过量氟对大鼠切牙基质金属蛋白酶-20及其组织抑制剂表达的影响

目的研究过量氟对大鼠切牙生长过程中基质金属蛋白酶-20(MMP-20)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法选择20只Wistar大鼠,随机分为对照组和给氟组。8周后处死动物,获取切牙标本,免疫组化染色观察MMP-20和TIMP-2在大鼠切牙中的表达定位和氟对二者表达的影响。结果MMP-20和TIMP-2在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞以及成釉器均有阳性表达,给氟组MMP-20的表达明显弱于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);TIMP-2在两组的表达无显著性差异(P>0.05)。结论过量氟可抑制MMP-20的表达,MMP-20和TIMP-2表达失衡,TIMP-2的抑制作用加强,致使釉基质蛋白清除延迟,导致矿化不全和釉质缺损。

大鼠切牙颈环结构成牙能力的实验研究

目的：观察大鼠切牙颈环结构种植于鼠肾被膜下形成牙齿样结构的能力。方法：取出生后3～4d的SD仔鼠切牙，将切取的颈环结构种植到母鼠肾被膜下，建立组织工程牙齿的体内培养模型。2～4周后取材，常规固定，HE染色观察。结果：下切牙颈环结构在体内形成了包含釉质和牙本质牙髓复合体的纤齿样结构，上切牙颈环结构仅形成了牙本质牙髓复合体的牙齿样结构。结论：大鼠切牙颈环结构在体内能够形成纤齿样结构，其中颈环中的上皮干细胞起着重要的作用。大鼠肾被膜下种植可以做为体内组织工程化牙齿样结构构建的立体培养模式。

过量氟对大鼠切牙釉丛蛋白表达的影响

目的研究过量氟对大鼠切牙发育过程中釉丛蛋白表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法选择20只Wistar大鼠,随机分成两组:对照组(蒸馏水组)和实验组(100mg/LF-)。复制大鼠氟斑牙模型。饲养8周处死动物,利用免疫组化和实时荧光定量PCR(Real-TimePCR)方法观察过量氟对大鼠切牙中釉丛蛋白表达的影响。结果免疫组化结果显示釉丛蛋白在分泌前期和分泌期的成釉细胞中呈阳性表达。实验组釉丛蛋白的表达明显弱于对照组,存在显著性差异(P<0.01)。Real-TimePCR结果显示釉丛蛋白mRNA在对照组表达明显高于在实验组表达水平(P<0.01)。结论过量氟可能通过抑制釉丛蛋白的表达,从而影响釉质的矿化,导致釉质发育障碍。

硼氟联合作用对大鼠切牙釉蛋白表达的影响

目的通过观察过量氟、硼以及氟硼联合作用对大鼠切牙釉蛋白表达的影响,初步探讨硼在预防氟斑牙中的作用。方法选择32只Wistar大鼠,随机分为4组。Ⅰ组常规饮用蒸馏水;Ⅱ组饮用含氟化钠质量浓度为220 mg/L的氟化水;Ⅲ组饮用含硼质量浓度为382 mg/L的水;Ⅳ组饮用含氟、硼质量浓度分别为220 mg/L、382 mg/L的水。8周后处死动物,获取切牙标本,利用免疫组织化学法和HE染色观察大鼠切牙成釉细胞和釉蛋白的表达。结果Ⅱ组釉蛋白的表达明显弱于Ⅰ组(P<0.01),Ⅲ组与Ⅰ组表达差异无统计学意义,Ⅳ组与Ⅰ组表达差异无统计学意义,Ⅳ组与Ⅱ组表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论过量氟可抑制釉蛋白的表达,而经硼与氟的联合作用后,釉蛋白表达所受影响降低。硼可降低氟对牙齿的危害性。

大鼠切牙牙髓复合体的透射电镜研究

用透射电镜观察了大鼠切牙牙髓复合体的超微结构。前牙本质和牙本质的胶原原纤维分粗、细两种：从前牙本质至牙本质；从牙本质小管周围至其远方，纤维由细变粗、由稀至密。胶原原纤维聚集成束，呈纵行、横行和矢状相互交织。前牙本质和牙本质内有许多牙本质小管，内衬鞘样界膜。成牙本质细胞呈长梨形或长纺锤形，核位于基底部，线粒体、粗面内质网、高尔基复合体等位于胞浆的核上区。该细胞突起伸入整个牙本质小管内，含有微丝、微管和小泡等。相邻成牙本质细胞间的牙本质侧有连接复合体相连，其他区域则为桥粒。

大鼠切牙发育中釉蛋白的免疫荧光定位

目的:观察釉蛋白在大鼠切牙发育不同时期的表达和分布情况。方法:采用免疫荧光法观察釉蛋白在大鼠切牙发育不同时期的表达与分布。结果:在成釉器增殖期、分化早期,未见釉蛋白表达;在分化晚期,前成釉细胞有弱阳性表达;在成熟早期,成釉细胞和成牙本质细胞均阳性表达;在成熟中期,成釉细胞及其基质呈强阳性表达,而成牙本质细胞阳性表达;在成熟晚期,成釉细胞和成牙本质细胞弱阳性表达。在成釉器各期,釉蛋白在外釉细胞、星网状细胞、牙乳头细胞均呈阴性表达。结论:釉蛋白参与釉基质和牙本质基质的形成,可能与牙发育中基质形成的信息传递有关。

大鼠切牙不同程度氟牙症的超微结构观察

目的观察大鼠饮用不同剂量氟水后发生中、重度氟斑牙的下颌切牙超微结构。方法给SD雄性大鼠分别自由饮用0、25、50、100mg/L的含氟水,于不同的时间点用数码相机对大鼠下颌切牙进行唇侧正位照相,将中、重度氟斑牙的左、右侧下颌切牙分别进行扫描电镜及透射电镜的超微结构观察。结果正常鼠切牙的釉质是一层由成釉细胞形成的棕色色素薄层,呈橘黄色、棕黄色;中度氟斑牙表面呈现不同程度棕、白色相间的水平状条纹,透光度降低;重度氟斑牙牙面出现白垩色外观,不透明。扫描电镜显示正常大鼠下颌切牙牙面平整、致密,仅在颈部有小的点窝;中、重度氟斑牙牙面粗糙,点窝在牙冠和牙颈部都明显存在,颈部甚至出现堆积的无釉柱状突起。透射电镜显示随着氟斑牙严重程度加重成釉细胞呈现一系列细胞凋亡的迹象。结论不同程度的氟斑牙分泌期成釉细胞呈现一系列细胞凋亡迹象,且氟斑牙越严重,细胞凋亡的改变越明显。

大鼠前牙扭转移动后保持期动物模型的建立

目的建立大鼠实验性正畸前牙扭转移动后保持期的动物模型并分析保持时间与复发距离的关系。方法采用36只雌性SD大鼠,在上颌两个中切牙间施加20g的力量,建立牙根扭转的动物模型。10d后进行固定保持,分为1、4、7、14、21d保持组(实验组),并设不予保持的对照组。测量加力结束后、保持结束时和拆除保持器后7d两中切牙之间的距离变化。计算每组大鼠拆除保持器7d后的复发距离(M)。复发距离(M)=保持结束后两切牙之间的距离(M1)-复发7d后两切牙中间的距离(M2)。结果各实验组复发距离分别为(1.95±0.30)、(0.84±0.06)、(0.69±0.03)、(0.32±0.10)、(0.09±0.04)mm,明显小于对照组(2.57±0.08)mm,差异有统计学意义(P<0.05)。结论正畸用直径0.25mm结扎丝可以用作固定保持器来建立大鼠前牙扭转移动后保持期的动物模型。

老年大鼠切牙造牙本质细胞的超微结构变化

应用透射电镜研究了老年大鼠切牙造牙本质细胞的超微结构变化.该细胞核出现凹陷和切迹,常染色质减少,异染色质增加.胞浆内粗面内质网扩张、变短;线粒体水肿、嵴断裂、最后空泡化;高尔基复合体由复杂到简单,最后消失.相邻造牙本质细胞之间的间隙扩大,间隙内出现不同大小和形状的环层样小体,最后细胞间连接松解,细胞分离.

不同浓度氟饮水对大鼠下切牙形态变化的影响

目的:研究不同浓度氟饮水对大鼠下切牙形态学改变的影响。方法:将体重210±10g左右的S-D雄性成年大鼠105只随机分为4组,分别饮用含氟0、25、50、100mg/L的去离子水6周。用数码相机记录大鼠下切牙釉质的形态变化,扫描电镜观察不同程度氟牙症的形态改变。结果:对照组大鼠下切牙未发生改变。25mg/L氟实验组大鼠下切牙只发生颜色及透明度的改变。随氟浓度的增加,实验组大鼠下切牙釉质除发生颜色和透明度改变外,还发生了一系列棕白色相间横纹、牙面整个白垩色改变。扫描电镜结果显示对照组下切牙釉质唇面致密、平整、均一,实验组呈现不同程度的牙面粗糙、多孔及无基釉堆积。结论:不同浓度的饮水氟会引起釉质形态的不同表现。

过量氟对大鼠切牙Shh表达的影响

目的研究过量氟对大鼠切牙Shh(Sonic Hedgehog)表达的影响,从分子水平探讨氟斑牙的发病机制。方法20只Wistar大鼠随机分为2组:对照组(饮用蒸馏水)和实验组(饮用100mg/L氟化水),复制氟斑牙动物模型,8周末处死动物,获取切牙标本,免疫组化染色观察Shh在大鼠切牙的表达定位及在对照组与实验组切牙表达的变化。结果Shh在分泌期成釉细胞、成牙本质阳性表达。实验组Shh的表达明显弱于对照组,差异有显著性(P<.01)。结论过量氟可能通过抑制Shh的表达,从而影响牙齿发育的启动和随后的细胞分化,导致釉质发育障碍。

大鼠切牙生长发育的组织学和免疫组织化学研究

目的 :探讨釉质发育中釉器细胞的形态分化与其功能分化的关系 ,研究成熟期成釉细胞的 SA部与 RA部的形态在功能上的意义。方法 :采用大鼠进行心脏灌流固定、Epon、GMA树脂包埋 ,半薄切片技术 ,后进行甲苯氨蓝和组织化学染色 ,观察大鼠切牙发育组织形态学变化以及牙釉质蛋白的分布规律。结果 :大鼠的牙胚发育分为增殖期、分化期、成熟期。在成熟期成釉细胞呈特异的周期性变化 ,即 SA部和 RA部交替出现。组织化学研究结果显示在釉质形成期 ,釉质蛋白大部分留在釉基质层 ,也有一部分向牙本质内扩散到牙本质、牙本质小管以及造牙本质细胞层内。结论 :1大鼠切牙釉器发育的增殖期、分化期、成熟期分别与人牙的蕾状期、帽状期、钟状期相似。成熟期成釉细胞的 RA部与无机质的注入有关系 ,SA部与水和蛋白质的脱去有关系。 2关于牙釉质蛋白向牙本质侧的扩散 。

大鼠下颌切牙更替周期及氟化物对其影响

目的计算正常及氟斑牙大鼠下颌切牙更替周期,探讨氟化物对切牙生长速率的影响。方法选取30只6周龄雄性SD大鼠,随机分为3组,每组10只。对照组以不含氟的去离子水喂养,低氟组以50 mg·L^-1的氟化钠去离子水喂养,高氟组以100 mg·L^-1的氟化钠去离子水喂养。记录氟斑牙发生情况,实验开始当天用高速牙科手机于右侧下颌切牙远中齐龈处刻一标记A,以后每周于齐龈位置分别做标记B、C、D、E、F、G,用游标卡尺测量第1周萌出长度m 1和第6周萌出长度m 6。饲养6周后测量牙齿唇舌侧厚度,处死大鼠后取其下颌切牙,测量牙齿总长度n,计算m 1/n、m 6/n值。结果对照组牙齿釉质呈棕黄色半透明,低氟组牙齿釉质呈棕白色条纹状改变,高氟组牙齿釉质呈现白垩色改变。对照组、低氟组、高氟组m 1分别为(5.21±0.98)、(4.43±0.57)、(5.01±0.88)mm,m 6分别为(4.75±0.65)、(4.34±0.54)、(4.55±0.70)mm,n分别为(24.81±1.54)、(23.65±1.06)、(23.76±0.94)mm,m 1/n分别为(0.21±0.03)、(0.19±0.02)、(0.21±0.05)mm,m 6/n分别为(0.20±0.01)、(0.19±0.02)、(0.20±0.02)mm,唇舌侧厚度分别为(2.11±0.06)、(2.08±0.06)、(2.06±0.05)mm。3组大鼠m 1、m 6、n、m 1/n、m 6/n、唇舌侧厚度值相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠下颌切牙更替周期约为5周,氟化物不影响其更替周期及牙骨质和牙釉质形成速率。

大鼠切牙牙髓血管构筑

用树脂铸型方法,在解剖显微镜及扫描电镜下,观测了大鼠上、下切牙的牙髓血管构筑。其特征为,牙髓中轴血管束由10~20支微动脉和8~12支微静脉构成;中轴血管束中的微动脉和微静脉呈长距离的逆流配置;成牙本质细胞区的毛细血管丛,由分节段且互相独立的微动脉供应。

过量氟对大鼠切牙牙本质涎蛋白mRNA表达的影响

目的研究过量氟对大鼠切牙发育过程中牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)mRNA表达的影响。方法选择6只Wistar大鼠,随机分成两组:对照组常规饲料喂养,自由饮用蒸馏水;实验组常规饲料喂养,自由饮用氟离子浓度为100 mg/L的氟化水,建立大鼠氟斑牙模型。饲养8周处死动物,提取大鼠切牙组织总RNA,逆转录为cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应技术观察过量氟对大鼠切牙中DSP mRNA表达的影响。结果实时荧光定量聚合酶链反应结果显示DSP mRNA在实验组表达水平明显高于对照组表达水平(t=2.132,P<0.01)。结论过量氟可能通过增强DSP mRNA的表达,影响牙本质的发育矿化。

大鼠切牙颈环上皮细胞的培养

目的:培养大鼠切牙颈环上皮细胞。方法:选择出生后(postnatal,PN)8d的SD大鼠,分离下颌切牙牙胚,切取切牙颈环结构,酶消化法细胞培养。通过差别消化法初步纯化颈环上皮细胞,抗角蛋白免疫化学染色初步鉴定颈环上皮细胞。结果:原代培养细胞为上皮和间充质混杂的细胞,经初步纯化获得铺路石样排列的,角蛋白阳性的颈环上皮细胞团。结论:实验成功培养了大鼠切牙颈环上皮细胞。

大鼠切牙apical bud上皮细胞的分离与培养

目的:建立一种分离、培养大鼠切牙apical bud上皮细胞的有效方法。方法:选择出生后5 d SD仔鼠,分离下颌切牙牙胚。将切牙颈部末端apical bud切下,酶消化后原代培养。经差别消化及选择性培养液纯化,并对培养的细胞进行角蛋白14和釉原蛋白、波形丝蛋白免疫组织化学染色鉴定。结果:培养的原代细胞混杂部分间充质细胞,经差别消化和选择性培养液纯化后获得了单一的上皮样细胞,此类细胞角蛋白14和釉原蛋白染色阳性,波形丝蛋白染色阴性。结论:经本方法的分离、培养成功地获得了纯化的大鼠切牙颈环上皮细胞。

Calbindin-D28k与肌动蛋白在大鼠切牙成牙本质细胞的分布

目的 探讨Calbindin D2 8k与肌动蛋白在大鼠下颌切牙成牙本质细胞中分布的相关性及其意义。方法 用免疫组化方法分别检测Calbindin D2 8k与肌动蛋白在大鼠下颌切牙成牙本质细胞中的表达并观察比较。结果 大鼠下颌切牙唇侧区域的冠方 2 /3成牙本质细胞Calbindin D2 8k与肌动蛋白表达均为阳性 ,且都集中于成牙本质细胞突 ;根尖区和舌侧成牙本质细胞均为阴性。结论 Calbindin D2 8k与肌动蛋白在大鼠下颌切牙成牙本质细胞中的分布具有一致性 ,与牙本质的形成密切相关。

阿莫西林对SD大鼠牙釉质矿化影响的研究

目的探究SD大鼠牙釉质发育期摄入阿莫西林对牙釉质矿化的影响。方法选取18只新生SD大鼠,采用完全随机的方法将其分为3组,每组6只,对照组和两个实验组大鼠在出生后第3~17天内分别给予蒸馏水、50 mg·kg·^(-1)·d·^(-1)(50 mg组)和 100 mg·kg·^(-1)·d·^(-1)(100 mg组)阿莫西林,观察各组大鼠一般状况、肝肾组织结构、下颌第一磨牙及切牙釉质表面情况,X射线能谱仪分析牙釉质表面的Ca/P变化,扫描电镜观察1%磷酸酸蚀后的牙釉质表面形貌变化,HE染色观察大鼠下颌切牙成釉细胞的形态改变。结果与对照组相比,50和100 mg组大鼠一般状况及肝肾组织结构均未见明显变化。各组大鼠下颌第一磨牙均未见明显的釉面白斑;50和100 mg组所有大鼠上下颌切牙唇面切1/3区均出现不同程度的白垩色改变。X射线能谱仪分析显示,在下颌第一磨牙1/3区及下颌切牙切1/3区,50和100 mg组的Ca/P(第一磨牙1/3区分别为1.51±0.03和1.52±0.02,下颌切牙切1/3区分别为1.46±0.01和1.43±0.01)均较对照组(第一磨牙1/3区为1.67±0.41,下颌切牙切1/3区为1.73±0.07)显著降低(P<0.05);在下颌第一磨牙和下颌切牙的颈1/3区,50和100 mg组的Ca/P(第一磨牙颈1/3区分别为1.59±0.05和1.57±0.04,切牙颈1/3区分别为1.47±0.01和1.51±0.03)与对照组(第一磨牙颈1/3区为1.56±0.04,切牙颈1/3区为1.52±0.02)相比差异均无统计学意义(P>0.05)。扫描电镜观察显示,50和100 mg组下颌第一磨牙和下颌切牙酸蚀处理后釉柱大小不一,排列紊乱,釉柱间隙均较对照组增大,部分区域甚至出现较大的凹坑。HE染色结果显示,50和100 mg组大鼠切牙成熟期成釉细胞细胞间隙较对照组增宽。结论 SD大鼠牙釉质发育期摄入阿莫西林可能影响其牙釉质矿化。

大鼠切牙牙本质的透射电镜观察

应用透射电镜观察了大鼠切牙牙本质的超微结构。结果表明，牙本质的胶原原纤维分粗、细两种，从牙本质的牙髓侧向牙表面方向和从牙本质小管附近至其远方，该纤维由细逐渐变粗，由排列疏松变为致密。胶原纤维一般先连接成束，然后以束呈纵行、横向和矢状方向穿行，彼此垂直，交织成网，有的与牙本质小管平行，有的与其垂直，这种排列可能与增强牙承受力的能力有关。牙本质小管内衬有鞘样界膜，该膜可能在控制牙本质的形成中起了作用。