鸟苷酸交换因子ARHGEF 10功能鉴定及其与肿瘤恶性表型间的关系研究

目的 Dbl家族鸟苷交换因子(GEFs)是Rho家族蛋白发生恶性转化的主要调控单位,它通过使Rho蛋白从无活性的GDP形式转换为GTP形式的Rho蛋白而发挥作用。本研究对一个GEF分子-ARHGEF 10进行了结构和功能上的初步探究,对该分子在肿瘤发展过程中扮演的角色进行讨论。方法Realtime PCR对ARHGEF 10在人体42种正常组织中的表达情况进行了测定;GST-pulldown技术对ARHGEF 10的体内GEF活性进行了检测;双荧光素酶报告基因检测技术对下游小分子进行转录因子活性检测;应用免疫荧光双染标记法完成了高表达ARHGEF 10对正常细胞骨架形态的影响;在细胞表型实验中分别使用CCK8法、Transwell法及软琼脂克隆形成实验检测了高表达ARHGEF 10对细胞增殖侵袭迁移及体外成瘤能力的影响。结果生物信息学分析结果显示ARHGEF10分子量为156 k D,具有典型的Dbl家族分子结构域,在肺组织中表达量最高,能够促使正常成纤维细胞中的应力纤维(Stress fiber)增多,同时促进细胞增殖、侵袭及克隆形成,体外转录因子活性检测发现该基因可能与JAK/STAT通路有关。结论 ARHGEF 10是一个典型的鸟苷交换因子家族分子,能激活Rho家族分子Rho A,具有明显的癌基因特征。

Rho蛋白鸟苷酸交换因子11基因R1467H多态性与多囊卵巢综合征的相关性研究

目的研究Rho蛋白鸟苷酸交换因子11(ARHGEF11)基因R1467H多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)及其胰岛素抵抗(IR)的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术对136例PCOS患者和117名健康对照者ARHGEF11基因R1467H位点进行基因分型;同时进行人体测量学和代谢指标的检测。结果在PCOS组和对照组中,ARHGEF11基因R1467H位点的基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05);PCOS组GA/AA基因型的空腹胰岛素和HOMA2-IR水平明显高于GG基因型(P<0.05),对照组GA/AA基因型的空腹血糖显著高于GG基因型(P<0.05),这种统计学差异经年龄、体质量指数校正后依然存在(P<0.05)。结论 ARHGEF11基因R1467H多态性与PCOS的发病无关,但可能与PCOS患者IR抵抗有关。

鸟苷酸交换因子C3G过表达对高糖诱导心肌细胞H9C2凋亡的影响及机制

目的观察鸟苷酸交换因子C3G过表达对高糖诱导心肌细胞H9C2凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法将对数生长期的心肌细胞随机分为2组,每组备3份,分别用空白试剂、阴性病毒、过表达C3G慢病毒感染24 h,将上述其中一组培养基置换为含5. 5 mmol/L D-葡萄糖的培养基,标记为空白组、阴性病毒组、过表达C3G组;另一组培养基置换为含33. 3 mmol/L D-葡萄糖的培养基,标记为空白+高糖组、阴性病毒+高糖组、过表达C3G+高糖组;采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞中C3G、接头蛋白L(Crk L)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)表达。结果与空白组、阴性病毒组比较,过表达C3G组细胞凋亡率降低,而空白+高糖组、阴性病毒+高糖组细胞凋亡率增加(P均<0. 05);与空白+高糖组、阴性病毒+高糖组比较,过表达C3G+高糖组细胞凋亡率降低(P均<0. 05)。与空白组、阴性病毒组比较,过表达C3G组C3G、p-ERK1/2蛋白表达均增加(P均<0. 05)而Crk L蛋白表达无差异,空白+高糖组、阴性病毒+高糖组C3G、p-ERK1/2和Crk L蛋白表达降低(P均<0. 05);与空白+高糖组、阴性病毒+高糖组比较,过表达C3G+高糖组C3G、p-ERK1/2蛋白表达均增加(P均<0. 05),而Crk L蛋白表达差异无统计学意义。结论 C3G过表达可显著抑制高糖诱导的心肌细胞H9C2凋亡,其作用机制可能与上调p-ERK1/2蛋白表达有关。

非肝炎病毒相关性肝细胞癌组织中鸟苷酸交换因子ECT2的表达变化及其意义

目的观察非肝炎病毒相关性肝细胞癌(以下简称肝癌)组织中鸟苷酸交换因子ECT2的表达变化,探讨其与肝癌患者临床病理特征的关系。方法 78例非肝炎病毒相关性肝癌手术切除标本,同时每例患者另取癌旁组织标本作为对照。采用免疫组织化学染色法检测肝癌及其癌旁组织中的ECT2蛋白,RT-PCR检测ECT2 mRNA,比较不同临床病理参数肝癌患者ECT2蛋白表达阳性例数。结果非肝炎病毒相关性肝癌及其癌旁组织ECT2蛋白表达阳性率分别为71. 8%(56/78)、38. 5%(30/78),ECT2 mRNA相对表达量分别为0. 53±0. 05、0. 38±0. 09,两者比较P均<0. 05。肝癌患者低肿瘤分化者、肿瘤直径≥5 cm者、甲胎蛋白水平≥100 ng/m L者、有微血管癌栓者均较中高肿瘤分化者、肿瘤直径<5 cm者、甲胎蛋白水平<100 ng/m L者、无微血管癌栓者ECT2蛋白表达阳性例数多(P均<0. 05)。结论非肝炎病毒相关性肝癌组织中ECT2表达高,ECT2蛋白表达可能与肝癌的复发、转移有关。

结肠癌组织RASGRF1蛋白表达与基因甲基化状态变化及其临床意义

目的探讨结肠癌组织Ras蛋白特异性鸟苷酸释放因子1(RASGRF1)蛋白表达与基因甲基化状态变化及其临床意义。方法取手术切除的结肠癌组织及其配对的癌旁正常组织各81例份,采用免疫组化法检测RASGRF1蛋白表达,采用甲基化特异性PCR法检测RASGRF1基因甲基化状态。分析RASGRF1蛋白表达与基因甲基化状态以及二者与患者临床病理特征的关系。结果结肠癌组织RASGRF1蛋白阳性表达率明显低于癌旁正常组织(χ^2=51.995,P<0.01),RASGRF1基因甲基化阳性率明显高于癌旁正常组织(χ^2=44.100,P<0.01)。结肠癌组织RASGRF1蛋白阳性表达与RASGRF1基因甲基化阳性呈负相关关系(ρ=-0.486,P<0.05)。结肠癌组织RASGRF1蛋白阳性表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤直径、组织分化程度无关(P均>0.05);结肠癌组织RASGRF1基因甲基化阳性与肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤直径、组织分化程度无关(P均>0.05)。结论结肠癌组织RASGRF1蛋白低表达、RASGRF1基因甲基化异常升高,二者呈负相关关系,且均与肿瘤TNM分期和淋巴结转移有关。

胃癌组织中RASGRF1基因甲基化及蛋白表达与其临床意义

目的:探讨胃癌组织中Ras蛋白特异性鸟苷酸释放因子1(RASGRF1)基因甲基化及蛋白表达以及临床意义。方法:收集80例胃癌病人病历资料,采用免疫组织化学法检测80例胃癌组织和相应癌旁组织中RASGRF1蛋白表达情况,采用甲基化特异性PCR检测RASGRF1基因甲基化状态,分析胃癌组织中RASGRF1基因甲基化及蛋白表达的相关性,并观察胃癌组织中RASGRF1基因甲基化状态及蛋白表达情况与病人临床病理参数的关系。结果:胃癌组织和相应癌旁组织中RASGRF1蛋白表达与基因甲基化表达情况差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析结果显示,胃癌组织中RASGRF1蛋白表达与基因甲基化呈负相关关系(P<0.01);胃癌组织中RASGRF1蛋白表达与性别、年龄、肿瘤直径、组织学分化程度、发生远处转移无关(P>0.05),与肿瘤分期有关(P<0.05);胃癌组织中RASGRF1基因甲基化与性别、年龄、肿瘤直径、组织学分化程度无关(P>0.05),与肿瘤分期、发生远处转移有关(P<0.05和P<0.01)。结论:胃癌组织中RASGRF1基因甲基化和蛋白表达二者呈负相关关系,RASGRF1基因甲基化及蛋白表达与肿瘤分期、发生远处转移有一定关系。

Ras和Sos1蛋白在上皮性卵巢恶性肿瘤组织中的表达及临床意义

目的检测Ras和Sos1蛋白在上皮性卵巢恶性肿瘤中的表达,分析两种蛋白表达水平与上皮性卵巢恶性肿瘤临床病理指标的相关性。方法利用免疫组织化学SABC法检测62例上皮性卵巢恶性肿瘤组织、5例交界性上皮性卵巢肿瘤、15例卵巢上皮性囊腺瘤、18例正常卵巢组织中Ras与Sos1蛋白的表达情况,统计学分析两种蛋白表达水平与肿瘤恶性程度指标的相关性。结果 (1)Ras和Sos1在上皮性卵巢恶性肿瘤组织中的表达水平显著(P<0.05)高于在其它组织中的表达;(2)两种蛋白在上皮性卵巢恶性肿瘤细胞中的表达部位均以细胞膜和细胞浆同时表达为主;(3)Ras的表达程度(光密度值)与病理分型有相关性(P<0.05):其在浆液性卵巢癌的表达比在其他病理类型的表达更为显著,而Sos1蛋白表达与这些病理参数无相关性;(4)两种蛋白表达程度高的患者无瘤生存时间短,但不具有显著性。结论 Ras、Sos1这两种蛋白与上皮性卵巢恶性肿瘤的发生和发展可能存在内在联系;Ras蛋白的表达存在组织类型的差异,可用来支持卵巢浆液性腺癌的特异性诊断;统计学分析显示,两种蛋白表达程度高的患者,无瘤生存时间较低表达患者更短,但可能由于病例数较少有关,该结果不具备显著性,这需要扩大样本量进一步研究。

慢病毒介导Ras-GRF1调控肝癌干细胞干性维持与自我更新能力的机制

目的:探究Ras蛋白特异性的鸟苷酸释放因子1(Ras protein specific guanylate releasing factor 1,Ras-GRF1)在肝癌干细胞(cancer stem cells,CSC)生物学特性及自我更新中的作用,并初步探究其作用机制。方法:实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测人正常肝细胞系(HL-7702)和不同肝癌细胞系(Huh7、HepG2、Hep3B、CLC4、CLCl3、SMMC-7721)中Ras-GRF1表达水平;流式细胞术分选出肝癌干细胞,利用Ras-GRF1-pCMV6-GFP重组慢病毒感染肝癌干细胞,MTT法、EdU染色和平板克隆形成实验检测过表达Ras-GRF1对肝癌干细胞增殖能力的影响;Transwell小室实验检测过表达Ras-GRF1后肝癌干细胞迁移与侵袭变化;成球实验检测过表达Ras-GRF1后肝癌干细胞的自我更新能力;蛋白免疫印迹(Western blot)检测肿瘤干细胞中Hippo信号通路关键蛋白大肿瘤抑制因子(large tumor suppressor,LATS)、Yes协同蛋白(Yes cooperative protein,YAP)和哺乳动物STE20样蛋白激酶(mammalian STE20-like protein kinase,MST)的蛋白及磷酸化表达水平。结果:不同肝癌细胞中Ras-GRF1 mRNA表达量较人正常肝细胞中显著降低(P<0.05);分离到的肝癌干细胞在感染Ras-GRF1-pC MV6-GFP重组慢病毒后,细胞中RasGRF1 mRNA表达量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);在两种肝癌干细胞HepG 2-CSC和SMMC-7721-CSC中,相较于空白对照组,Ras-GRF1-pC MV6组细胞增殖活性显著降低,EdU阳性染色数目和细胞克隆形成数目均显著减少,细胞迁移与侵袭数目也均显著减少,细胞成球能力明显降低,p-LATS/LATS、pYAP/YAP及p-MST/MST蛋白表达显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:通过慢病毒介导Ras-GRF1在肝癌干细胞中过表达后,能够抑制肝癌干细胞的增殖、迁移与侵袭,降低自我更新能力,其机制可能与调控Hippo信号通路相关。

电针对佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜VEGF/Vav2/Rac1信号通路的影响

目的观察电针对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠膝关节滑膜组织内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、鸟嘌呤核苷酸交换因子2(vav guanine nucleotide exchange factor 2,Vav2)和Ras相关C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达的影响,探究电针干预类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)血管新生的可能机制。方法将40只SPF级SD雄性大鼠随机分成4组(空白组、模型组、西药组和电针组),每组10只。除空白组,其他3组采用尾根部皮下注射完全弗氏佐剂制成AA大鼠模型。造模后第2天开始干预,电针组进行电针干预,以左侧足三里与关元穴配穴,右侧足三里与同侧阿是穴配穴,每次20 min,每天干预1次,共干预21次;西药组给予甲氨蝶呤灌胃给药,每周1次,共干预3次。观察各组体质量、关节红肿等一般情况,每3天测量1次大鼠后双侧足跖容积。干预结束后,通过大鼠一般情况、体质量、足跖容积分析各组大鼠足跖肿胀程度,HE染色观察AA大鼠膝关节滑膜组织的病理形态学,免疫组织化学法检测膝关节滑膜组织内CD31表达变化,Western blot法检测大鼠膝关节滑膜组织VEGF、Vav2和Rac1蛋白表达量。结果与空白组相比,模型组大鼠第21天足跖容积均明显增大(P<0.01),膝关节滑膜组织出现显著性病理改变,CD31表达量明显升高(P<0.05),VEGF、Vav2、Rac1蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与模型组相比,西药组足跖容积在第21天显著减小(P<0.01),膝关节滑膜组织病理改变明显改善,VEGF、Vav2表达量明显下降(P<0.05),Rac1蛋白表达量显著下降(P<0.01);电针组足跖容积在第21天显著减小(P<0.01),膝关节滑膜组织病理改变明显改善,VEGF、Rac1表达量明显下降(P<0.05),Vav2蛋白表达量显著下降(P<0.01)。结论电针改善RA的作用机制可能与抑制VEGF/Vav2/Rac1信号通路,进而抑制血管新生有关。

RASGRF1和PGAM1在胃癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的:探讨Ras蛋白特异性鸟苷酸释放因子1(RASGRF1)和磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)在胃癌组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法:选取2014年2月-2016年10月于本院行手术治疗的85例胃癌患者为研究对象,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌组织和对应的癌旁组织中RASGRF1和PGAM1的mRNA表达,免疫组织化学法检测RASGRF1和PGAM1蛋白表达,分析RASGRF1和PGAM1蛋白表达与患者临床病理特征的关系。Kaplan-Meier法分析RASGRF1和PGAM1蛋白表达与患者预后的关系。Cox比例风险模型分析影响胃癌患者预后的多因素。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织中RASGRF1的mRNA和蛋白阳性表达率均显著降低(P<0.05),PGAM1的mRNA和蛋白阳性表达率均显著升高(P<0.05)。胃癌组织中RASGRF1和PGAM1的蛋白表达均与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05),而与患者年龄、性别和肿瘤直径无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,胃癌组织中RASGRF1阳性表达的患者3年生存率显著高于阴性表达患者(P<0.05),PGAM1阳性表达的患者3年生存率显著低于阴性表达患者(P<0.05)。Cox分析结果显示,RASGRF1和PGAM1均是影响胃癌患者预后的独立因素(P<0.05)。结论:胃癌组织中RASGRF1呈低表达,PGAM1呈高表达,二者均可能参与胃癌的发生发展,有望成为胃癌诊断和预后判断的生物标志物。

稳定表达RAS鸟苷酸释放因子2肺癌细胞株的建立

目的构建带有GFP标签的RAS鸟苷酸释放因子2(RAS guanine nucleotide releasing factor 2,RASGRF2)真核表达质粒,并建立稳定表达RASGRF2的肺癌细胞株。方法用SgfⅠ和NotⅠ双酶切RASGRF2-pCMV6-Myc-DDK质粒,回收RASGRF2基因片段,亚克隆入pCMV6-GFP载体中,构建重组表达质粒RASGRF2-pCMV6-GFP,转染肿瘤细胞H1299,倒置荧光显微镜下观察RASGRF2蛋白的定位。经G418筛选并建立稳定表达RASGRF2的细胞株,RT-PCR及Western blot法检测RASGRF2的表达。结果经双酶切及测序证实RASGRF2基因成功克隆至真核表达载体pCMV6-GFP中;重组RASGRF2-GFP蛋白在H1299细胞中主要在胞质中表达;经RT-PCR及Western blot证实,RASGRF2在H1299细胞中稳定表达。结论成功建立了稳定表达RASGRF2基因的肺癌细胞株,为进一步研究RASGRF2基因的功能奠定了基础。

鸟苷酸交换因子P92GEF通过靶向调控RhoA抑制肿瘤细胞增殖侵袭（英文）

Dbl家族鸟苷交换因子(GEFs)是Rho家族蛋白发生恶性转化的主要调控单位,它通过使Rho蛋白从无活性的GDP形式转换为GTP形式的Rho蛋白而发挥作用,参与细胞骨架重排,细胞的生长和活力。P92GEF是一GEFs家族分子。本研究通过Real time PCR对P92GEF在人体48种正常组织中的表达情况进行了测定;GST-pulldown技术对P92GEF的体内GEF活性进行了检测;双荧光素酶报告基因检测技术对下游小分子进行转录因子活性检测;应用免疫荧光双染标记法完成了高表达P92GEF对正常细胞骨架形态的影响;在细胞表型实验中分别使用CCK8法、Transwell法及软琼脂克隆形成实验检测了高表达P92GEF对细胞增殖侵袭迁移及体外成瘤能力的影响。研究结果显示P92GEF有841个氨基酸,具有典型的Dbl家族分子结构域,在肺组织中表达量最高,能够促使正常成纤维细胞中的应力纤维(stress fiber)增多,P92GEF转染的NIH3T3细胞可以独立生长和形成继发性病灶,同时促使细胞增殖,侵袭及克隆形成能力增强,体外转录因子活性检测发现该基因可能与JAK/STAT通路有关。因此,P92GEF是一个典型的鸟苷交换因子家族分子,能激活Rho家族分子Rho A,具有明显的癌基因特征。

miR-6867及其宿主基因RAPGEFL1在食管鳞状细胞癌组织和细胞系中的表达及甲基化状态

目的:检测miR-6867及其宿主基因Rap型鸟苷酸交换因子1(rap guanine nucleotide exchange factor like 1,RAPGEFL1)在食管癌细胞系及食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达水平及甲基化状态,并探讨其在ESCC发生发展中的作用。方法:选取河北医科大学第四医院2014年1月至2016年1月收治的ESCC手术患者组织标本87例。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-6867及RAPGEFL1在食管癌细胞系和ESCC组织及其相应癌旁组织中的表达水平,分析miR-6867和RAPGEFL1基因表达之间的相关性。应用甲基化特异性PCR法(MSP)检测RAPGEFL1在食管癌细胞系和ESCC组织及其相应癌旁组织中的甲基化状态。结果:miR-6867在ESCC组织中的相对表达量显著低于其相应癌旁组织(P<0.05),并与淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05);RAPGEFL1基因在ESCC组织中的表达显著低于其相应癌旁组织(P<0.05),并与淋巴结转移、组织分化程度及TNM分期相关(P<0.05);miR-6867与RAPGEFL1在ESCC组织中的表达呈明显正相关(P<0.05)。5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dC)处理后,4种食管癌细胞系中miR-6867和RAPGEFL1基因的表达均增高,并且其甲基化程度明显降低。RAPGEFL1基因在ESCC组织中的甲基化率显著高于其相应癌旁组织(P<0.05),并与淋巴结转移、组织分化程度及TNM分期有关(P<0.05)。结论:ESCC的发生发展可能与miR-6867和RAPGEFL1的异常低表达及RAPGEFL1高甲基化状态有关,miR-6867与RAPGEFL1表达具有一致性,且RAPGEFL1基因启动子区甲基化可能是导致miR-6867与RAPGEFL1表达沉默的机制之一。

RABGEF1蛋白在卵巢肿瘤中的表达

目的探讨RAB鸟苷酸交换因子1（RABGEFl）蛋白在卵巢恶性肿瘤、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织中的表达水平。方法应用免疫组织化学技术检测46例卵巢恶性肿瘤、21例卵巢良性肿瘤及15例正常卵巢组织中RABGEFl蛋白的表达水平。结果RABGEFl蛋白在卵巢恶性肿瘤中的阳性表达率为7l_7％，在卵巢良性肿瘤中的阳性表达率为38．1％，在正常卵巢组织中未检测到RABGEFl蛋白的表达；RABGEFl蛋白在卵巢恶性肿瘤中的表达率显著高于良性肿瘤（矿一6．87，P一0．0087）。结论RABGEFl蛋白可能参与卵巢肿瘤的发生及发展，卵巢组织中RABGEFl蛋白的表达检测或许有助于卵巢肿瘤的辅助诊断。

鸟苷酸交换因子DOCK1对心肌细胞存活的影响

目的探讨鸟苷酸交换因子DOCK1对心肌细胞存活的影响。方法用重组真核质粒pCXN2-Flag-hDOCK1(人DOCK1过表达质粒),pCXN2-Flag(空质粒)及空白试剂分别转染大鼠源H9C2心肌细胞,并给予缺氧/复氧(H/R)干预。将心肌细胞分为空白组,空质粒组,DOCK1过表达组,空白+H/R组,空质粒+H/R组,DOCK1过表达+H/R组。用RT-PCR测定DOCK1mRNA水平。流式细胞术、MTT分别测定细胞的凋亡率和增殖率。结果 DOCK1过表达组(1.51±0.169)%,(2.49±0.442)%,(38.94±0.580)%,(P<0.05)较空白组(-),(3.61±0.334)%,(20.64±0.720)%,(P<0.05)和空质粒组(-),(3.66±0.373)%,(22.29±0.838)%,(P<0.05),DOCK1过表达+H/R组1.03±0.171,(5.38±0.431)%,(17.33±0.343)%,(P<0.05)较空白+H/R组[(-),(2.49±0.442)%,(7.95±0.322)%,(P<0.05)和空质粒+H/R组(-),(10.32±0.388)%,(792±0.351)%,(P<0.05),人的DOCK1RNA分别显著增加、心肌细胞凋亡率分别显著降低及增殖率分别显著增加。较DOCK1过表达组,DOCK1过表达+H/R组人的DOCK1mPNA显著降低。较空白组(0.64±0.145),(P<0.05)、空质粒组(0.60±0.182),(P<0.05)及DOCK1过表达组(0.60±0.182),(P<005),空白+H/R组(0.30±0.115),(P<0.05)、空质粒+H/R组(0.36±0.101),(P<0.05)及DOCK1过表达+H/R组(1.03±0.171),(P<0.05)大鼠的DOCK1mRNA分别显著降低、心肌细胞凋亡率分别显著增加及增殖率分别显著降低。结论 DOCK1可抑制H9C2心肌细胞的凋亡,促进H9C2心肌细胞的增殖、存活;且DOCK1可抑制H/R诱导的H9C2心肌细胞凋亡增加及增殖、存活的降低。

植物的内吞循环与ARF小G蛋白调节因子的研究进展

ARF小G蛋白鸟苷酸交换因子(ARF guanine nucleotide exchange factor,简称ARF-GEF)是一类在植物的器官发育、形态建成及信号感知方面发挥着不可或缺的作用的小G蛋白调节因子.这类蛋白在真核生物中普遍存在并且进化保守.关于ARF-GEF的研究越来越多并成为发育生物学领域的一个研究热点.在67篇文献基础上,比较了ARF-GEF在动物、植物以及酵母中的不同亚细胞定位,分析了不同ARF-GEF亚家族蛋白之间的进化关系,并总结了其在囊泡运输系统中的功能机制,为国内科研工作者进行这一领域的研究提供参考.

鸟苷酸交换因子Vav1通过结合钙调素蛋白对T淋巴细胞钙信号进行调节

T淋巴细胞钙信号的活化能够调节核转录因子NFAT（nuclear factor of activated T cells）的活性，并控制IL-2等重要蛋白因子的表达，对T淋巴细胞的发育和功能具有重要意义．Vav1是一类在造血细胞中表达的鸟苷酸交换因子，能够控制细胞骨架重排以及T细胞的活化．研究表明，Vav1能够对T细胞受体（T cell receptor,TCR）介导的细胞钙信号传导进行调节．

生精细胞特异性敲除ARHGEF15基因对小鼠精子发生的影响

本实验旨在探究鸟苷酸交换因子15(ARHGEF15)基因在小鼠睾丸中的表达模式及其对精子发生的影响,本研究通过免疫组化和免疫荧光双染色实验检测ARHGEF15蛋白在5日龄和成年(8~9周龄)小鼠睾丸中的表达模式,并利用Cre-LoxP系统特异性敲除小鼠生精细胞内的ARHGEF15基因。结果显示:在5日龄小鼠睾丸中,ARHGEF15蛋白主要表达于精原细胞的细胞质和/或细胞膜,在成年小鼠睾丸中ARHGEF15蛋白主要定位于支持细胞的细胞核;条件性敲除(cKO)组小鼠睾丸的形态大小、组织学结构、精子的运动性能及形态与对照组相比无显著差异,且cKO组小鼠的繁育力也不受影响。因此,ARHGEF15基因主要在发育早期小鼠睾丸的生精细胞中表达,敲除生精细胞内的ARHGEF15基因不影响小鼠的繁殖能力和精子发生。

C3G在卵巢癌组织中的表达及其在SKOV3细胞增殖中的作用

目的探讨鸟苷酸交换因子C3G(Crk SH3-domain-binding guanine nucleotide-releasing factor)在卵巢癌组织中的表达及在卵巢癌SKOV3细胞增殖中的作用。方法采用Western blot检测比较40例卵巢癌、8例卵巢良性肿瘤及4例正常卵巢组织中C3G的表达水平。应用特异性siRNA下调SKOV3细胞中C3G的表达,通过MTT法和平板克隆实验检测细胞增殖,建立裸鼠皮下种植瘤模型观察移植瘤生长情况。结果卵巢癌组织中C3G的表达显著高于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织,其在卵巢癌、卵巢良性肿瘤分别是正常卵巢组织中的(1.832±0.200)(P<0.05)、(0.893±0.147)倍。siRNA干扰可使SKOV3细胞中内源性C3G的表达下调79.2%;与野生型细胞组、阴性对照组及空载体对照组相比,C3G干扰组细胞增殖变慢(P<0.05),克隆形成率下降(P<0.05),移植瘤的平均体积和质量显著下降(P<0.05)。结论鸟苷酸交换因子C3G在大多数上皮性卵巢癌中过表达,并促进卵巢癌细胞增殖。

稻瘟菌Cdc42若干推测互作蛋白的结构和表达特点

目的已有研究表明稻瘟菌Cdc42(MgCdc42)与酵母Cdc42(ScCdc42)高度同源,参与调控其形态分化和侵染过程,通过分析可能的MgCdc42互作蛋白,以明确这些蛋白结构和功能。方法用ScCdc42互作蛋白经BLAST搜索获得了稻瘟菌基因组中的相应同源物,分析了这些同源物的结构,并通过半定量RT-PCR分析MgCdc42不同突变情况下这些可能的调控蛋白及效应蛋白的表达情况。结果MgCdc42正显性突变后,导致所有推测互作蛋白表达量均有所提高;MgCdc42负显性突变,除MgBem1、Chm1、MgGic1表达量未见明显变化外,其余表达量均有所降低;当MgCdc42失活后,所有可能的MgCdc42调控蛋白及效应蛋白之表达量均有所降低。结论稻瘟菌可能存在酵母Cdc42相似的信号途径,MgCdc42在其中起着重要的调控作用。