补铬对糖尿病大鼠骨骼肌IRS-1基因表达的影响

目的研究补铬对糖尿病大鼠骨骼肌代谢相关基因表达的影响。方法对前期研究分离到的与补铬有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序,并进行同源性分析。根据待检测的基因序列进行引物设计,进行RTPCR检测。用激光密度扫描仪进行光密度扫描分析,以目的基因与参考基因的灰度比值反映其表达水平。结果经过克隆、测序、同源性比较,差显片段Cr5的碱基序列与IRS1同源性为100%。糖尿病对照组IRS1mRNA表达量(0791±0038)低于正常对照组(0892±0053,P<005),糖尿病补铬组IRS1mRNA的表达量(0822±0066)与糖尿病对照组相比有所恢复,但尚未恢复到正常水平(P>005)。结论补铬对糖尿病大鼠骨骼肌IRS1mRNA表达有上调趋势,Cr5将作为候选基因有待于进一步研究。

自发性高血压大鼠心肌胰岛素样生长因子-1受体基因表达与心血管细胞增殖

目的 :观察自发性高血压大鼠(SHR)心肌胰岛素样生长因子 -1(IGF -1)受体基因表达水平 ,探讨其与心血管细胞增殖的病理机制以及福辛普利和氯沙坦治疗的影响。方法:24只SHR随机分3组 ,分别予福辛普利、氯沙坦和安慰剂灌胃治疗9周。检测尾动脉血压 ,测量心肌IGF -1受体mRNA水平并观察心肌、主动脉组织学改变。结果 :福辛普利组与氯沙坦组血压均显著低于对照组 ;其IGF -1受体mRNA水平均显著低于对照组 ,且血压与IGF -1受体mRNA水平呈正相关 ;光、电镜显示两治疗组较对照组心血管细胞增殖明显减轻 ,氯沙坦组增殖减轻更明显。结论:心肌IGF -1受体基因表达水平异常升高是导致SHR心血管细胞增殖的原因之一 ;福辛普利与氯沙坦均可有效控制血压 ,可能通过下调SHR心肌IGF -1受体的基因表达水平 。

大鼠心肌组织中细胞间粘附分子-1基因部分CDS克隆

目的克隆大鼠心肌组织中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)基因。方法采用RT-PCR法,从大鼠缺血性损伤的心肌组织mRNA中扩增出ICAM-1基因部分CDS区片段,克隆入T载体,筛选阳性克隆,酶切鉴定,最后测序鉴定。结果经RT-PCR法扩增出的特异性产物与预期扩增的片段长度110bp相符,DNA测序结果与GenBank提供的已知序列比较,所克隆的ICAM-1基因片段与目的扩增的序列完全相同,与ICAM-1基因100%同源。结论采用RT-PCR和T载体技术获得了大鼠心肌组织中ICAM-1基因克隆。

力竭运动后不同时相大鼠心肌Egr-1蛋白的变化及其在运动性心肌微损伤发生中的作用

目的:探讨力竭运动后不同时相心肌早期生长应答基因Egr-1在蛋白水平的变化特点,为运动性心肌微损伤及心肌功能异常发生机制的阐释提供实验依据。方法:100只健康成年雄性SD大鼠,分为一次力竭游泳运动组、两周反复力竭游泳运动组及安静对照组,分别于力竭运动后即刻、6 h、12 h及24 h取材,应用免疫荧光组化技术和图像分析方法研究大鼠心肌Egr-1蛋白含量的变化。结果:一次力竭运动组大鼠心脏各部位Egr-1蛋白含量即刻组与对照组相比显著性升高(P<0.05),24 h组与对照组相比显著性降低(P<0.05);反复力竭运动组大鼠心脏各部位Egr-1蛋白含量即刻组与对照组相比显著性升高(P<0.05),6 h组、12 h组、24 h组大鼠心脏各部位Egr-1蛋白含量均显著低于对照组(P<0.05)。结论:不同力竭运动后心脏各部位Egr-1在运动后即刻明显升高,表明心肌细胞Egr-1对力竭运动刺激产生快速应激反应,可能诱导炎性细胞的趋化、聚集以及氧自由基的产生。而心脏各部位Egr-1在力竭运动后24 h内恢复到正常水平,说明力竭运动后心脏Egr-1改变属早期应激反应,且此反应属可复性改变。

自噬基因微管相关蛋白1轻链3、Beclin 1在饥饿大鼠心肌中的表达及意义

目的观察饥饿模型大鼠心肌细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)及自噬基因Beclin 1的表达变化,探讨自噬机制在饥饿大鼠心肌中的作用。方法将42只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=6)和饥饿模型组(n=36)。正常对照组正常饮食,饥饿模型组禁食但自由摄水,根据饥饿天数又分为1、2、3、5、7、9 d等6个亚组(n=6)。各亚组在相应时间进行心脏标本提取并留存,采用免疫组化法和蛋白质印迹法检测心肌自噬蛋白Beclin 1和LC3水平变化。结果与正常对照组相比,饥饿模型组各时间点SD大鼠心肌的自噬蛋白LC3和Beclin 1阳性细胞数及蛋白表达都有不同程度的增加,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),饥饿模型各亚组之间自噬蛋白LC3和Beclin 1阳性细胞数及蛋白表达差异亦均有统计学意义(P<0.01或P<0.05),且在饥饿2 d和7 d出现2个峰值。结论饥饿状态可通过激活心肌自噬机制参与心肌的病理改变过程。

PDX-1蛋白对TNF-α和IL-1β诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用

目的探讨PDX-1蛋白对细胞因子(TNF-α、IL-1β)诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用。方法 PDX-1基因克隆及表达质粒的构建,PDX-1蛋白的表达、纯化和鉴定,PDX-1蛋白保护TNF-α和IL-1β引起的胰岛细胞凋亡的研究。结果 PDX-1蛋白可以延缓胰岛细胞的自然凋亡,降低处理后的胰岛Caspase-3活性和荧光细胞的数目;PDX-1蛋白干预后的细胞因子组的葡萄糖刺激胰岛素释放为(1.586±0.129)μI U/ml,与对照组(1.375±0.131)μI U/ml,相比有显著差异(P<0.05)。结论表明PDX-1蛋白可以减少细胞因子诱导的胰岛凋亡,保护β细胞功能。

L-精氨酸对糖尿病大鼠心肌损伤的影响

目的研究L-精氨酸(L-Arg)对糖尿病(DM)大鼠心肌的保护作用。方法 28只大鼠腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)制备DM模型,随机均分为DM组、L-Arg〔300 mg/(kg.d)〕治疗组。另设立正常对照(NC)组(n=12)。用药12周末处死大鼠,用透射电镜观察3组大鼠心肌细胞的形态学改变,采用RT-PCR检测心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮素-1(ET-1)mRNA的表达水平,并测定心肌组织内eNOSi、NOS、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性以及一氧化氮(NO)、ET-1的含量。结果电镜下可见DM组大鼠心肌细胞肌原纤维含量明显减少,肌浆网扩张,线粒体肿胀变性。DM组大鼠eNOS mRNA表达、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及NO含量明显低于NC组,而ET-1 mRNA表达及ET-1含量明显高于NC组。L-Arg组大鼠心肌病变明显减轻,eNOS mRNA表达、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及NO含量明显高于DM组,ET-1mRNA表达及ET-1含量明显低于DM组。结论 L-Arg对DM大鼠心肌具有保护作用,其机制可能与L-Arg增加心肌组织NO含量、降低ET-1含量,改善心肌血供有关。