RAS信号途径参与干扰素-α抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的探讨RAS信号途径在干扰素-α(IFN-α)抑制大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的作用。方法应用转染IFI204 siRNA和/或IFN-α瞬时干预体外培养的大鼠VSMCs,以非特异性siRNA转染组为对照组,用MTT法测定细胞活力,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR法和Western blot分别检测P204 mRNA、P204和Ras蛋白的表达及RAF与ERK的磷酸化水平。结果与对照组比较,IFN-α组P204 mRNA和蛋白表达上调(P<0.01),细胞活力和细胞周期G1/S转换下调(P<0.01),伴RAS蛋白表达减少(P<0.01),RAF及ERK磷酸化水平下降(P<0.01);转染IFI204 siRNA后再加IFN-α干预,P204 mRNA及蛋白表达下调(P<0.01),而G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.01),且RAS蛋白表达和RAF及ERK磷酸化水平亦下调(P<0.01)。结论 RAS信号途径参与IFN-α抑制大鼠VSMCs增殖。

干扰素α通过P204和RAS信号途径诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡

目的观察干扰素-α(IFN-α)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响,并探讨其部分机制。方法将VSMCs分为A、B、C 3组,A组转染非特异性siRNA,B组予IFN-α干预后转染非特异性siRNA,C组予IFN-α干预后转染IFN诱导蛋白204基因(IFI204)siRNA,均培养至48 h收集细胞。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IFN诱导蛋白204(P204)mRNA表达,Western blot检测P204、RAS蛋白表达及RAF/ERK磷酸化变化,流式细胞仪Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡。结果与A组比较,B组P204 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),细胞凋亡增多(P<0.05),伴RAS蛋白表达减少(P<0.05),RAF/ERK磷酸化水平下降(P<0.05);C组P204 mRNA及蛋白表达下调(P<0.05),细胞凋亡减少(P<0.05),RAS蛋白表达增多和RAF/ERK磷酸化水平上调(P<0.05)。结论 P204及RAS信号途径参与IFN-α诱导大鼠VSMCs凋亡过程的调控。

Mfn2基因抑制Ras-PI3K-Akt信号途径并诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡

目的应用腺病毒介导的转基因技术,研究过表达线粒体融合素基因-2(mitofusin-2,Mfn2)对WKY大鼠主动脉血管平滑肌细胞(rVSMCs)凋亡的影响并探讨其相关的信号通路。方法体外培养rVSMCs,感染含有Mfn2基因的腺病毒载体(Adv-Mfn2-GFP)。通过免疫组化染色显示细胞凋亡的形态学特征;采用琼脂糖凝胶电泳,Cell DeathELISA观察过表达Mfn2基因对细胞凋亡的影响;用Western blot检测感染Mfn2基因后不同时间点的磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)水平的变化。结果rVSMCs感染Adv-Mfn2-GFP后能有效表达出相应蛋白;过表达Mfn2基因能明显促进rVSMCs凋亡,并抑制ET-1诱导的Akt活化和ERK活化,此作用显示出时间依赖性,且Akt活化受到的抑制更明显。结论过表达Mfn2基因能明显促进WKY大鼠主动脉血管平滑肌细胞凋亡,其分子机制是抑制Ras信号途径的活化,分子作用靶点可能是Ras-PI3K-Akt信号通路。

PGE2/PGE2-R介导的RAS/ERK及PI3K/AKT信号途径与子宫肌瘤发病机制的研究

目的探讨前列腺素E2(PGE2)/前列腺素E2受体(PGE2-R)介导的RAS/ERK及PI3K/AKT信号途径与子宫肌瘤发病机制的关联。方法收集30例子宫肌瘤和其邻近正常的平滑肌组织,Real-time PCR检测样本PGE2-R(EP1)表达,Western blot检测PGE2和PGE2-R(EP1)的表达;培养子宫肌瘤原代细胞,分别加入PGE2-R(EP1)抑制剂sc-51322或激动剂17-PT-PGE2,分为原代细胞组、原代+sc-51322组和原代+17-PT-PGE2组;采用CCK8检测细胞增殖;RT-PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)的表达;Western blot检测PGE2、PGE2-R(EP1)、PCNA、TGF-β、IGF-1、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、p-ERK1/2的表达。结果子宫肌瘤的PGE2-R(EP1)的mRNA表达量显著高于平滑肌组织(P<0.01)。子宫肌瘤组织PGE2和PGE2-R(EP1)的蛋白表达量亦显著高于正常平滑肌组织(P<0.01)。在培养72 h后,与原代细胞组比较,原代+sc-51322组细胞增殖受到显著抑制(P<0.01),而原代+17-PT-PGE2组中细胞的增殖活性显著增加(P<0.01)。原代+sc-51322组中细胞PCNA、TGF-β、IGF-1 mRNA表达量显著低于原代细胞组,原代+17-PT-PGE2组中细胞PCNA、TGF-β、IGF-1 mRNA表达量显著高于原代细胞组。原代+sc-51322组中的细胞PGE2、PGE2-R(EP1)、PCNA、TGF-β、IGF-1、p-AKT和p-ERK1/2蛋白表达量显著低于原代细胞组,原代+17-PT-PGE2组PGE2、PGE2-R(EP1)、PCNA、TGF-β、IGF-1、p-AKT和p-ERK1/2蛋白表达量显著高于原代细胞组(P<0.01)。结论 PGE2和PGE2-R(EP1)通过介导的RAS/ERK及PI3K/AKT信号途径来参与调控子宫肌瘤发病。

Ras／MEK的激活能通过降低STAT2水平抑制干扰素-α的抗病毒效应

干扰素诱导抗病毒因子表达从而抑制病毒感染的能力依赖于细胞的抑制作用。RAS／MEK途径是细胞抑制作用的途径之一,因为在干扰素存在的情况下,Ras／MEK的激活使得病毒复制。本研究的机理如下：通过激活的Ras／激酶抑制干扰素效应发现,在Ras转化成NIH3T3（RasV12）细胞时,能诱导抗病毒蛋白的反应导致干扰素受损。抑制的Ras／MEK途径恢复了干扰素介导的诱导抗病毒基因,表明激活的Ras中断干扰素的上游抗病毒基因的转录通径。事实上,与矢量控制细胞相比,干扰素诱导磷酸化的信号转导和转录激活因子1（sTAT1）和2（STAT2）可抑制RasV12细胞。

基于腺苷A3受体途径针刺对足三里浅筋膜cAMP/Epac及Ras/MAPK途径的调节作用研究

目的:探讨针刺对足三里浅筋膜cAMP/Epac、Ras/MAPK途径的调节及其与腺苷A3受体途径之间的关系。方法:大鼠随机分为对照组、针刺组、针刺+IB-MECA组和针刺+Reversine组,各组在针刺后20min取足三里穴位区浅筋膜标本,HE和Masson染色检测针刺对组织结构及胶原沉积的影响,Real-Time PCR检测cAMP、Epac、Ras、ERK1/2 mRNA表达,Western Blot检测cAMP、Epac、Ras、p-ERK1/2、ERK、p-P38、P38等蛋白表达。结果:针刺可引起浅筋膜组织细胞排列紊乱,有细胞脱落现象,cAMP、Epac mRNA表达下调,Ras、ERK1/2 mRNA表达上调,cAMP、Epac信号蛋白表达下调,Ras、p-ERK1/2、p-P38信号蛋白表达上调,腺苷A3受体激动剂IBMECA可加强上述改变,而腺苷A3受体拮抗剂Reversine可减弱该效应。结论:腺苷A3受体激活后镇痛可能与上调浅筋膜组织Ras/MAPK途径、下调CAMP/Epac途径有关。

细胞内信号分子传导的研究进展

近年来有关细胞内信号传导的研究,着重体现在Ca2+信号传导途径及相应的蛋白质分子如蛋白激酶C(PKC)、钙调素(CaM)、钙调素激酶Ⅱ(CaMKⅡ),同时也对Ras途径中出现的Vav、Rap、Crk、C3G等蛋白质分子以及cAMP和NFκB途径作了有益的补充与修改.细胞外信号分子通过以上4种途径及其相互通讯(crosstalk),激活了某些蛋白激酶,调控了基因转录及其他相关功能。

IL-6信号通路与肿瘤

IL-6（interleukin-6）是迄今为止发现的功能最为广泛的细胞因子之一,参与调节免疫反应、血细胞的生成及多种细胞的增殖和分化。IL-6通过与其受体结合,继而活化胞内一系列信号蛋白分子,最终实现IL-6反应基因的表达。起初对IL-6的研究是将其作为一种炎性因子,

RasG及相关蛋白与盘基网柄菌细胞增殖相关性的研究

RasG是盘基网柄菌单细胞增殖过程中的关键蛋白,其基因的异常表达常会导致细胞增殖速度的改变。经观察发现,尿囊酸酶基因干扰后的盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)细胞(RNAi-allC)的分裂速度明显快于野生型KAx-3细胞。为探讨RasG及相关蛋白参与盘基网柄菌细胞增殖的调控机制,该文使用实时荧光定量PCR检测受体酪氨酸激酶/Ras途径的disc I、myo I、gef R、rasG、mkk A、mek A及erk A在KAx-3和RNAi-allC细胞中mRNA水平上的表达情况。蛋白免疫印迹检测两细胞中Disc I和RasG的蛋白含量。实时荧光定量PCR结果显示,所有检测的基因在两种类型细胞中的表达均存在差异;相对于KAx-3细胞,RNAi-allC细胞除disc I和rasG显著下调外,其他基因均明显上调。蛋白免疫印迹结果显示,RNAi-allC细胞中Disc I和RasG的蛋白含量明显少于野生型细胞(P<0.05)。这些数据提示,尿囊酸酶基因的干扰引起了RasG和RasG上下游蛋白含量的变化,最终导致细胞周期缩短,细胞增殖加快。说明RasG及相关蛋白可能参与了盘基网柄菌细胞增殖的调控。

关于肝癌发生相关基因的研究进展

我国肝癌的发病率位居全球首位,在各种癌症的病死率中,肝癌排列第二位(仅次于胃癌),而且大多肝癌病例发现较晚,治疗成本高昂且效果差。近年来乙型、丙型和丁型肝炎病毒已被证实会增加肝癌发生的几率,尤其是前两者在我国的肝癌患者中检出率很高。随着分子生物学的发展,基因水平的预测和诊断肝癌技术越来越受到全世界的关注,肝癌多态性,易感性及候选基因也成为探究的新靶点。本文着重介绍了这些国内外基因和信号途径的目前研究情况,进一步的探究与肝癌的发病机理之间的联系。

干扰素诱导蛋白16 siRNA对干扰素α诱导的人血管内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨干扰素诱导蛋白16(IFI16)siRNA对干扰素-α(IFN-α)诱导的人血管内皮细胞(HVECs)凋亡的影响及其机制。方法:应用转染IFN-α和(或)IFI16siRNA瞬时干预体外培养的HVECs,分别设空白组为阴性对照组,IFN-α加非特异性siRNA转染组为对照组,RT-PCR法检测IFI16mRNA表达,流式细胞仪Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡,Western blotting检测蛋白表达及细胞增殖信号通路相关蛋白磷酸化水平。结果:与阴性对照组比较,对照组及IFN-α组IFI16mRNA和蛋白表达上调,细胞凋亡增多,伴RAS蛋白表达减少,RAF、ERK磷酸化水平下降(P<0.01);IFN-α加IFI16siRNA组IFI16mRNA及蛋白表达下调,细胞凋亡减少,RAS蛋白表达增多,RAF及ERK磷酸化水平升高(P<0.01)。与对照组比较,IFN-α加IFI16siRNA组IFI16mRNA和蛋白表达减少,细胞凋亡减少,伴Ras蛋白表达增多,RAF、ERK磷酸化水平上调(P<0.01);而IFN-α组上述指标差异无统计学意义。在上述过程中,P38及AKT蛋白磷酸化水平无明显变化。结论:RAS信号途径参与IFI16siRNA抑制IFN-α诱导的HVECs凋亡。

白细胞介素-6信号通路在银屑病发病机制中的研究进展

银屑病是一种病因不明的自身免疫性炎症性多基因遗传的皮肤疾病,其病理变化的形成需要多种信号通路和细胞因子的共同参与.近年来关于银屑病相关细胞因子信号转导通路及细胞调控信号的研究受到广泛关注,其中IL-6触发的三条途径,包括Ras/Raf/MEK/ERK途径、PI3K/AKt途径和JAK/STAT途径,共同促进银屑病角质形成细胞增殖、炎症反应及血管生成等病理变化;下面针对IL-6信号通路在银屑病发病机制中的研究进展做一综述.