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基于上皮细胞-间充质转化的搜风愈喘方调控哮喘大鼠气道重塑的机制研究
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作者 李艳丽 张宇婧 闫永彬 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期208-215,共8页
目的探讨搜风愈喘方通过调控上皮细胞-间充质转化(EMT)抑制哮喘气道重塑的作用机制。方法将60只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组及搜风愈喘方高、中、低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组均采用卵清白蛋白(OVA... 目的探讨搜风愈喘方通过调控上皮细胞-间充质转化(EMT)抑制哮喘气道重塑的作用机制。方法将60只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组及搜风愈喘方高、中、低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组均采用卵清白蛋白(OVA)注射和雾化复制哮喘大鼠模型。各组大鼠给予相应药物灌胃21 d后处死大鼠,苏木素-伊红(HE)染色,观察肺组织病理形态学变化;透射电镜观察大鼠肺组织中上皮细胞超微结构情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中的转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素17(IL-17)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测肺组织匀浆中TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的mRNA表达。蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肺组织中TGF-β1、α-SMA、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清中TGF-β1、IL-17含量明显升高(P<0.01),肺组织中TGF-β1、α-SMA和N-cadherin mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.01),E-cadherin mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.01);HE染色显示气道壁及肺泡壁增厚,视野内可见大量炎症细胞浸润,炎症评分明显升高(P<0.01);透射电镜显示肺组织中上皮细胞水肿程度严重,胞内基质局部溶解、变淡,细胞器肿胀明显。与模型对照组比较,地塞米松组和搜风愈喘方各剂量组大鼠血清中TGF-β1、IL-17含量明显降低(P<0.05,P<0.01),TGF-β1、α-SMA和N-cadherin mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),E-cadherin mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01);肺组织炎症细胞浸润减轻,支气管壁及肺泡壁增厚程度减轻,地塞米松组和搜风愈喘方高剂量组炎症评分降低(P<0.05);超微结构显示上皮细胞水肿程度明显减轻,细胞膜完整,胞内基质均匀,细胞器大多轻微肿胀。结论搜风愈喘方可降低TGF-β1水平,从而改善肺组织EMT,达到防治哮喘气道重塑的目的。 展开更多
关键词 搜风愈喘方 哮喘 气道上皮细胞 上皮细胞-间充质转化 气道重塑 大鼠
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基于Wnt/β-catenin信号通路探讨子宫内膜来源间充质干细胞抑制子宫内膜纤维化的机制
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作者 靳涛 颜望碧 殷琦 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第4期640-646,共7页
目的探讨Wnt/β-catenin信号通路介导间质上皮转化(EMT)在子宫内膜来源间充质干细胞(eMSCs)抑制子宫内膜纤维化中的作用机制。方法将18只雌性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组和eMSCs组,每组6只。Sham组的大鼠在剖腹手术后... 目的探讨Wnt/β-catenin信号通路介导间质上皮转化(EMT)在子宫内膜来源间充质干细胞(eMSCs)抑制子宫内膜纤维化中的作用机制。方法将18只雌性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组和eMSCs组,每组6只。Sham组的大鼠在剖腹手术后不接受任何形式的子宫介入手术。Model组和eMSCs组建立子宫内粘连大鼠模型。eMSCs组在模型损伤后立即移植eMSCs细胞悬液进行治疗,总量为每子宫0.05 ml(2×107细胞/ml)。3周后收集单侧损伤子宫进行苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色。通过蛋白质印迹分析子宫内膜纤维化、EMT、Wnt/β-catenin通路蛋白表达。结果Model组大鼠宫腔结构破坏,腺体数量明显减少并积聚大量蓝色胶原纤维,但在eMSCs治疗后子宫内膜腺体数量显著增加,并且纤维化面积显著降低。与Sham组相比,Model组中I型胶原和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达水平显著增加(P<0.05),但在eMSCs组中均显著减少(P<0.05)。在Model组中,N-cadherin、Vimentin和ZEB1的表达显著增加,而E-cadherin的表达减少。然而,在eMSCs组中,上述分子蛋白质的变化完全相反。与Sham组相比,Model组β-连环蛋白(β-catenin)和C-myc表达增加(P<0.05)。与Model组相比,eMSCs组中周期蛋白E(CyclinE)、β-catenin和C-myc表达增加(P<0.05)。结论eMSCs可以通过抑制EMT和子宫内膜纤维化来促进子宫内粘连大鼠子宫内膜修复,这种作用部分是通过激活Wnt/β-catenin信号通路来实现。 展开更多
关键词 WNT/Β-CATENIN信号通路 间质上皮转化 子宫内膜来源间充质干细胞 子宫内膜纤维化 大鼠 子宫内粘连模型
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H_2O_2致大鼠RTE细胞系氧化应激作用及GSH保护作用的体外研究 被引量:1
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作者 余锦波 邹鉴 +5 位作者 朱雨晴 朱家力 杜晶 李潇潇 郭晴 杨旭 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期124-129,共6页
许多具有氧化作用的空气污染物,均能使细胞产生氧化损伤,使胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)含量上升。而TSLP是一种启动过敏性炎症的重要因子,会导致哮喘等疾病发生率的上升。在本研究中用过氧化氢(H_2O_2)模拟... 许多具有氧化作用的空气污染物,均能使细胞产生氧化损伤,使胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)含量上升。而TSLP是一种启动过敏性炎症的重要因子,会导致哮喘等疾病发生率的上升。在本研究中用过氧化氢(H_2O_2)模拟具有氧化作用的空气污染物进行染毒,研究细胞氧化应激水平的变化,并讨论还原型谷胱甘肽(GSH)对细胞受氧化损伤的保护作用。将大鼠支气管上皮细胞(RTE)分组培养,每组设置6个平行实验,分别用低、中、高剂量H_2O_2染毒3 h;高剂量设置1个重复,作为保护组,在染毒前用GSH保护2 h。结果显示,高剂量组H_2O_2(3.2 mmol·L^(^(-1)))染毒的细胞,其细胞活力下降(P<0.01),丙二醛(MDA)水平上升(P<0.01),TSLP水平上升(P<0.05),与之相比,用GSH保护后的同剂量染毒组,上述指标得到全面缓解(P<0.01)。这表明高浓度的H_2O_2会损伤细胞活力,并使MDA及TSLP水平上升,而GSH对TSLP及MDA的升高有极显著的抑制作用,即对细胞有一定的保护作用。 展开更多
关键词 过氧化氢 大鼠支气管上皮细胞 rte细胞 谷胱甘肽 胸腺基质淋巴细胞生成素 丙二醛 氧化损伤
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In vitro TRANSFORMATION OF RAT ESOPHAGEAL EPITHELIAL CELLS BY FUSARIN C
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作者 鲁夫雄 李铭新 程书钧 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1991年第12期1469-1477,共9页
Fusarin C (FC) is a mutagenic and carcinogenic mycotoxin which was isolated from Fu-sarium moniliforme culture extracts. The Fusarium moniliforme is one of most prevalent fungi found on corn in Linxian, a high risk ar... Fusarin C (FC) is a mutagenic and carcinogenic mycotoxin which was isolated from Fu-sarium moniliforme culture extracts. The Fusarium moniliforme is one of most prevalent fungi found on corn in Linxian, a high risk area for esophageal cancer. This paper reports, for the first time, the malignant transformation of rat esophageal epithelial cells induced by FC. The transformed cells showed several characteristics of transformation. Colonies were formed after seeding these transformed cells either into selective medium free of epidermal growth factor (EGF) and serum, or on semi-solid agar; there was an increase in chromosome number; the expression of c-myc and v-erb-B oncogenes was enhanced in the cells; and squamous cell carcinomas arose after inoculating the cells into nude mice. The results demonstrated transforming effect of FC on rat esophageal epithelial cells, and indicate that the abnormal expression of some oncogenes could serve as a hew property of transformed cells. 展开更多
关键词 rat ESOPHAGUS epithelial cells MALIGNANT transformation Fusarin C oncogenes.
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香烟及其亚硝胺NNK诱发大鼠气管上皮细胞转化及异硫氰酸衍生物抑制作用的研究 被引量:3
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作者 王虹 陈雷 +4 位作者 项芒 蒋原宙 韩乃君 郭素萍 程书钧 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 1996年第1期5-9,共5页
利用本室建立的大鼠气管上皮(RTE)细胞转化体系,研究了吸烟和肺癌发生的关系以及异硫氰酸衍生物PHITC对吸烟诱发肺癌的防护作用。结果表明,香烟烟雾凝集物及其中的亚硝胺NNK可以引起RTE细胞的转化。采用改进的气管滴... 利用本室建立的大鼠气管上皮(RTE)细胞转化体系,研究了吸烟和肺癌发生的关系以及异硫氰酸衍生物PHITC对吸烟诱发肺癌的防护作用。结果表明,香烟烟雾凝集物及其中的亚硝胺NNK可以引起RTE细胞的转化。采用改进的气管滴注致癌物的方式,较以往降低了NNK引起转化的最低济量,有利于正确评估香烟诱发肺癌的危险性。异硫氰醉衍生物PHITC可以抑制NNK诱导的DNA加成物的形成及NNK对RTE细胞的转化作用。 展开更多
关键词 rte 肺癌 NNK CSC 异硫氰酸衍生物
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化学致癌物体外转化大鼠气管上皮细胞的研究 被引量:2
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作者 高燕宁 程书钧 +1 位作者 安兵 郭素萍 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第5期325-329,T011,T012,共7页
作者建立了大鼠气管上皮(rat tracheal epithelial,RTE)细胞的单层原代培养和RTE细胞体外转化实验,比较有滋养层和无滋养层RTE细胞转化系统的实验结果。首次证明烟草中的特殊亚硝胺——甲基亚硝基吡啶基丁酮(NNK)对RTE细胞有体外转化作... 作者建立了大鼠气管上皮(rat tracheal epithelial,RTE)细胞的单层原代培养和RTE细胞体外转化实验,比较有滋养层和无滋养层RTE细胞转化系统的实验结果。首次证明烟草中的特殊亚硝胺——甲基亚硝基吡啶基丁酮(NNK)对RTE细胞有体外转化作用。在甲基硝基亚硝基胍(MNNG)和NNK诱导转化实验中,有滋养层和无滋养层体外转化系统得到的结果一致,而后者在RTE细胞体外转化应用中更为敏感而方便。 展开更多
关键词 气管上皮细胞 体外转化 化学致癌物
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热处理光滑念珠菌对大鼠气道上皮细胞Dectin-1、IL-6和TNF-α表达的影响 被引量:2
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作者 张雪 骆雪萍 +3 位作者 白剑 王玉春 吴呈霖 赵莹 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第7期865-868,共4页
目的探讨大鼠气道上皮(RTE)细胞与热处理光滑念珠菌孵育后Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达及意义。方法以体外培养的RTE细胞与热处理光滑念珠菌孵育后分别于2、4、6h观察RTE细胞形态变化,以未与光滑念珠菌孵育的RTE细胞为对照组。用Wester... 目的探讨大鼠气道上皮(RTE)细胞与热处理光滑念珠菌孵育后Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达及意义。方法以体外培养的RTE细胞与热处理光滑念珠菌孵育后分别于2、4、6h观察RTE细胞形态变化,以未与光滑念珠菌孵育的RTE细胞为对照组。用Western blot法检测Dectin-1蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测IL-6和TNF-αmRNA的表达;ELISA法检测上清液IL-6和TNF-α的分泌。结果随着孵育时间的延长,RTE细胞破坏逐渐加重及Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达呈进行性增高。孵育2h组与对照组比较、孵育4h组与孵育2h组比较、孵育6h组与孵育4h组比较,Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RTE细胞具有天然免疫功能,其Dectin-1参与了对热处理光滑念珠菌的识别,并激活IL-6和TNF-α的分泌,介导炎性反应。IL-6起负性调节作用。 展开更多
关键词 热处理光滑念珠菌 Dectin-1受体 大鼠气道上皮细胞 肿瘤坏死因子Α 白细胞介素6
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1,25(OH)_2D_3对血管紧张素Ⅱ诱导的肾小管上皮细胞转化的抑制作用 被引量:1
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作者 康红 曹琳 +3 位作者 喻洁 欧阳琳娜 陈姗 郑维 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1-5,共5页
目的探讨1,25(OH)2D3对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小管上皮细胞转化起始过程的抑制作用,为临床肾间质纤维化的防治提供理论依据。方法分离SD大鼠肾小管上皮细胞,将其分为对照组、AngⅡ诱导组(AngⅡ终浓度10-8mol/L)以及AngⅡ(10-8mol/... 目的探讨1,25(OH)2D3对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小管上皮细胞转化起始过程的抑制作用,为临床肾间质纤维化的防治提供理论依据。方法分离SD大鼠肾小管上皮细胞,将其分为对照组、AngⅡ诱导组(AngⅡ终浓度10-8mol/L)以及AngⅡ(10-8mol/L)+1,25(OH)2D3干预组[1,25(OH)2D3终浓度分别为10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L],培养48 h后收集各组细胞。利用酶联免疫吸附实验检测ColⅠ和FN;Real-time RT-PCR检测肾小管上皮细胞TGF-β1mRNA表达;Western Blot检测肾小管上皮细胞TGF-β1蛋白表达。结果实验48 h后,AngⅡ组TGF-β1mRNA表达、蛋白表达及培养上清中ColⅠ和FN浓度均较对照组显著增高,AngⅡ+10-6mol/L1,25(OH)2D3组TGF-β1mRNA表达、蛋白表达较对照组明显增高,但细胞培养上清中ColⅠ和FN浓度仅略有增高,差异无显著性,随着1,25(OH)2D3浓度的降低(10-7mol/L,10-8mol/L),TGF-β1mRNA表达、蛋白表达,细胞培养上清中ColⅠ和FN浓度也随之显著增高(P<0.05)。结论 1,25(OH)2VD3可以部分抑制AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞EMT,其机制可能是通过抑制肾小管上皮细胞TGF-β1基因与蛋白表达、减少肾小管上皮细胞ColⅠ和FN分泌实现的。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 1 25(OH)2D3 血管紧张素Ⅱ 转化生长因子 大鼠
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大鼠视网膜Müller细胞在高糖、氧化应激、缺氧中的表现 被引量:1
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作者 李春花 冯朝晖 +4 位作者 张雪 田冰玉 雷晓琴 周婷洁 马为梅 《中国医药导报》 CAS 2019年第15期18-20,40,F0003,F0004,共6页
目的观察Sprague-Dawley(SD)大鼠视网膜Müller细胞在高糖、氧化应激、缺氧三种病理环境下的特征,为糖尿病视网膜病变的防治提供新的研究依据。方法体外培养SD大鼠视网膜Müller细胞,并用谷氨酰胺合成酶(GS)鉴定。将传2代的细... 目的观察Sprague-Dawley(SD)大鼠视网膜Müller细胞在高糖、氧化应激、缺氧三种病理环境下的特征,为糖尿病视网膜病变的防治提供新的研究依据。方法体外培养SD大鼠视网膜Müller细胞,并用谷氨酰胺合成酶(GS)鉴定。将传2代的细胞随机分为四组:对照组、高糖组、氧化应激组、缺氧组。倒置显微镜观察细胞形态学改变,免疫荧光染色法观察细胞GS和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化,Transwell小室观察细胞迁移能力。结果体外成功培养并鉴定鼠Müller细胞,四组Müller细胞功能均受损,氧化应激组以及缺氧组结构受损明显,失去正常形态。缺氧组中α-SMA的表达呈阳性,并且在Transwell小室中发生迁移的细胞数明显多于其他组,差异有统计学意义(P < 0.05)。结论高糖、氧化应激、缺氧均可导致Müller细胞功能受损,缺氧可诱导Müller细胞转化为具有迁移能力的肌纤维样细胞,提示Müller细胞参与了增生性糖尿病视网膜病变的发病过程。 展开更多
关键词 SD大鼠 视网膜MÜLLER细胞 糖尿病视网膜病变 上皮细胞间质转化 Transwell小室
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PPARγ受体在大鼠缺氧性肾小管上皮细胞损伤中的表达及意义 被引量:1
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作者 蒋玲 李正一 +3 位作者 周志强 陈秀萍 雷凤英 覃远汉 《山东医药》 CAS 2014年第45期4-6,共3页
目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在大鼠缺氧性肾小管上皮细胞(RTEC)损伤中的表达及意义。方法将体外传代培养的大鼠RTEC随机分为正常对照组、缺氧模型组、罗格列酮(RGZ)组和GW9662组。RGZ组加入15μmol/L RGZ,GW9662组加... 目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在大鼠缺氧性肾小管上皮细胞(RTEC)损伤中的表达及意义。方法将体外传代培养的大鼠RTEC随机分为正常对照组、缺氧模型组、罗格列酮(RGZ)组和GW9662组。RGZ组加入15μmol/L RGZ,GW9662组加入25μmol/L GW9662,将缺氧模型组、RGZ组、GW9662组放入真空罐中制作RTEC缺氧模型。正常对照组细胞不做处理。造模36 h后,采RT-PCR法和Western blot法检测各组RTEC PPARγ、转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA及蛋白表达。结果与正常对照组比较,缺氧模型组、RGZ组、GW9662组RTEC PPARγmRNA表达显著升高、蛋白表达显著降低(P均<0.05);与缺氧模型组相比,RGZ组RTEC PPARγmRNA表达降低,GW9662组表达上升(P均<0.05)。与正常对照组比较,缺氧模型组、RGZ组、GW9662组RTEC TGF-β1mRNA表达显著降低、蛋白表达显著升高(P均<0.05);与缺氧模型组比较,RGZ组RTEC TGF-β1mRNA表达上升,GW9662组表达降低(P均<0.05)。相关性分析显示,缺氧性RTEC损伤中PPARγ的蛋白表达与TGF-β1的蛋白表达呈显著负相关(r=-0.91,P<0.05)。结论 PPARγ蛋白的低表达可能参与了缺氧性RTEC损伤的发生;RGZ可能通过上调PPARγ蛋白的表达而减轻缺氧性RTEC损伤。 展开更多
关键词 细胞损伤 肾小管上皮 过氧化物酶体增殖物激活受体Γ 转化生长因子Β 大鼠
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维胺酸对体外转化人支气管上皮细胞及体内构建人支气管上皮组织的抑制作用 被引量:1
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作者 舒为群 程书钧 +2 位作者 郭素萍 李凌 韩乃君 《实验生物学报》 CSCD 2000年第3期263-271,共9页
癌前改变是肿瘤演变过程中的关键阶段。许多研究显示维甲类化合物对动物肿瘤及体外恶性细胞系具有抑制作用,但尚未见其对肺癌前病变作用的实验室研究报道。人类肺癌的绝大部分起源于支气管上皮,为研究维胺酸对体外转化人支气管上皮M细... 癌前改变是肿瘤演变过程中的关键阶段。许多研究显示维甲类化合物对动物肿瘤及体外恶性细胞系具有抑制作用,但尚未见其对肺癌前病变作用的实验室研究报道。人类肺癌的绝大部分起源于支气管上皮,为研究维胺酸对体外转化人支气管上皮M细胞系以及在大鼠气管构建后移植到裸鼠体内生长的具有癌前病变特点的人支气管上皮组织的抑制作用,采用上皮细胞无血清培养技术,人支气管上皮组织大鼠气管内构建/裸鼠皮下移植生长技术,流式细胞学分析,免疫组化、凋亡细胞原位末端标记以及病理学检查等研究方法发现,维胺酸可抑制体外培养的转化人支气管上皮细胞的增殖,使S期细胞比例下降,以及细胞增殖标志Ki-67、mpm-2阳性反应细胞比例下降;明显诱导细胞凋亡。裸鼠腹腔注射给予维胺酸也可使大鼠气管内构建后移植到裸鼠体内生长的癌前期人支气管上皮组织的生长率明显降低,病变程度明显减轻;同样可以诱导细胞凋亡。研究结果提示,维胺酸对体外培养的转化人支气管上皮细胞系及大鼠气管构建/裸鼠体内移植生长的人支气管上皮组织均有明显的抑制作用,是有希望的肺癌化学预防药物。 展开更多
关键词 维胺酸 上皮细胞 上支气管上皮 肿瘤
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转化生长因子β_1及p53对大鼠气管上皮细胞转化的影响
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作者 王虹 陈蕾 +3 位作者 韩乃君 戴金文 赵春霞 程书钧 《基础医学与临床》 CSCD 1999年第5期46-50,共5页
本义研究转化生长因子β1(TGF-β1)和P53对致癌物转化的大鼠气管上皮(RTE)细胞的影响。结果表明早期转化的RTE细胞(尚未具致癌性)和恶性转化的RTE细胞(已具致癌性)的条件培养基可以抑制原代RTE细胞的集落形成率(CFE),部分抑... 本义研究转化生长因子β1(TGF-β1)和P53对致癌物转化的大鼠气管上皮(RTE)细胞的影响。结果表明早期转化的RTE细胞(尚未具致癌性)和恶性转化的RTE细胞(已具致癌性)的条件培养基可以抑制原代RTE细胞的集落形成率(CFE),部分抑制早期转化RTE细胞的CFE,但对恶性转化的RTE细胞无抑制作用。TGF个;中和抗体可以阻断这种抑制作用,表明条件培养基中可能有TGF-β1。转化RTE细胞分泌TGF-β1可使对后者有抗性作用的细胞具有生长优势。为了评价P53对RTE细胞转化的作用,将野生型,突变型P53分别导人早期转化的RTE,研究表明,野生型P53抑制,而突变型P53促进转染细胞的CFE。突变型P53可能增强TGF-β1的分泌,从而促进转染细胞在裸鼠中癌变。本研究表明突变型P53可能通过TGF-β1自分泌或旁分泌途径促进RTE细胞恶性转化。 展开更多
关键词 转化生长因子 P53基因 TGF-Β1 气管上皮细胞
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大鼠肺泡II型上皮细胞系RAE-1的建立及其生物学特性
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作者 张绪超 刘秉慈 +4 位作者 缪庆 尤宝荣 徐茗 何鹏 张相民 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期148-151,共4页
建立肺泡II型细胞系为研究细胞恶性转化提供实验模型。采用Nycodenz密度梯度离心法分离了大鼠肺泡II型上皮细胞 ,原代培养大鼠肺泡II型上皮细胞并将SV4 0病毒的早期区大T基因转导入上皮细胞 ,建立了可在体外长期稳定传代的细胞系RAE - ... 建立肺泡II型细胞系为研究细胞恶性转化提供实验模型。采用Nycodenz密度梯度离心法分离了大鼠肺泡II型上皮细胞 ,原代培养大鼠肺泡II型上皮细胞并将SV4 0病毒的早期区大T基因转导入上皮细胞 ,建立了可在体外长期稳定传代的细胞系RAE - 1。对此细胞系的生物学特性分析表明 :细胞的基因组中整合了SV4 0T基因 ;染色体分析以非整倍体为主 ,众数染色体为 4 4条 ;细胞不能在软琼脂上形成克隆 ;除了转化特性以外 ,RAE - 1细胞仍保留了正常的上皮组织角蛋白Ck8。 展开更多
关键词 大鼠 肺泡Ⅱ型 上皮细胞系 RAE-1 建立 生物学特性 肺肿瘤
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nm23参与α粒子辐射致大鼠气管上皮细胞恶性转化的原发过程
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作者 李刚 吴德昌 +2 位作者 胡迎春 赵永良 项晓琼 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第4期392-394,共3页
目的:克隆α粒子辐射致细胞恶性转化相关基因。方法:采用m R N A 差异显示技术识别原代大鼠气管上皮细胞同由α粒子辐射诱发恶转的大鼠气管上皮细胞之间的差别表达基因。结果:共克隆到15 个可能同α粒子辐射致细胞恶性转化相... 目的:克隆α粒子辐射致细胞恶性转化相关基因。方法:采用m R N A 差异显示技术识别原代大鼠气管上皮细胞同由α粒子辐射诱发恶转的大鼠气管上皮细胞之间的差别表达基因。结果:共克隆到15 个可能同α粒子辐射致细胞恶性转化相关的差异表达基因片段( E S Ts) ,共向 Gen Bank 登录7 条新基因序列。其中克隆 Z C66 同肿瘤转移抑制基因nm 23 高度同源,经 Northerm 杂交证实其在恶转的大鼠气管上皮细胞中高表达,序列分析提示n m23在此恶转细胞中存在突变。结论:上述结果为进一步深入研究辐射致癌提供了线索,并提示n m23 基因可能参与α粒子辐射致大鼠气管上皮细胞恶性转化的原发过程。 展开更多
关键词 肿瘤 α粒子辐射 大鼠 NM23 气管 上皮细胞 恶变
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TGF-β对WB鼠肝脏上皮细胞内Ⅰ型IP_3受体表达的影响
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作者 李颖 韩峰 刘沛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期586-588,593,共4页
目的:探讨TGF-β对WB鼠肝脏上皮细胞内Ⅰ型IP3受体表达的影响。方法:通过对WB细胞的培养,应用Westernblot和RT-PCR技术分别检测在TGF-β刺激不同时间后WB细胞内Ⅰ型IP3受体蛋白和mRNA的表达。结果:TGF-β刺激不同时间后WB细胞内Ⅰ型IP3... 目的:探讨TGF-β对WB鼠肝脏上皮细胞内Ⅰ型IP3受体表达的影响。方法:通过对WB细胞的培养,应用Westernblot和RT-PCR技术分别检测在TGF-β刺激不同时间后WB细胞内Ⅰ型IP3受体蛋白和mRNA的表达。结果:TGF-β刺激不同时间后WB细胞内Ⅰ型IP3受体蛋白和mRNA的表达均有所增加,8小时的表达达到最高峰,然后开始下降。结论:TGF-β可增强WB细胞内Ⅰ型IP3受体蛋白和mRNA的表达。 展开更多
关键词 转化生长因子Β WB鼠肝脏上皮细胞 三磷酸肌醇 受体
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对Smad7/转化生长因子β1/整合素连接激酶信号通路的影响
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作者 龚娜 张祖隆 +1 位作者 李莉 熊世红 《临床肾脏病杂志》 2013年第9期422-425,F0002,共5页
目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠单侧输尿管结扎梗阻致肾间质纤维化的作用及其可能机制。方法54只SD大鼠随机分为假手术对照组(C组)、模型组(M组)和AcSDKP治疗组(T组),其中M组建立单侧输尿管结... 目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠单侧输尿管结扎梗阻致肾间质纤维化的作用及其可能机制。方法54只SD大鼠随机分为假手术对照组(C组)、模型组(M组)和AcSDKP治疗组(T组),其中M组建立单侧输尿管结扎梗阻致。肾间质纤维化模型,T组并给予AcSDKP治疗。术后第3、7和14天处死各组大鼠,并将肾的1/2制作切片行HE和Masson染色观察肾脏病理学动态改变,免疫组化法检测。肾间质组织内转化生长因子81和Smad7、α-平滑肌肌动蛋白的表达。RTPCR测肾小管上皮细胞整合素连接激酶mRNA。结果HE染色及Masson染色显示,M组术后随时间延长肾小管间质病变加重,程度同期最重,T组病变程度介于同期M组及C组之间。C组基本正常,结果有统计学差异(P〈0.05)。免疫组化及RT-PCR结果:M组转化生长因子β1、α-平滑肌肌动蛋白和整合素连接激酶mRNA表达随时间延长逐渐上调,程度同期最高。T组蛋白表达程度介于M组及C组之间。C组表达最低,结果有统计学差异(P〈0.05);同期T组肾间质Smad7表达明显上调,低于同期C组,但高于M组,结果有统计学差异(P〈0.05)。结论AcSDKP对大鼠肾间质纤维化有抑制作用,其机制可能通过增加大鼠UUO模型中Smad7蛋白的表达抑制转化生长因子β1/整合素连接激酶信号转导。 展开更多
关键词 大鼠 上皮细胞 转化生长因子
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大鼠气管上皮细胞体内-体外转化模型的研究
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作者 冯继农 徐晋康 程书钧 《卫生毒理学杂志》 CSCD 1993年第3期151-153,共3页
本研究建立了大鼠气管上皮细胞体内-体外转化模型。大鼠气管内滴注苯并(a)芘,三天后处死大鼠,消化气管上皮细胞,接种于无血清完全培养基。细胞形成集落后,换为选择培养基继续培养五周,统计转化率。结果显示,25mg/kg和50mg/kg的苯并(a)... 本研究建立了大鼠气管上皮细胞体内-体外转化模型。大鼠气管内滴注苯并(a)芘,三天后处死大鼠,消化气管上皮细胞,接种于无血清完全培养基。细胞形成集落后,换为选择培养基继续培养五周,统计转化率。结果显示,25mg/kg和50mg/kg的苯并(a)芘可诱导大鼠气管上皮细胞转化及微核增加。用同样方法研究了煤焦沥青提取物,结果表明,剂量为8mg/kg和25mg/kg的煤焦沥青提取物能明显诱导大鼠气管上皮细胞转化。 展开更多
关键词 气管上皮细胞 细胞转化 癌变机理 动物模型 肺癌
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GCLC基因上游AHR/ARNT元件负性调控GCLC基因在大鼠支气管上皮细胞的表达 被引量:1
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作者 赖宁 李冰 +3 位作者 王健 付欣 洪玮 冉丕鑫 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期429-435,共7页
研究谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)基因上游调控序列中2个AHR/ARNT元件的功能,从而了解γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因转录调节特征.分别构建缺失2个位点AHR/ARNT元件的GCLC基因上游近端序列的萤光素酶报道基因载体以及含... 研究谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)基因上游调控序列中2个AHR/ARNT元件的功能,从而了解γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因转录调节特征.分别构建缺失2个位点AHR/ARNT元件的GCLC基因上游近端序列的萤光素酶报道基因载体以及含有2个AHR/ARNT元件核心序列的萤光素酶报道基因载体.转染大鼠支气管上皮细胞(RTE),比较检测野生与缺失报道载体的基因转录调控效率;利用电泳迁移率变动实验(EMSA)和超级迁移率变动实验检测AHR/ARNT元件与AHR以及ARNT因子的特异性结合;通过转染AHR因子真核表达质粒进一步确定AHR/ARNT元件与AHR结合在GCLC基因表达中的最终作用.结果显示,相比其野生序列,缺失AHR/ARNT元件(-1 090^-1 085)和双缺失AHR/ARNT元件(-1 090^-1 085,-215^-210)的GCLC上游调控序列报道载体在RTE显著提高萤光素酶表达(均P<0.05),而缺失AHR/ARNT元件(-215^-210)则未见显著影响(P>0.05);独立AHR/ARNT元件(-1 090^-1 085)具有转录促进作用(P<0.05)而独立AHR/ARNT元件(-215^-210)无明显影响(P>0.05).转染CMV2-AHR能够抑制野生型和缺失型报道载体的萤光素酶表达(P<0.05).EMSA证实GCLC基因上游调控区域的2个AHR/ARNT元件均有核蛋白结合,并且超级迁移率变动实验显示结合的蛋白主要含有转录因子AHR以及ARNT.因此,2个AHR/ARNT元件均可以与异源二聚体AHR/ARNT结合,AHR/ARNT元件(-1 090^-1 085)是GCLC基因中重要的抑制元件. 展开更多
关键词 谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC) 转录调控 AHR/ARNT元件 大鼠支气管上皮细胞(rte)
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Dectin-1在热处理光滑假丝酵母菌刺激大鼠气道上皮细胞中的作用及对IL-10和TNF-α表达的影响 被引量:1
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作者 赵莹 骆雪萍 +1 位作者 张雪 宋文洺 《中国感染控制杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期10-15,共6页
目的探讨树突状细胞相关C型凝集素-1(Dectin-1)在热处理光滑假丝酵母菌刺激大鼠气道上皮细胞(RTECs)中的作用及对IL-10和TNF-α表达的影响。方法将体外培养的RTECs随机分为3组:对照组(RTECs+无菌生理盐水)、真菌刺激组(RTECs+热处理光... 目的探讨树突状细胞相关C型凝集素-1(Dectin-1)在热处理光滑假丝酵母菌刺激大鼠气道上皮细胞(RTECs)中的作用及对IL-10和TNF-α表达的影响。方法将体外培养的RTECs随机分为3组:对照组(RTECs+无菌生理盐水)、真菌刺激组(RTECs+热处理光滑假丝酵母菌)、抑制剂干预组(RTECs+昆布多糖+热处理光滑假丝酵母菌),分别孵育0、2、4、6 h后终止,MTT法检测细胞存活率,Western Blot法检测Dectin-1表达,ELISA法检测IL-10和TNF-α的表达。结果热处理光滑假丝酵母菌破坏细胞结构,降低细胞存活率。在培养开始时(0h),3组RTECs细胞存活率以及Dectin-1、IL-10、TNF-α表达水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。培养2、4、6 h后,真菌刺激组、抑制剂干预组Dectin-1、IL-10、TNF-α表达水平均高于对照组,抑制剂干预组Dectin-1、IL-10、TNF-α表达水平均低于真菌刺激组(均P<0.05)。除抑制剂干预组0h与2 h IL-10表达量比较,差异无统计学意义之外,真菌刺激组和抑制剂干预组组内不同时间段Dectin-1、IL-10、TNF-α表达水平比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 Dectin-1是RTECs识别热处理光滑假丝酵母菌的重要受体,并诱导其释放IL-10和TNF-α,介导炎症反应的发生。 展开更多
关键词 Dectin-1受体 热处理光滑假丝酵母菌 大鼠气道上皮细胞 昆布多糖 IL-10 TNF-Α
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城市不同源雾霾颗粒物健康风险差异评估比较 被引量:2
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作者 蒋锦晓 何建波 +5 位作者 陈彬 李宁 陈菲菲 单晓栋 唐娟 张杭君 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第1期379-385,共7页
通过研究不同来源霾颗粒物对大鼠气管上皮细胞(RTEcells)电阻抗变化和细胞自噬因子的影响,评价不同来源霾颗粒物对人体健康风险的差异性.分别将RTE暴露于从居民区(I),高架交通源(II)和化工园区(III)采集的3种雾霾颗粒物中,统一暴露浓度... 通过研究不同来源霾颗粒物对大鼠气管上皮细胞(RTEcells)电阻抗变化和细胞自噬因子的影响,评价不同来源霾颗粒物对人体健康风险的差异性.分别将RTE暴露于从居民区(I),高架交通源(II)和化工园区(III)采集的3种雾霾颗粒物中,统一暴露浓度和时间分别为100mg/L和24h.通过电子细胞基质阻抗检测(ECIS)细胞增长引起的阻抗变化和细胞电损伤恢复时间;通过蛋白免疫印迹测定p62, Atg5, Atg7, Beclin1, LC3B和m TOR蛋白表达量来分析比较不同来源雾霾颗粒物对RTE细胞自噬的影响.结果表明,与空白对照组相比,不同雾霾颗粒物处理组细胞电损伤恢复时间分别延长了34.6%,63.2%和78.0%; p62蛋白表达量差异显著性下降, Atg5, Atg7, Beclin1, LC3B蛋白表达量差异显著性上升.此外, mTOR相关蛋白表达量差异显著性下降,分别下降了4.38%, 3.34%和2.36%; p-m TOR蛋白表达量与空白组相比,实验组I下降24.2%,实验组II下降37.0%,实验组III下降60.9%.由以上结果可知,不同来源雾霾颗粒物对RTE细胞均有一定的毒性损伤作用,能够减小细胞增长速度和削弱细胞修复能力,增强细胞自噬因子蛋白的表达,且化工园区采集的雾霾颗粒物毒性强于居民区和高架交通源.不同来源雾霾颗粒物的细胞毒性存在明显差异,基于细胞电损伤恢复时间的测定以及自噬相关蛋白的检测方法能够为雾霾颗粒物健康风险评价提供一种快速的生物学手段. 展开更多
关键词 雾霾颗粒物 大鼠气管上皮细胞 电子细胞基质阻抗检测 自噬 健康风险评价
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