补骨脂素通过炎症和Ras/Raf1介导对类风湿关节炎大鼠的保护作用

目的:研究补骨脂素减少炎症和抑制Ras/Raf1表达保护类风湿关节炎大鼠的机制。方法:将SD大鼠分成对照组、模型组(类风湿关节炎大鼠模型)、补骨脂素低剂量组(22 mg/kg补骨脂素处理)、补骨脂素中剂量组(44 mg/kg补骨脂素处理)、补骨脂素高剂量组(88 mg/kg补骨脂素处理)、补骨脂素高剂量+NC组(88 mg/kg补骨脂素+阴性对照慢病毒载体处理)、补骨脂素高剂量+Ras组(88 mg/kg补骨脂素+Ras过表达慢病毒载体处理);采用Western Blotting检测大鼠的肾素-血管紧张素系统(RAS)、原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶-1(Raf1)、成骨细胞特异性转录因子(Osx)、Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、骨钙素(OC)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)蛋白表达;检测关节肿胀度,HE染色对关节组织病理评分,ELISA法检测炎症介质白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠关节组织中Ras、Raf1、MMP-3、MMP-13蛋白表达以及关节肿胀度、关节组织病理评分和IL-2、TNF-α、IL-6水平均升高,Osx、COL1A1、OC蛋白表达均降低(均P<0.05);与模型组比较,补骨脂素低、中、高剂量组大鼠关节组织中除Osx、COL1A1、OC蛋白表达均升高外,其他指标均显著降低(均P<0.05);与补骨脂素高剂量+NC组比较,补骨脂素高剂量+Ras组大鼠关节组织中Osx、COL1A1、OC蛋白表达均降低,而其他指标均显著升高(均P<0.05)。结论:补骨脂素通过减少炎症和抑制Ras/Raf1表达减轻类风湿关节炎大鼠关节损伤,促进软骨修复。

通过Ras/Raf/ERK1/2信号通路观察淫羊藿苷联合激素对激素抵抗型肾病综合征大鼠的影响

目的观察淫羊藿苷对激素抵抗型肾病综合征大鼠的疗效及可能机制的研究。方法健康雄性SD大鼠60只,空白组10只,50只制备成功的SRNS模型大鼠随机分为模型组、激素组、淫羊藿苷组、联合组各10只,连续给药6周。给药2周、4周和6周测定各组大鼠体重、24 h尿蛋白含量;末次给药结束后,检测相关生化指标;采用HE、Masson、PAS染色观察大鼠肾组织病理形态学变化情况;Tunel染色观察大鼠肾组织细胞凋亡情况;免疫荧光法检测p-ERK1/2表达情况;通过Western blot检测SRNS大鼠的Ras、A-Raf、B-Raf、ERK1/2、p-ERK1/2的蛋白含量。结果与空白组相比,模型组24 h尿蛋白量升高,ALB、Scr水平降低,TC、TG、BUN水平升高,肾小球硬化评分升高,肾组织细胞凋亡率升高,Ras、A-Raf、B-Raf、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达增加(P<0.05);与模型组相比,泼尼松组和淫羊藿苷组大鼠上述异常无明显改善,联合组24 h尿蛋白量降低,ALB、Scr水平升高,TC、TG、BUN水平降低,肾组织损伤、肾组织细胞凋亡率降低,Ras、A-Raf、B-Raf、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论淫羊藿苷可缓解SRNS大鼠肾组织损伤,保护肾功能,这可能与淫羊藿苷抑制Ras/Raf/ERK 1/2信号通路,降低肾组织细胞凋亡有关。

Up-regulation of Ras/Raf/ERK1/2 signaling in the spinal cord impairs neural cell migration, neurogenesis, synapse formation, and dendritic spine development

Background The Ras/Raf/ERK1/2 signaling pathway controls many cellular responses such as cell proliferation, migration, differentiation, and death. In the nervous system, emerging evidence also points to a death-promoting role for ERK1/2 in both in vitro and in vivo models of neuronal death. To further investigate how Ras/Raf/ERK1/2 up-regulation may lead to the development of spinal cord injury, we developed a cellular model of Raf/ERK up-regulation by over- expressing c-Raf in cultured spinal cord neurons （SCNs） and dorsal root ganglions （DRGs）.

基于肉瘤基因信号通路探讨槲皮素对乳腺癌MCF-7细胞的作用机制

目的:探讨槲皮素通过RAS/RAF/MEK1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞的作用机制。方法:将乳腺癌MCF-7细胞分为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、极高剂量组,采用CCK-8细胞活力检测法测定不同组别的MCF-7细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性;采用流式细胞术检测不同组别MCF-7细胞的凋亡率;采用蛋白质印迹法检测不同组别MEK1、RAS、YAP蛋白的表达;采用免疫荧光染色观察雌激素受体、孕激素受体染色情况。结果:与空白对照组比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组及极高剂量组的MCF-7细胞活力均出现下降,呈浓度依赖,不具有时间依赖性,差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌细胞MCF-7的晚期凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);低剂量组、中剂量组和极高剂量组MCF-7细胞的MEK1、RAS、YAP蛋白的表达出现不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.05);低剂量组、中剂量组、高剂量组及极高剂量组的MCF-7细胞中雌激素受体、孕激素受体表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:槲皮素具有针对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用,且具有浓度依赖性,其机制可能与对RAS/RAF/MEK1信号通路的抑制有关。