H-RasV12诱导的人成纤维细胞早期衰老中自噬的调节

目的研究癌基因H-RasV12过度表达或激活与自噬活性的关系,在人成纤维细胞中观察Ras过度表达对自噬活性的影响。方法在BJ人成纤维细胞中转染原癌基因H-RasV12或其空载体,通过形态学、细胞生长曲线、β-半乳糖苷染色、衰老和自噬相关蛋白表达、流式细胞分析、siRNA(small interfering RNA,siRNA)抑制自噬关键基因5(ATG5),来分析Ras过度表达的细胞效应。结果与对照细胞相比,H-RasV12过度表达的BJ细胞出现明显的早期衰老,其自噬活性受到抑制,表现为蛋白p62和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(Light chain 3Ⅱ,LC3Ⅱ)的显著蓄积,在研究时间区间内这种抑制作用保持稳定,同时细胞凋亡率增加;利用siRNA抑制ATG5表达,抑制自噬可进一步加重衰老。结论人成纤维细胞稳定表达癌基因H-RasV12后,可出现自噬活性受到抑制的现象,且自噬抑制处于自噬过程的后期。这一现象可能与Ras相关性癌症的癌变机制有关。

Ras基因对人股动脉平滑肌细胞增殖过程中基因表达的影响

目的观察Ras基因对人股动脉平滑肌细胞增殖过程中基因表达的影响。方法以显性激活RAS基因和显性失活RAS基因重组腺病毒(AdRasV12和AdRasN17)转染人股动脉平滑肌细胞,采用Affymetrix基因芯片检测转染细胞的基因表达变化。结果转染AdRasN17后,120个基因表达发生显著变化,其中43个基因表达上调,77个基因表达下调。转染AdRasV12后,231个基因被确定为差异表达,其中127个基因表达上调,104个基因表达下调。这些基因功能主要与细胞周期和凋亡、信号转导、代谢和对刺激应答有关。结论激活和失活突变的Ras可改变人股动脉平滑肌细胞的基因表达,这些基因可能与动脉粥样硬化和再狭窄等心血管疾病发展过程中的动脉平滑肌细胞异常增殖有关。

Ras／MEK的激活能通过降低STAT2水平抑制干扰素-α的抗病毒效应

干扰素诱导抗病毒因子表达从而抑制病毒感染的能力依赖于细胞的抑制作用。RAS／MEK途径是细胞抑制作用的途径之一,因为在干扰素存在的情况下,Ras／MEK的激活使得病毒复制。本研究的机理如下：通过激活的Ras／激酶抑制干扰素效应发现,在Ras转化成NIH3T3（RasV12）细胞时,能诱导抗病毒蛋白的反应导致干扰素受损。抑制的Ras／MEK途径恢复了干扰素介导的诱导抗病毒基因,表明激活的Ras中断干扰素的上游抗病毒基因的转录通径。事实上,与矢量控制细胞相比,干扰素诱导磷酸化的信号转导和转录激活因子1（sTAT1）和2（STAT2）可抑制RasV12细胞。