苦参碱减轻慢性肾小球肾炎大鼠肾脏损伤及其机制

目的探讨苦参碱(Mat)通过调节单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/趋化因子C-C-基元受体2(CCR2)信号通路对慢性肾小球肾炎大鼠肾脏损伤的影响。方法采用皮下注射牛血清清蛋白的方式建立慢性肾小球肾炎大鼠模型,将50只大鼠随机均分为对照组、模型组、苦参碱低、高剂量组(Mat-L组、Mat-H组)、苦参碱^(+)CCR2组(Mat^(+)CCR2组),每组10只,连续灌胃4周。检测24 h尿蛋白排泄量;剥离脾脏与胸腺,计算脏器指数;检测各组大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)含量;HE染色法观察各组大鼠肾组织病理变化;ELISA法检测肾组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6水平;流式细胞术检测各组大鼠外周血T淋巴细胞亚群比例;Western blotting法测定MCP-1、CCR2蛋白表达。结果模型组大鼠脾脏指数和胸腺指数显著降低,肾组织有大量炎症细胞浸润,24 h尿蛋白、BUN、Scr、TNF-α、IL-6以及MCP-1、CCR2表达显著升高,外周血T细胞亚群CD3^(+)、CD4^(+)以及CD4^(+)/CD8^(+)比值显著降低,CD8^(+)比例显著升高(P<0.05);Mat-L组、Mat-H组大鼠脾脏指数和胸腺指数升高,肾组织炎症浸润现象改善,24 h尿蛋白、BUN、Scr、TNF-α、IL-6以及MCP-1、CCR2表达显著降低,外周血T细胞亚群CD3^(+)、CD4^(+)以及CD4^(+)/CD8^(+)比值显著升高,CD8^(+)比例显著降低(P<0.05);CCR2减弱了Mat-H对慢性肾小球肾炎大鼠免疫功能的影响。结论苦参碱可以缓解慢性肾小球肾炎大鼠的炎症损伤,提高大鼠外周免疫功能,其作用机制可能与抑制MCP-1/CCR2信号通路有关。

SDS/CTAB/H_2O的双水相性质及萃取作用

测定了SDS CTAB H2 O Na2 SO4 系统的双水相相图及牛血清蛋白和色氨酸在不同区域双水相中的分配系数 ,研究了相关因素对双水相分相时间的影响规律。结果表明 ,体系的相图中存在 2个双水相区 ,盐的种类、浓度及双水相的两相高度之比是影响双水相分相时间的重要因素。物质的疏水程度越大 ,越易被萃取到富表面活性剂相中 ,水溶性小分子物质不能被萃取。当物质的电性与富表面活性剂相有序组合体的电性相反时 。

真武汤对C-BSA渗透泵肾小球肾炎大鼠的治疗作用

目的在制备阳离子化小牛血清白蛋白(C-BSA)渗透泵致肾小球肾炎(CGN)大鼠模型的基础上,探讨真武汤对该模型大鼠的治疗作用。方法取雄性SD大鼠60只,其中50只大鼠埋入C-BSA渗透泵制备CGN模型,10只作为空白对照组(假手术处理)。确定造模成功后,随机分为CGN模型组,真武汤高、中、低剂量组(16.8,8.4,4.2g/kg),醋酸泼尼松组(8 mg/kg)。采用考马斯亮兰法测定24 h尿蛋白;全自动生化分析仪检测血液生化指标,包括血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG);免疫荧光检查肾小球IgG的表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白、SCr、BUN、TC和TG均明显升高(P<0.01),TP和ALB降低(P<0.01,P<0.05),且免疫荧光检查显示肾小球系膜区IgG大量沉积。与模型组比较,真武汤各剂量组大鼠24 h尿蛋白、SCr、BUN、TC和TG明显降低(P<0.01,P<0.05),TP和ALB升高(P<0.01,P<0.05),肾小球系膜区IgG沉积明显减少,尤以真武汤高剂量组效果最为显著。结论真武汤可减轻C-BSA渗透泵致CGN大鼠的肾脏免疫病理损伤,减少尿蛋白含量、改善肾功能、降低血脂,对肾脏有保护作用。

白蛋白包覆阳离子脂质纳米载体的制备及静脉注射药代动力学和组织分布

溶剂蒸发法制备普通阳离子脂质纳米载体(cNLCs)及白蛋白包覆的脂质纳米载体(BSA-cNLCs),cNLCs和BSA-cNLCs的粒径分别为69.9 nm和80 nm,电位分别为+12.5 mV和+5.02 mV。两者透射电镜照片均呈现圆整类球形结构,且BSA-cNlCs可见明显的白蛋白包覆层。紫杉醇包封率均在97%以上,载药量大于3.7%。加入血浆24 h后,cNLCs粒径增加至原来的1.7倍,而BSA-cNLCs仅增加至1.1倍,包覆白蛋白后血浆稳定性显著提高。高效液相色谱法研究大鼠体内药代动力学及荷瘤小鼠体内组织分布行为,静脉注射BSA-cNLCs 12 h后,大鼠血液中紫杉醇浓度为0.64μg/mL,而cNLCs组则无法检测到紫杉醇;BSA-cNLCs和cNLCs在荷瘤小鼠肿瘤组织中最高浓度分别为8.36μg/mL和2.52μg/mL,12 h后分别降至1.56μg/mL和0.57μg/mL。与cNLCs相比,BSA-cNLCs在血液中的滞留时间显著延长,表现出更好的长循环效果,靶向肿瘤组织的能力增加。

慢肾消对家兔实验性膜性肾炎的影响

目的 :探讨慢肾消对膜性肾炎治疗作用的机理。方法 :用阳离子化牛血清白蛋白 (C BSA)复制家兔膜性肾炎模型 ,分为慢肾消组、雷公藤组、模型组和正常组。每 2周检测 1次蛋白尿 ,实验结束时检测血浆白蛋白、总蛋白和胆固醇以及血栓素B2 (TxB2 )、6 酮 前列腺素 (6 keto PGF1a)。并进行光镜、电镜和免疫荧光的观察。结果 :慢肾消组和雷公藤组从第 4周开始 2 4h尿蛋白定量明显低于模型组 (P <0 0 1) ,而且血浆白蛋白、总蛋白以及胆固醇与模型组相比 ,均有明显改善 (P <0 0 5或P <0 0 1)。其中慢肾消提高血浆白蛋白、降低血浆胆固醇及TxB2 的作用明显优于雷公藤 (P <0 0 5) ,光镜、电镜和免疫荧光均发现两个用药组均较模型组病理损害减轻 ,尤以慢肾消组更为明显。结论 :慢肾消能减少尿蛋白 ,提高血浆总蛋白和白蛋白 ,降低血浆胆固醇 。

昆仙胶囊对阳离子化牛血清白蛋白所致大鼠肾病模型的保护作用

目的:观察昆仙胶囊对阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)诱导的大鼠原位免疫复合物型肾炎模型的肾脏保护作用。方法:Wistar大鼠72只,随机分为正常对照组、模型组、泼尼松组和昆仙胶囊大、中、小剂量组,每组12只。以C-BSA建立大鼠原位免疫复合物型肾炎模型。于预免疫同时给药,连续给药56d,给药期间动态观察各组大鼠体重、24h尿蛋白定量的变化,于正式免疫第5周结束时处死大鼠,腹主动脉取血,分离血清测定白蛋白、总蛋白、胆固醇、三酰甘油、尿素氮、肌酐的水平,留取肾脏,进行光镜和电镜病理形态学观察。结果:泼尼松组从第3周起,体重显著小于其余各组(P<0.05)。模型组24h尿蛋白定量于第4周(正式免疫后2周)升高,与正常组相比(P<0.01)。泼尼松组和昆仙胶囊大剂量组的尿蛋白水平降低,与模型组相比(P<0.05)。昆仙胶囊大、中、小剂量组均可改善肾小球病理损伤,而对肾小管间质病理损伤无明显改善作用。电镜观察显示昆仙胶囊可以减轻足细胞损伤程度,减轻基底膜厚度,改善电子致密物沉积情况。结论:昆仙胶囊大剂量可以降低C-BSA大鼠模型的24h尿蛋白定量,改善肾小球病理损伤,其机制可能与昆仙胶囊降低免疫复合物在基底膜沉积有关。

益肾清对膜性肾病模型的治疗及其机理研究

目的 :观察益肾清对家兔膜性肾病的治疗作用及其机理研究。方法 :参考Border法 ,观察益肾清灌胃口服对阳离子化牛血清白蛋白诱导的家兔膜性肾病的治疗作用 ,并了解它对正常小鼠免疫功能、大鼠尿量和血液流变学的影响。结果 :益肾清能明显缓解家兔蛋白尿 ,保护肾功能 ,恢复肾小球的病理改变 ;还具有较强的免疫增强、利尿和活血化瘀功能。结论 :益肾清对治疗家兔膜性肾病具有较好的疗效 ,其作用机制可能与利尿、活血化瘀或免疫增强作用有关。

大鼠原位性肾小球肾炎模型的建立

应川阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)诱导Wistar大鼠产生膜性肾炎,结果表明:经静脉注射C-BSA2.5mg第2周始出现严重蛋白尿,第3周进一步加重,第4用肾脏病理检查可见GBM增厚,钉突形成,上皮下免疫沉积物及足突损伤。该模型发病率为100％,重复性好,具有人类膜性肾炎的病理炎型特点和肾病综合征的临床表现,而无肾功能损害,是肾炎的发病机理和药物防治研究的理想动物模型。

肾茶对大鼠C-BSA慢性肾炎模型治疗作用的实验研究

目的:研究肾茶对大鼠C-BSA慢性肾炎的治疗作用。方法:用天然牛血清蛋白(C-BSA)制备大鼠肾炎模型,以雷公藤多苷片作对照药物,观察肾茶(水提取和50%乙醇提取物)对大鼠肾炎模型24h尿蛋白及血清肌酐、尿素氮的影响,并制作肾脏病理切片,经HE染色后在光镜下观察其病理形态。结果:肾茶能明显降低C-BSA肾炎模型大鼠的尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平(P<0.05或P<0.01),光镜下观察发现给药组肾脏病变形态明显减轻。结论:肾茶对大鼠C-BSA肾炎模型具有良好的治疗作用,有望成为治疗慢性肾炎的候选植物药。

阴阳离子型表面活性剂双水相萃取色氨酸衍生物和牛血清白蛋白

溴化十二烷基三乙胺（Ｃ１２ＮＥ）和十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）在一定条件下混合可以形成具有清晰界面的两个水相，称为阴阳离子型表面活性剂双水相。作者研究了利用该双水相萃取３种色氨酸衍生物和牛血清白蛋白的可能性．文中采用工作曲线校正扣除表面活性剂背景的影响，萃取结果准确可信。

雷公藤多甙治疗家兔实验性肾小球肾炎

采用原位免疫复体动物模型,按15mg/kg雷公藤多甙服用四周,尿蛋白明显下降,盘状蛋白电泳从大分子转向中分子蛋白,血浆蛋白、肌酐均恢复正常。病理检查示治疗组肾小球大小与细胞数均明显小于对照组,IgG,C3,BSA^+及带负电荷辣根过氧化酶在肾小球中沉积不明显。作者对雷公藤多甙作用机理作了讨论。

大鼠原位肠肝血管灌流模型的优化及完善

目的:对大鼠原位肠肝血管灌流模型的灌流液组成成分进行优化,以获取最佳灌流液配方。方法:对灌流条件进行优化,分别对Krebs-Rin-ger(K-R)液加牛血清白蛋白和甘露醇、K-R液加牛血清白蛋白和右旋糖酐T-40二者进行对比,找出最佳的灌流介质。然后对最佳的灌流介质中牛血清白蛋白的含量进行了优化。结果:K-R液加牛血清白蛋白和右旋糖酐T-40组优于K-R液加牛血清白蛋白和甘露醇组;5%牛血清白蛋白的灌流液是一个较为经济理想的灌流液。结论:在灌流介质中5%牛血清白蛋白是一个较为理想和经济的比例。

益肾祛毒胶囊治疗慢性肾功能衰竭的实验研究

目的 :探讨益肾祛毒胶囊对实验性慢性肾功能衰竭 (简称慢性肾衰 )大鼠的治疗作用机理。方法 :用阳离子化牛血清白蛋白造成大鼠膜性肾病诱发慢性肾衰后 ,再用益肾祛毒胶囊大、小剂量灌胃治疗5周 ,以包醛氧化淀粉作阳性对照药。结果 :益肾祛毒胶囊能显著降低大鼠 2 4h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮、血清循环免疫复合物 (P <0 0 1,P <0 0 5) ,且肾系数变小 (P <0 0 1) ,肾小球内有核细胞数减少 (P <0 0 1) ,肾小管内蛋白管型显著减少 (P <0 0 1) ,免疫荧光强度显著减弱 (P <0 0 1) ,光镜、电镜示肾脏病理明显改善。结论 :益肾祛毒胶囊能明显改善肾功能 。

茵陈水提物对牛血清白蛋白诱导的肝损伤大鼠的保护作用研究

目的研究茵陈水提物对牛血清白蛋白所致肝纤维化大鼠的保护作用。方法将90只SD大鼠随机平均分为正常组、模型组、秋水仙碱组、大剂量(200 mg·kg^(-1))、中等剂量(100 mg·kg^(-1))和小剂量(50 mg·kg^(-1))茵陈水提物处理组。在造模成功后除对照组和模型组外,给予药物灌胃。在末次给药后取各组大鼠血清和肝组织,检测血清Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层粘连蛋白(LN)和透明质酸酶(HA)及肝组织羟脯氨酸含量,观察肝组织病理学变化。结果大剂量药物处理组动物血清ALT、AST、PC-Ⅲ、Ⅳ-C胶原、LN、HA及肝组织羟脯氨酸含量分别为(103.78±19.83)IU/L、(246.53±36.67)IU/L、(30.34±2.52)ng/ml、(29.54±2.65)ng/ml、(45.34±1.45)ng/ml、(232.51±23.66)ng/ml及(0.85±0.22)μg/mg,中剂量组分别为(124.59±24.41)IU/L、(277.23±36.45)IU/L、(34.57±2.34)ng/ml、(34.90±2.45)ng/ml、(52.13±2.34)ng/ml、(283.14±23.75)ng/ml及(0.96±0.26)μg/mg,均明显低于模型组【分别为(161.24±26.23)IU/L、(382.45±39.45)IU/L、(41.78±3.12)ng/ml、(42.34±3.25)ng/ml、(65.14±3.81)ng/ml、(383.53±39.35)ng/ml及(1.43±0.17)μg/mg,P均<0.05】;大和中剂量组ALB水平分别为(35.66±2.85)g/L和(35.78±2.64)g/L,均明显高于模型组【(31.32±2.15)g/L,P均<0.05】;大和中剂量组重度纤维化发生率均为13.3%,均明显低于模型组的93.3%(P均<0.05);肝组织病理学检查显示,与模型组比,大和中剂量组大鼠肝细胞水肿、变性和坏死情况均显著减轻。结论茵陈水提物具有一定的抗肝纤维化作用,值得进行深入研究。

新生小牛血清、碱性成纤维细胞生长因子和肝素对大鼠血管平滑肌细胞骨桥蛋白基因表达的影响

为探讨新生小牛血清和碱性成纤维细胞生长因子促血管平滑肌细胞迁移与肝素抑制新生小牛血清促血管平滑肌细胞迁移的分子机制，采用反转录聚合酶链反应方法合成骨桥蛋白ｃＤＮＡ探针，以羟基脲抑制新生小牛血清、碱性成纤维细胞生长因子对血管平滑肌细胞的促增殖作用后，观察其对骨桥蛋白基因表达及能量转换的影响。结果发现，新生小牛血清、碱性成纤维细胞生长因子均能显著诱导血管平滑肌细胞骨桥蛋白基因表达，在两种因素作用下肌酸激酶活性分别较对照组升高７６％和６１％，具有显著性差异（Ｐ＜０．０５）；在肝素与新生小牛血清共同作用下，骨桥蛋白基因表达减弱，细胞肌酸激酶活性也较新生小牛血清单独作用时降低２２％。提示新生小牛血清和碱性成纤维细胞生长因子促进血管平滑肌细胞迁移以及肝素抑制新生小牛血清促血管平滑肌细胞迁移的作用与细胞内骨桥蛋白基因表达改变和能量转换有关。

中药抗炎清肾方对免疫复合物性肾炎大鼠的保护作用

目的 采用阳离子化牛血清白蛋白 (C -BSA)诱发的免疫复合物性肾炎大鼠模型 ,观察中药抗炎清肾方对该模型大鼠的保护作用。方法 将造模大鼠随机分为模型组和中药组 ,分别给予抗炎清肾方汤剂及生理盐水灌胃 ,并与正常大鼠作空白对照。结果 中药组尿蛋白的排泄量较模型组显著减少 (P <0 .0 5 ) ,血清白蛋白水平增高 ,血脂水平降低 (P <0 0 5 )。中药组大鼠肾小球免疫复合物的沉积比模型组明显减少 ,基底膜增厚减轻 ,免疫组化显示基底膜IgG、Ⅳ型胶原的沉积均较模型组减轻。

益肾通络方对肾病综合征大鼠治疗作用的实验研究

目的:观察益肾通络方对肾病综合征(NS)大鼠的治疗作用。方法:SD大鼠采用阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)造模后,随机分为模型组、益肾通络方组、肾炎四味片组,并设正常对照组,共4组,每组10只。观察连续给药4周对大鼠24h尿蛋白定量、胆固醇、甘油三酯、肌酐、尿素氮及肾组织病理学等方面的影响。结果:益肾通络方能明显降低NS大鼠24h尿蛋白、TG、CHOL,改善NS大鼠肾组织变化。结论:益肾通络方能降低大鼠尿蛋白,调节脂质代谢紊乱,保护肾功能,对NS大鼠有治疗作用。

高同型半胱氨酸血症对膜性肾病大鼠肾组织Nephrin WT1表达的影响

目的:观察高同型半胱氨酸血症对膜性肾病(MN)大鼠肾组织Nephrin、WT1表达的影响,探讨MN足细胞损伤凋亡的可能发生机制。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为正常组和模型组,正常组不给予任何处理,模型组尾静脉注射16mg/kg阳离子化牛血清白蛋白(c-BSA)复制MN大鼠模型,于正式免疫第1,2,3,4周末检测24h尿蛋白(24h UTP)水平,并于第4周末检测大鼠血浆尿素(Ure)、血肌酐(Cre)及同型半胱氨酸(Hcy)水平。同时取材鉴定大鼠肾组织成模情况,免疫组化检测大鼠肾组织中Nephrin、WT1的表达,结果:模型组大鼠造模第4周成模稳定,病理表现典型。随造模时间延长,模型组24h UTP呈逐渐增加趋势,与前一周末比较差异均有统计学意义(P<0.01),2、3、4周末24h UTP较正常组有明显增加(P<0.01)。Nephrin在模型组肾组织中表达较正常组显著减少(P<0.01),WT1的表达与正常组比较无显著差异。HCY与肾组织Nephrin的表达呈明显负相关,与第4周末24h UTP呈明显正相关,与血浆尿素、血肌酐、肾组织WT1无明显相关关系。结论:MN中高Hcy血症可能通过下调Nephrin的表达参与了足细胞的损伤凋亡过程,积极监测Hcy水平及控制高Hcy血症有利于防止MN的进展。

新生大鼠心肌细胞体外原代培养及鉴定

目的探讨一种较为理想的体外原代心肌细胞培养的方法。方法取新生SD大鼠心脏心尖部，冷胰蛋白酶和II型胶原酶．BSA消化分离单细胞，二次差速贴壁法纯化心肌细胞，倒置相差显微镜和流式细胞仪检测细胞存活率、活力及纯度。结果获得的心肌细胞存活率为90％，纯度达94％以上，自发搏动明显，频率为80—120次／min，且培养前15d细胞搏动频率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论本方法可获得较高存活率及纯度的心肌细胞，可满足实验要求。