miR-7a-5p负调控Rac1表达参与HepG2细胞胰岛素抵抗

目的:探讨软脂酸诱导胰岛素抵抗的HepG2细胞中微小RNA-7a-5p(microRNA-7a-5p,miR-7a-5p)是否通过调控Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达参与细胞胰岛素抵抗。方法:应用生物信息学分析预测其下游靶分子,构建含Rac13'端非翻译区的野生型及突变型hsa-Rac1萤光素酶报告质粒,与miR-7a-5p表达慢病毒或对照空载慢病毒共转染293T细胞,检测萤光素酶活性。HepG2细胞分为软脂酸诱导的胰岛素抵抗组和正常对照组,RT-qPCR分析两组细胞miR-RNA-7a-5p的表达,Western blot分析下游靶分子蛋白的表达。HepG2细胞分为干扰慢病毒转染组和对照慢病毒转染组,转染之后,软脂酸诱导两组细胞胰岛素抵抗,分析两组HepG2细胞中脂质堆积及葡萄糖消耗情况。结果:生物信息学预测Rac1为miR-7a-5p下游分子。野生型hsa-Rac1萤光素酶报告质粒与miR-7a-5p表达慢病毒共转染后,萤光素酶较对照组显著降低(P<0.05)。胰岛素抵抗的HepG2与对照细胞组相比,miR-7a-5p表达显著下调(P<0.05),Rac1蛋白表达显著上调(P<0.05)。较对照相比,Rac1 mRNA的表达抑制增加了胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗(P<0.05),降低了胞质内脂质堆积(P<0.05)。结论:miR-7a-5p的一个潜在靶点是Rac1。miR-7a-5p通过负调节Rac1表达参与软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。

中华蟾蜍RAC2基因的克隆与表达分析

为了探究中华蟾蜍Ras相关C3肉毒菌毒物底物2(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 2,RAC2)基因(BgsRAC2基因)在细胞增殖中的作用,试验对中华蟾蜍RAC2基因进行了全长cDNA序列扩增并对其编码蛋白质进行生物信息学分析,同时检测分析了BgsRAC2基因在8种组织/器官中的表达情况。结果表明:克隆获得RAC2基因全长765 bp,其开放阅读框(ORF)为579 bp,编码192个氨基酸;BgsRAC2氨基酸序列与非洲爪蟾的相似度最高,达96.88%;BgsRAC2蛋白的分子质量为21.36 ku,理论等电点为7.54,二级结构多为无规则卷曲,含Rho家族标志性保守结构域,无信号肽和跨膜结构域;BgsRAC2基因在肾脏中相对表达量最高,在耳后腺中表达量最低,在耳后腺和皮肤中的相对表达量显著低于舌、心脏和肾脏(P<0.05)。结合RAC2功能,推测BgsRAC2基因可能与中华蟾蜍造血细胞增殖有关。

PI3K/Akt信号通路参与LPS诱导大鼠肺微血管内皮细胞表达RACK1及rac1

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)表达活化的蛋白激酶C受体1(RACK1)和ras相关C3肉毒菌毒物底物1(rac1)的影响。方法体外培养大鼠PMVEC:①LPS量效组:0、1、5、10 mg/L LPS与大鼠PMVEC孵育12 h;②LPS时效组:10 mg/L LPS与PMVEC孵育0、3、6、8、12、24 h;③IGF-1时效组:100 ng/ml IGF-1与PMVEC孵育0、3、6、8、12、24 h;④LPS+LY294002组:100 ng/ml LY294002预孵育PMVEC 1 h后加入10 mg/L LPS继续孵育12 h,设空白组、LPS组和LY294002组为对照。所有干预结束后Western blot法检测RACK1、rac1及p-Akt蛋白表达。结果①LPS量效组:RACK1、rac1及p-Akt蛋白表达量均呈浓度依赖性增加,各蛋白组组内比较差异均有统计学意义:(F=120.455,P<0.001)、(F=165.813,P<0.001)及(F=309.346,P<0.001)。②LPS时效组:RACK1和rac1蛋白表达呈时间依赖性增加,LPS刺激24 h后达最高,各蛋白组组内比较差异均有统计学意义:(F=454.034,P<0.001)和(F=423.630,P<0.001);p-Akt表达自3 h(0.460±0.089)上调,12 h达最高(2.022±0.244),24 h(1.264±0.074)仍高于0 h(0.237±0.063),组间比较差异有统计学意义(F=137.726,P<0.001)。③IGF-1时效组:IGF-1诱导PMVEC表达RACK1、rac1及p-Akt呈时间依赖性增加,各组组间比较差异有统计学意义(F=188.293,P<0.001)、(F=115.071,P<0.001)及(F=60.175,P<0.001)。④LY294002干预组:LPS+LY294002作用PMVEC后:RACK1蛋白表达量较LPS组下调[(0.732±0.137)vs(1.498±0.167),P<0.001];rac1蛋白表达量较LPS组下调[(0.758±0.084)vs(1.384±0.170),P<0.001];p-Akt蛋白表达量较LPS组下调[(0.492±0.148)vs(1.106±0.219),P<0.001]。结论 PI3K/Akt信号通路通过干预RACK1和rac1表达,参与LPS致PMVEC损伤。

乳腺癌组织中Ras相关C3肉毒菌毒物底物1和缺氧诱导因子1α蛋白的表达及其临床意义

目的探讨Ras相关c3肉毒菌毒物底物1（Rac-1）与缺氧诱导因子1d（HIF-1α）在乳腺癌中的表达及其与临床分期、组织学分级及激素受体状态的关系。方法乳腺癌标本共139例，应用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中Rac-1和HIF-1α蛋白的表达，并结合临床病理因素及激素受体状态进行统计学分析。结果Rac-1、HIF-1α在乳腺癌组织中的阳性率分别为64．75％（90／139）和65．47％（91／139），二者均与TNM分期及组织学分级有关（均P〈0．05），与年龄、性别、组织类型、月经状态无关（均P〉0．05）。Rac-1、HIF-1α在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌组织中表达差异无统计学意义（X2=1．1229，x2=0．1786，均P〉0．05）。在乳腺癌组织中，Rac-1与HIF-1α的表达呈正相关（L=0．414，P〈0．01）。结论Rac-1和HIF-1α在乳腺癌组织中的表达具有相关性，可能成为反映乳腺癌生物学行为的新型分子标志物，阻断二者之间的联系在乳腺癌的治疗中可能具有较高的临床意义。