支气管抽吸物中矮小同源盒2和Ras相关结构域家族蛋白1ADNA甲基化检测对早期肺癌诊断价值的Meta分析

目的系统分析支气管抽吸物(包括支气管肺泡灌洗液和冲洗液)中矮小同源盒2(SHOX2)和Ras相关结构域家族蛋白1A(RASSF1A)DNA甲基化对肺癌的诊断效能。方法检索PubMed、Embase、The Cochrane Library、Web of Science、Clinical Trail、CNKI、万方数据库发表的关于SHOX2和RASSF1A甲基化对肺癌诊断价值的文献,检索日期截至2021年5月11日,进行数据提取和质量评价,使用Stata 16.0软件进行Meta分析。结果本研究共纳入20篇文献,中文文献8篇,英文文献12篇。Meta分析结果显示:SHOX2甲基化诊断肺癌合并后的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比和曲线下面积(AUC)分别为0.73、0.90、7.50、0.30和0.86。RASSF1A甲基化诊断肺癌合并后的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比和AUC分别为0.51、0.96、14.10、0.50和0.82。SHOX2和RASSF1A甲基化联合诊断肺癌合并后的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比和AUC分别为0.78、0.87、5.80、0.26、0.90。结论支气管抽吸物中SHOX2和RASSF1A甲基化对肺癌的诊断价值较高,对CT检查可疑肺癌的患者,其可能是肺癌早期筛查的重要手段。

低剂量CT结合SHOX2、RASSF1A甲基化在肺癌早期预警中的应用

目的探讨低剂量CT结合Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)、矮小同源盒基因2(SHOX2)甲基化在肺癌早期预测中的应用价值。方法选取2021年1月~2023年1月我院90例拟行肺结节手术患者,根据手术病理学分为肺良性结节组和肺癌组。2组均于术前行低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化检测,采用Kappa指数分析上述检查结果与手术病理学一致性,分析低剂量CT、SHOX2、RASSF1A甲基化与血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21)]对肺癌诊断效能,采用Spearman低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化与临床病理特征相关性。结果低剂量CT、SHOX2、RASSF1甲基化及三者联合分别确定40例、43例、46例、58例肺癌,三者联合与手术病理学诊断肺癌效能一致性Kappa值为0.951;三者联合诊断肺癌敏感度96.67%、准确度97.78%均高于三者单一诊断效能(P<0.05);肺癌患者血清CEA、SCC、NSE、CYFRA21水平均高于肺良性结节患者(P<0.05);低剂量CT联合SHOX2、RASSF1甲基化诊断肺癌效能的AUC为0.983,近似于四种血清肿瘤标志物诊断肺癌效能的AUC 0.933;不同肿瘤直径、临床分期、组织学分化肺癌患者低剂量CT检出率及SHOX2、RASSF1A甲基化阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);肺癌患者低剂量CT检出率、SHOX2及RASSF1A甲基化阳性率与肿瘤直径、临床分期呈正相关,与组织学分化呈负相关(P<0.05)。结论低剂量CT联合SHOX2及RASSF1A甲基化可用于肺癌早期预警中,临床可通过其进行早期诊断、评估病情进展程度,以针对性展开后续治疗,改善预后。

三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2基因在食管癌中的表达及意义

目的探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette transporer G2,ABCG2)基因在食管癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR方法检测44例原发性食管癌患者的癌组织、癌旁组织(距离癌2cm)及食管切缘正常黏膜(距离癌5cm以上)ABCG2的mRNA表达。结果ABCG2在食管癌原发灶组织中有较高程度的表达,其表达量为0.77±0.11,而正常食管黏膜中的表达量为0.66±0.12;其在食管癌中的表达显著高于正常黏膜(P<0.01)。ABCG2在低分化鳞癌中的表达显著高于中-高分化鳞癌(P<0.05)。食管癌中ABCG2在年龄和性别间表达无显著性差异(P>0.05)。结论ABCG2在食管癌组织中高表达可能在某种程度上参与了食管癌原发性耐药及化疗中多药耐药的形成。其可作为一种新的引起多药耐药的分子,指导临床上食管癌的化疗。

高、低表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的人鼻咽癌耐药细胞生物学特性差异研究

目的探讨高表达与低表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人多药耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞、ABCG2Low细胞)的生物学差异,分析两种细胞的耐药特点。方法分离ABCG2High和ABCG2Low细胞,检测其体外克隆形成率并分析细胞周期。流式细胞术(FCM)检测两种细胞传代前及传至第5代时ABCG2阳性表达率的差异。RT-PCR检测耐药基因ABCG2、Bcl-2、MDR1、MRP、MGMT的mRNA表达差异。MTT法检测两种细胞在1～14d的吸光度,绘制生长曲线;检测两种细胞对氟尿嘧啶、顺铂、长春新碱、卡铂、表阿霉素、柔红霉素、紫杉醇、丝裂霉素等化疗药物耐药性的差异。结果ABCG2High和ABCG2Low细胞在7d内的克隆形成率分别为25.24%±1.18%和16.28%±1.11%。FCM分析显示,ABCG2High的S期细胞占41.5%,ABCG2Low的G1/M0期细胞占63.9%。FCM分离后,ABCG2的表达率在ABCG2High细胞为98%,在ABCG2Low细胞为2%;两种细胞传至第5代,ABCG2在前者的表达率降低为75%,在后者升高至20%。RT-PCR显示,ABCG2mRNA在ABCG2High细胞中的表达明显高于ABCG2Low细胞,其他耐药基因在两种细胞中的表达无差异。生长曲线显示,ABCG2High细胞早期生长速度较ABCG2Low细胞快,后期生长速度逐渐减慢。耐药谱分析表明,ABCG2High细胞对8种抗肿瘤药物的IC50值高于ABCG2Low细胞两倍以上,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论ABCG2High细胞是一种快周期细胞,而ABCG2Low细胞为慢周期细胞,前者更具有多药耐药的特点,可用于ABCG2介导的鼻咽癌细胞非经典多药耐药的研究。

前列腺癌组织RASSF2基因甲基化及蛋白表达的检测及意义

目的:通过检测Ras相关序列家族2(RASSF2)基因在前列腺癌及前列腺增生组织中的甲基化及其蛋白表达情况,探讨该基因的表观失活在前列腺癌发生发展中的作用及意义。方法:获取前列腺癌石蜡包埋组织标本30例(实验组),前列腺增生石蜡包埋组织标本30例(对照组),石蜡组织标本切片后获取相应组织基因组DNA,通过甲基化特异性PCR技术(MSP)检测两组组织中RASSF2基因甲基化情况,通过免疫组织化学技术检测两组组织中RASSF2蛋白表达情况。结果:实验组中,RASSF2基因甲基化发生率为66.7%(20/30),RASSF2蛋白表达缺失发生率为70.0%(21/30);对照组中RASSF2基因甲基化发生率为6.7%(2/30),RASSF2蛋白表达缺失发生率为3.3%(1/30)。实验组RASSF2基因甲基化发生率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组RASSF2蛋白表达缺失发生率显著高于对照组,差异亦有统计学意义(P<0.05)。RASSF2基因异常甲基化与其蛋白表达缺失具有显著相关性(P<0.05)。结论:RASSF2基因的表观失活与前列腺癌的发生具有相关性,RASSF2基因的表观失活有望成为前列腺癌的分子诊断及治疗靶点。

苹果酸舒尼替尼诱导高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的耐药鼻咽癌细胞高表达NKG2D配体

目的:探讨苹果酸舒尼替尼(sunitinib malate,SU11248)对高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member2,ABCG2)耐药鼻咽癌细胞CNE2/DDP(ABCG2highCNE2/DDP)表达NKG2D配体的诱导作用。方法:利用免疫磁珠技术分离ABCG2highCNE2/DDP细胞及同种异体反应性自然杀伤细胞(allo-reactive natural kill cell,Allo-NK),流式细胞技术检测分离后细胞的纯度及苹果酸舒尼替尼处理前后ABCG2highCNE2/DDP细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测苹果酸舒尼替尼处理前后ABCG2highCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性。结果:ABCG2highCNE2/DDP细胞分离后ABCG2的表达率为(91.40±2.32)%,Allo-NK细胞分选后CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上。经苹果酸舒尼替尼处理后,ABCG2highCNE2/DDP细胞的NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3的表达率由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(89.12±4.56)%、(66.10±2.22)%、(67.56±4.19)%、(69.37±8.83)%、(63.28±3.31)%。在效靶比为10∶1、20∶1时,苹果酸舒尼替尼处理前后Allo-NK细胞对ABCG2highCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±13.86)%、(27.26±6.81)%及(41.12±4.12)%、(57.25±2.37)%,处理后的杀伤率有明显的提高(F=15.58,P=0.000)。结论:苹果酸舒尼替尼通过诱导高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使ABCG2highCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性明显增强。

索拉非尼对高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的鼻咽癌细胞杀伤敏感性的影响的研究

目的探讨索拉非尼提高高表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞)对同种异体反应性自然杀伤(Allo-NK)细胞的杀伤敏感性及其相关机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2High CNE2/DDP和Allo-NK细胞,并设3个实验组:①处理组(经索拉非尼10ng/ml共孵育4h的ABCG2High CNE2/DDP细胞);②未处理组(常规培养的ABCG2High CNE2/DDP细胞);③对照组(常规培养的K562细胞)。流式细胞技术检测处理组和未处理组细胞的ABCG2表达率和5种NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达率。乳酸脱氢酶(LDH)释放测定法检测Allo-NK细胞对各实验组细胞的杀伤率。结果分离后的CNE2/DDP细胞的ABCG2表达率为91.40%±2.32%,分选出的CD3-CD16+CD56+(Allo-NK)细胞纯度大于90%。未处理组的ABCG2High CNE2/DDP细胞的NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率分别为2.92%±0.33%、4.27%±0.33%、5.80%±0.62%、11.10%±3.15%、7.75%±1.14%,而处理组明显升高(分别为10.38%±1.23%、10.68%±1.26%、11.62%±1.22%、43.24%±4.42%、11.91%±0.88%;P<0.05)。在效靶比为10∶1、20∶1时,Allo-NK细胞对未处理组靶细胞的杀伤率为15.32%±1.34%、27.26%±6.81%,而对处理组靶细胞杀伤率为27.75%±4.12%、43.17%±5.92%,两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论索拉非尼通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体,使其对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强。

ATP结合盒蛋白G超家族成员2在肺癌中的表达及意义

肺癌细胞的干性及耐药性是重要的恶性指标。ATP结合盒蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2)是细胞表面的ATP结合盒蛋白家族的成员之一,依赖ATP可将药物排到细胞外。ABCG2定位于人多种肿瘤细胞的膜上,它的表达与肿瘤化学治疗多药耐药性紧密相关,目前被认为是肺癌干细胞鉴定的辅助群体标志物。此外,ABCG2的一些单核苷酸多态性与肺癌多药耐药性存在显著相关性。该文就最新ABCG2相关研究进展进行总结和归纳,重点介绍ABCG2基因的表达调控、ABCG2与肺癌干性的关系以及ABCG2的单核苷酸多态性与肺癌耐药性的相关性研究,以期为肺癌患者的临床治疗提供新的策略。

化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠Hippo信号通路相关蛋白RASSF1A、SAV1、MST2表达的影响

目的观察化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠Hippo信号通路哺乳动物不育系20样激酶2(MST2)、RAS相关区域家族亚型A(RASSF1A)、含WW结构域的人同源重组蛋白1(SAV1)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用联合造模法制备CAG大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组、维酶素组和化浊解毒方高、中、低剂量组,每组10只,同时设正常组10只。正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,维酶素组给予维酶素混悬液灌胃,化浊解毒方高、中、低剂量组给予相应剂量药液灌胃,连续12周。HE染色观察大鼠胃黏膜组织病理变化,RT-qPCR和Western blot分别检测大鼠胃黏膜组织RASSF1A、SAV1、MST2 mRNA和蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织RASSF1A、SAV1、MST2 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,化浊解毒方高、中剂量组和维酶素组大鼠胃黏膜组织RASSF1A、SAV1、MST2 mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.05),其中化浊解毒方高剂量组升高最明显。结论化浊解毒方具有干预CAG大鼠和延缓癌变进展的作用,其机制可能与上调模型大鼠抑癌基因RASSF1A、SAV1、MST2的表达相关。

三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2在肺癌A549和SPC-A-1细胞株中的表达及其意义

目的探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）在肺癌细胞株A549和SPC—A-1中的表达及其意义。方法应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测两种肺癌细胞株中该基因的表达，应用流式细胞仪检测该蛋白的表达。结果ABCG2基因与蛋白在肺腺癌细胞株A549和SPC—A-1中均有表达，且A549的表达高于SPC—A-1。结论ABCG2可能参与肺癌耐药，可能也与肺癌的发生、发展有密切相关。

汉滩病毒糖蛋白G2酵母双杂交诱饵载体的构建及初步鉴定

目的利用Ras募集系统(RRS),构建并鉴定含汉滩病毒囊膜糖蛋白G2的诱饵载体。方法将汉滩病毒76-118株囊膜糖蛋白G2基因与Ras基因连接,构建嵌合基因Ras-G2及Ras-G2’(G2’无前导肽序列)。将两个嵌合基因分别克隆入酵母表达载体pMet25,并转化至酵母温度敏感株cdc25-2,检测其对RRS系统的激活作用。结果限制性内切酶酶切鉴定表明,Met-G2和Met-G2’载体构建正确。激活试验结果为阴性。结论Met-G2和Met-G2’载体可用于从cDNA文库中筛选汉滩病毒受体。

非小细胞肺癌患者血浆 RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO 基因甲基化状态观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)、ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)、3-0-硫基转移酶-2(3-OST-2)、死亡相关蛋白激酶(DAPK)、膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)等基因启动子区域的甲基化状态。方法采用甲基化特异PCR技术对63例NSCLC患者血浆中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因是否甲基化进行观察,并以25例健康人作对照。结果 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率分别为46.0%、50.8%、26.9%、34.9%、41.3%;健康人血浆中甲基化PTPRO基因检出率为12.0%,而甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK均未检出;两者甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率相比,P均<0.05。NSCLC患者血浆中上述5种甲基化基因联合检测的敏感度为88.9%、特异度为88.0%。血浆甲基化RUNX3基因检出率与NSCLC的病理类型、临床分期以及分化程度有关(P均<0.05);甲基化RASSF1A基因检出率与NSCLC的分化程度有关(P<0.05)。结论 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率明显高于健康人。联合检测血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因有可能会有助于NSCLC的早期诊断及其生物学行为的判断。

肺癌侵袭转移与外周血RASSF1A、SHOX2甲基化水平的相关性研究

目的研究肺癌患者血浆Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)、矮小同源盒基因2(SHOX2)基因甲基化水平与肺癌侵袭转移的关系。方法选取2016年2月至2017年5月于该院就诊的96例肺癌患者为肺癌组(经组织病理学确诊);选取同期114例健康体检者作为对照组。亚硫酸氢钠处理基因组DNA后采用直接测序法检测血浆中RASSF1A、SHOX2基因甲基化水平;分析肺癌患者血浆RASSF1A、SHOX2基因甲基化与临床病理特征及预后的相关性;多因素COX回归分析影响肺癌预后的因素。结果肺癌组血浆RASSF1A、SHOX2基因甲基化阳性率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);RASSF1A、SHOX2基因甲基化与肺癌患者年龄、性别、吸烟情况、肿瘤大小、病理类型无关(P>0.05),与肺癌患者组织分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05);RASSF1A、SHOX2基因甲基化与肺癌患者预后有关(P<0.05),且RASSF1A、SHOX2甲基化组患者死亡比例高于RASSF1A、SHOX2非甲基化组;RASSF1A、SHOX2基因甲基化、TNM分期是影响肺癌患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论RASSF1A、SHOX2基因甲基化可能在肺癌侵袭转移过程中发挥重要作用,为肺癌预后评估提供了重要依据,并有可能为其基因治疗提供新的靶点。

ABCG2蛋白的表达与胃癌易感性、预后及化疗敏感性的关系研究

目的探讨ABCG2蛋白的表达与胃癌易感性、预后及化疗敏感性的关系。方法选取2015年8月至2017年5月收治的80例胃癌患者为研究对象。采用酶联免疫吸附法(ELISA)法测定胃癌患者癌组织及癌旁正常组织中ABCG2蛋白表达水平。分析胃癌患者癌组织中ABCG2蛋白表达水平与胃癌患者性别比、年龄等一般信息及肿瘤直径、分化程度、癌细胞浸润深度、淋巴结转移之间的相关性。测定并比较胃癌患者化疗前后ABCG2蛋白表达水平,并根据化疗效果,将80例胃癌患者分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、病情稳定(SD)、疾病进展(PD)组,比较4组患者ABCG2蛋白表达水平。采用多因素Logistic回归分析胃癌患者预后情况的影响因素。结果胃癌患者胃癌组织中ABCG2蛋白表达水平明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P <0. 05)。不同性别患者间、不同年龄段、不同浸润深度患者间ABCG2蛋白表达水平差异无统计学意义(P> 0. 05)。肿瘤直径≥5 cm者ABCG2蛋白表达水平明显高于肿瘤直径<5 cm者,低分化者ABCG2蛋白表达水平明显高于中高分化受试者、中分化者高于高分化者,发生淋巴结转移者ABCG2蛋白表达水平明显高于无淋巴结转移者,上述差异均有统计学意义(P <0. 05)。胃癌患者化疗后癌组织中ABCG2蛋白表达水平为明显低于化疗前,化疗效果越差的患者ABCG2蛋白表达水平越高,且差异有统计学意义(P <0. 05)。多因素Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移、ABCG2蛋白表达水平与胃癌患者预后显著相关(P <0. 05)。结论 ABCG2蛋白的表达水平与胃癌的发生、发展及化疗效果密切相关。

恶性脑胶质瘤组织中FOXC2、ABCG2、LncRNA SNHG12的表达及其临床意义

目的分析叉头框蛋白C2(FOXC2)、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)、长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因12(SNHG12)在恶性脑胶质瘤组织中的表达及意义。方法将76例恶性脑胶质瘤患者纳入观察组,另将同期收治的83例因外伤等非肿瘤原因切除脑组织者纳入对照组,统计对比2组FOXC2、ABCG2、LncRNA SNHG12表达差异。另收集胶质瘤患者的年龄等资料,分析FOXC2、ABCG2、LncRNA SNHG12表达与患者各项临床病理特征间的联系。结果观察组FOXC2、ABCG2阳性表达率高于对照组,LncRNA SNHG12相对表达量高于对照组(P<0.05)。FOXC2、ABCG2、LncRNA SNHG12表达与恶性脑胶质瘤WHO分级、淋巴结转移有关(P<0.05)。结论FOXC2、ABCG2、LncRNA SNHG12在恶性脑胶质瘤组织内呈异常高表达,三者参与肿瘤的侵袭、发展。

CD133、CD34、ABCG2蛋白表达对肺癌患者术后复发转移的预测价值

目的 探讨CD133、CD34、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达对肺癌患者术后复发转移的预测价值。方法 选取行肺癌根治术患者90例,根据术后随访期间是否发生复发转移分为复发组(n=34例)和未复发组(n=56例),收集各NSCLC患者的年龄、性别、病理分级等临床资料。实验室检测患者肺癌组织中CD133、CD34、ABCG2蛋白表达,比较不同组肺癌组织中CD133、CD34、ABCG2蛋白表达,并分析其对肺癌术后复发转移的预测价值。结果 复发组患者CD133、CD34、ABCG2蛋白阳性表达率均高于未复发组(P<0.05)。CD133、CD34、ABCG2蛋白表达与患者年龄、性别、吸烟史、病理类型、TNM分期、肿瘤直径无显著相关性(P>0.05),与细胞分化存在显著相关性(P<0.05)。根据受试者工作特征(ROC)曲线分析可知,CD133、CD34、ABCG2蛋白表达预测NSCLC患者术后复发转移的AUC分别为0.619、0.645、0.628(P<0.05),联合检测的AUC为0.733(P<0.05),高于CD133、CD34、ABCG2蛋白单独检测(P<0.05)。结论 CD133、CD34、ABCG2蛋白表达对肺癌患者术后复发转移均有一定的预测价值,且联合检测的预测价值更高。

周期蛋白G家族——细胞周期的负调节因子

周期蛋白通过与周期蛋白依赖的蛋白激酶结合而调节细胞周期进程,而且多为促进细胞分裂。最近对周期蛋白G1和G2的研究却显示出它们对细胞生长的负调节作用,进一步的研究发现二者都能与丝氨酸/苏氨酸磷酸酶PP2A结合,并与p53/mdm2/ARF功能通路作用相关。

MicroRNA-135a通过靶向Rap2a对肾细胞癌细胞迁移侵袭的影响

目的:探讨MicroRNA(miR)-135a对Ras家族小G蛋白2a(Rap2a)下游p-Akt表达及肾细胞癌(RCC)细胞迁移侵袭的影响,深入了解RCC恶化的潜在机制。方法:采用蛋白质印迹法检测正常肾组织细胞HK-2与RCC细胞Ketr-3、786-O、ACHN中Rap2a的表达水平; Target Scan软件预测靶向调控Rap2a的潜在miRNAs;双荧光素酶报告基因实验检测miR-135a与Rap2a基因的靶向关系;蛋白质印迹法检测Ketr-3细胞中Rap2a及其下游信号蛋白磷酸化蛋白激酶B(phosphate protein kinase B,p-Akt)表达;侵袭小室实验检测Ketr-3细胞的迁移侵袭能力。结果:Rap2a在正常肾组织细胞HK-2中低表达,在RCC细胞系中显著高表达;Target Scan软件预测发现miR-135a可与Rap2a的3'UTR互补结合;双荧光素酶报告基因检测与蛋白质印迹法实验均证实了miR-135a与Rap2a间的相互作用;过表达miR-135a可通过降低Rap2a及其下游蛋白p-Akt的表达抑制Ketr-3细胞的迁移侵袭能力。结论:本研究揭示了miR-135a通过靶向Rap2a/Akt信号途径抑制RCC细胞的迁移侵袭能力,miR-135a和Rap2a可能是治疗RCC的潜在分子靶点。

苦参碱通过诱导NKG2D配体高表达增强NK细胞对ABCG2high耐药鼻咽癌细胞杀伤活性

目的探讨苦参碱提高ABCG2High[三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2]耐药鼻咽癌细胞对Allo-NK细胞杀伤敏感性的机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2HighCNE2/DDP细胞及Allo-NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性。结果ABCG2HighCNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率为(91.40±2.32)%,分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上,经苦参碱处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(11.30±0.89)%、(14.29±2.61)%、(12.56±1.06)%、(43.24±4.43)%、(12.77±1.06)%。在效靶比为10:1、20:1,Allo-NK细胞对苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±1.34)%、(27.26±6.81)%及(28.53±1.37)%、(42.72±2.80)%。处理前后杀伤率有显著性差异(F=29.05,P=0.000)。结论苦参碱通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使肿瘤细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强。

苦参碱对高表达ABCG2人耐药鼻咽癌细胞NKG2D配体表达的诱导作用

目的：探讨苦参碱对高表达三磷酸腺苷（ATP）结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）人耐药鼻咽癌细胞CNE2／DDP（简写作ABCG_2H^High CNE2／DDP）NKG2D配体表达的诱导作用及其对NK细胞杀伤敏感性的机制。方法：利用免疫磁珠技术分离ABCG_2^High CNE2／DDP细胞及NK细胞，流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理前后靶细胞NKG2D配体表达率，LDH释放测定法检测经苦参碱处理前后ABCG_2^High CNE2／DDP细胞对NK细胞的杀伤敏感性。结果：ABCG_2^High CNE2／DDP细胞分离后ABCG2表达率为（91．40±2．32）％，分选后NK细胞CD3^-CD16^＋CD56^＋细胞的纯度达90％以上，经苦参碱处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率，由药物处理之前的（2．92±0．33）％、（4．27±0．33）％、（5．80±0．62）％、（11．10±3．15）％、（7．75±1．14）％分别上升到（11．30±0．89）％、（14．29±2．61）％、（12．56±1．06）％、（43．24±4．43）％、（12．77±1．06）％。在效靶比为10：1、20：1时，NK细胞对苦参碱处理前后ABCG^2^High CNE2／DDP细胞的杀伤率分别为（15.32±1．34）％、（27．26±6．81）％及（28．53±1．37）％、（42．72±2．80）％。处理前后杀伤率有显著性差异（F=29．05，P=0．000）。结论：苦参碱通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体（MICA/B、ULBP1-3），使肿瘤细胞对NK细胞的杀伤敏感性增强。