反应。其机制可能与通过下调HMGB1、RAGE mRNA表达,抑制NF-κB活化,减少HMGB1、CXCL1、CXCL2和MCP-1的释放,从而抑制细支气管炎症损伤及异常修复有关。

鳖甲煎丸通过HIF-1α/NF-κB信号通路调控巨噬细胞极化的机制探讨

目的:探讨鳖甲煎丸通过调控巨噬细胞极化防治肝纤维化的作用和机制。方法:运用血清药理学方法,体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过氯化钴(CoCl_(2))刺激RAW264.7细胞建立体外缺氧模型,将细胞随机分为空白组、CoCl2模型组(200 mmol·L^(-1))、鳖甲煎丸低(0.55 g·kg^(-1))、中(1.1 g·kg^(-1))、高(2.2 g·kg^(-1))和扶正祛瘀胶囊组(0.56 g·kg^(-1)扶正祛瘀胶囊)。采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测各组细胞增殖水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测巨噬细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测巨噬细胞极化相关蛋白与HIF-1α/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平;细胞免疫荧光检测NF-κB信号通路相关蛋白、HIF-1α的分布及表达。结果:与空白组比较,CoCl2刺激24 h后,RAW264.7细胞增殖受抑制明显(P<0.05);与模型组比较,用相应含药血清处理24 h后,各用药组能促进RAW264.7细胞增殖(P<0.05)。与空白组比较,模型组HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA表达均有明显升高(P<0.05);与模型组比较,鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊处理后能不同程度的降低巨噬细胞中HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA的表达水平(P<0.05)。与空白组比较,模型组HIF-1α及M1巨噬细胞表型蛋白IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达明显升高(P<0.05),M2巨噬细胞表型蛋白IL-10表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组HIF-1α、IL-6、TNF-α蛋白表达降低(P<0.05),CD163、IL-10蛋白表达升高(P<0.05)。与空白组比较,模型组NF-κB p65、磷酸化(p)-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶α/β(p-IKKα/β)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IKKα/β、p-IκBα蛋白表达明显降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组促进HIF-1α和NF-κB p65的入核表达;与模型组比较,鳖甲煎丸和扶正祛瘀胶囊组能抑制HIF-1α和NF-κB p65的入核表达。结论:鳖甲煎丸可调控巨噬细胞极化,减轻缺氧环境下巨噬细胞相关炎症反应损伤,从而延缓肝纤维化进展,其机制可能与其调控HIF-1α/NF-κB信号通路有关。

大黄[庶虫]虫丸经p38 MAPK/NF-κB/TGF-β1通路抑制小鼠硅肺纤维化的机制探讨

目的:运用中医经方大黄[庶虫]虫丸干预小鼠硅肺纤维化模型,观察其对小鼠硅肺纤维化的影响并探讨其作用机制。方法:选用SPF级雄性昆明种小鼠36只,分为正常组,模型组,大黄?虫丸高、中、低剂量(1.560,0.780,0.390 g·kg^(-1))组,汉防己甲素组(0.039 mg·kg^(-1)),每组6只。除正常组外,其余组均用静式染毒法连续40 d吸入二氧化硅(SiO2)粉尘复制小鼠硅肺纤维化模型,并用相应药物进行干预28 d后处死小鼠,获得血清和肺组织样品,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL^(-1)β),IL-6和羟脯氨酸(HYP)的含量,运用肺组织样本进行病理切片观察,并采用蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测肺组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),核转录因子-κB(NF-κB),转化生长因子-β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Smad2,Smad3,Smad7的蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组中的TNF-α,IL^(-1)β,IL-6和HYP的含量均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,大黄[庶虫]虫丸高剂量组能够明显降低小鼠血清中TNF-α,IL-6和HYP的含量(P<0.05,P<0.01),可见大黄[庶虫]虫丸能够减轻硅肺小鼠肺部炎症。同时,与正常组比较,模型组中的p38 MAPK,NF-κB p65,TGF-β1,α-SMA,Smad2和Smad3蛋白和mRNA表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),Smad7蛋白和mRNA表达水平均显著降低(P<0.01);与模型组比较,大黄?虫丸高剂量组中的p38 MAPK,NF-κB p65,TGF-β1,α-SMA,Smad2和Smad3蛋白和mRNA表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),Smad7蛋白和mRNA表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:大黄[庶虫]虫丸能改善硅肺小鼠肺泡炎症、细胞外基质沉积的情况,因而起到减轻纤维化的作用,这可能是通过调节p38 MAPK/NF-κB/TGF-β1通路来实现的。