脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠模型的建立

目的建立脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠模型。方法通过灌服大黄水煎液、肌肉注射氢化可的松并结合TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)混合乙醇灌肠建立脾肾阳虚型UC动物模型。将60只大鼠随机分为空白组、脾肾阳虚型UC模型7、14 d及21 d组,采用酶联免疫法检测各组大鼠血清中FT3、FT4、T的含量。结果与空白组比较,脾肾阳虚型UC模型7、14 d及21 d组大鼠血清中FT3、FT4、T的含量均有降低(P<0.05);尤以模型21 d组差异显著。结论 FT3、FT4、T是脾肾阳虚的敏感指标,检测血清FT3、FT4、T可以更好地佐证脾肾阳虚;证明了脾肾阳虚型UC动物模型复建成功。

实验性脾气虚大鼠胃泌素的基因表达及四君子汤的干预作用

目的:观察脾气虚证大鼠胃窦黏膜胃泌素(gastrin,GAS)基因表达的改变及不同用药时间段四君子汤对其调整作用,探讨脾气虚证的本质及四君子汤的作用机制。方法:以三因素复合的方法复制脾气虚证大鼠模型,造模大鼠随机分成模型组、四君子汤组,在干预后不同时间段,用逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测四君子汤对脾气虚大鼠胃窦GAS mRNA表达的影响。结果:脾气虚模型组血清GAS水平、胃窦GAS mRNA表达下降,与正常组比较差异有显著性(P<0.05);四君子汤组血清GAS含量、胃窦GAS mRNA表达随用药时间的延长呈递增的趋势,用药21天时,与模型组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:GASmRNA表达失衡是脾气虚证的本质之一,而四君子汤上调GAS mRNA表达是其治疗脾气虚证的机制之一。

模拟中医病因所致脾气虚、脾阳虚大鼠模型的证候比较研究

目的:以多因素复合法分别建立脾气虚证、脾阳虚证大鼠模型,对两组模型大鼠进行比较研究以探讨脾气虚、脾阳虚的证候实质与差异。方法:动物随机分为正常组、脾气虚组和脾阳虚组,以相应造模方法进行模型复制,并以四君子汤和理中汤进行药物反证。结果:脾气虚和脾阳虚大鼠宏观证候计分高于正常组(P<0.01),且以脾阳虚组为著(P<0.01);两组血清GAS均低于正常组(P<0.01);脾气虚组的血浆MTL低于正常组(P<0.01),而脾阳虚组高于正常组(P<0.01);经健脾中药干预后,各项脾虚症状和体征逐渐缓解或消失;血清GAS、血浆MTL紊乱回复。结论:多因素复合法复制的脾气虚、脾阳虚证大鼠模型符合证候的生物学特征,稳定性良好,且经得起药物反证;脾气虚、脾阳虚大鼠的脾虚宏观证候呈递进关系;血浆MTL在脾气虚和脾阳虚中变化趋势不一致,可作为鉴别两证的微观指标。

脾虚大鼠血清及胃组织中胃肠激素GAS、CCK、SS变化及中药干预效果

目的:探讨脾虚大鼠血清及胃组织中胃泌素(gastrin,GAS)、胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)、生长抑素(somatostatin,SS)变化及中药干预效果.方法:选取SD大鼠36只,采用随机数字表法分为3组,12只大鼠灌服蒸馏水为对照组,24只大鼠制备脾虚模型(慢性束缚应激+过度疲劳+饮食失调),其中12只脾虚大鼠为观察组,12只脾虚大鼠给予四君子汤灌胃7 d为治疗组,采用酶联免疫分析法检测大鼠血清及胃组织中胃肠激素GAS、CCK、SS水平.结果:观察组大鼠血清中GAS水平、CCK水平、SS水平、胃组织中GAS水平均明显低于对照组,而胃组织中CCK水平、SS水平,均明显高于对照组.治疗组大鼠血清中GAS水平、CCK水平、SS水平、胃组织中GAS水平均明显高于观察组,而胃组织中CCK水平、SS水平均明显低于观察组.差异均有统计学意义(P<0.05).,结论:脾虚大鼠血清及胃组织中胃肠激素GAS、CCK、SS均出现了异常变化,中药干预可有效纠正胃肠激素GAS、CCK、SS异常波动.

IL-1、IL-6、TNF-α及IFN-γ在脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠血清及组织中的表达

目的通过对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠血清及结肠组织中IL-1、IL-6、TNF-α及IFN-γ表达水平的检测,探讨它们在UC发生发展过程中的作用。方法采用灌服大黄水煎液+肌肉注射氢化可的松并结合TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)+乙醇灌肠建立脾肾阳虚型UC动物模型。将60只大鼠随机分为空白组、脾肾阳虚型UC模型7、14d及21d组,采用酶联免疫法检测各组大鼠血清及结肠组织中IL-1、IL-6、TNF-α及IFN-γ的含量。结果与空白组比较,脾肾阳虚型UC模型组大鼠血清及结肠组织中IL-1、IL-6、TNF-α及IFN-γ含量明显升高(P<0.05);尤以模型21d组最为明显。结论促炎性细胞因子IL-1、IL-6、TNF-α及IFN-γ在脾肾阳虚型UC发病过程中起重要作用。

补中益气汤对脾气虚证大鼠血清胃泌素影响的实验研究

目的:探讨补中益气汤不同浓度、不同时间段对脾气虚证大鼠血清胃泌素的影响。方法:以大黄法、游泳力竭法、饥饿法三因素复合的方法复制脾气虚证大鼠模型,造模大鼠随机分成模型组,补中益气汤低、中、高剂量组,以及四君子汤组,在干预后不同时间(7、14、21d)观察各组血清胃泌素等指标。结果:与模型组比较,补中益气汤中、高剂量组血清胃泌素含量升高(P<0.05,P<0.01),以中剂量组疗效显著;低剂量组变化不明显;四君子汤组血清胃泌素含量亦升高(P<0.05),但效果不如补中益气汤中剂量组(P<0.05)。结论:补中益气汤提高脾气虚证大鼠血清胃泌素含量可能是其治疗脾气虚证的机理之一。

溢尿停对实验性脾虚SD大鼠胃肠功能的影响

目的 :探讨溢尿停对实验性脾虚SD大鼠胃肠功能的影响。方法 :本实验以脾虚SD大鼠模型为载体 ,选择反应脾气虚主要病理改变的几个生化指标 ,从一个角度初步探讨该制剂对应力性溢尿症病机的影响。结果 :溢尿停能改善大黄泻下法脾虚SD大鼠模型症状及病情 ,提高脾虚SD大鼠的血清木糖含量、血清淀粉酶含量、尿木糖排泄率。结论

脾肾阳虚大鼠脾中Ⅰ相和Ⅱ相药物代谢酶活性变化的研究

【目的】观察脾肾阳虚状态下大鼠脾脏中主要Ⅰ相和Ⅱ相药物代谢酶活性的改变。【方法】采用连续17 d灌胃大黄水煎液同时注射氢化可的松的方法复制大鼠脾肾阳虚模型,观察脾脏中6种Ⅰ相代谢酶(CYP2C19、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C8、CYP3A4)和4种Ⅱ相代谢酶[苯酚磺基转移酶(PST)、尿苷二磷酸葡醛酸转移酶1(UGT1)、谷胱甘肽转移酶(GST)、雌激素硫酸转移酶(SULT1E1)]的活性变化。【结果】模型组PST、UGT1、GST、SULTl E1活性显著低于正常组(P<0.05或P<0.01);CYP1A2活性显著高于正常组(P<0.01),而CYP2C19、CYP2D6、CYP2C8、CYP3A4、CYP2C9等酶的活性无显著变化(P>0.05)。【结论】脾肾阳虚状态下脾脏药物代谢酶特别是II相代谢酶的活性会发生显著改变。

实验性脾气虚大鼠血清胃泌素、胃窦G细胞的变化及黄芪建中汤的干预

[目的]探讨脾气虚证大鼠血清胃泌素(gastrin,GAS)、胃窦黏膜胃泌素分泌细胞(G)的变化及黄芪建中汤的干预作用。[方法]以三因素复合的方法复制脾气虚证大鼠模型,随后分别以黄芪建中汤低、中、高剂量对脾气虚大鼠进行复健,在干预后不同时间段,分别检测血清木糖浓度、血清肌酸磷酸激酶活性、血清GAS水平及胃窦G细胞等指标。[结果]随用药时间的延长,各用药组上述指标逐步恢复;中、高剂量组用药21天时,与同期模型组比较,差异有显著性(P<0.05或P<0.01);其中,高剂量组对G细胞数的改善作用,优于中剂量组(P<0.05)。[结论]脾气虚证胃窦G细胞数量减少,释放GAS减少,血清GAS水平降低;黄芪建中汤对脾气虚大鼠有可靠的治疗作用,中、高剂量均为有效用药浓度,尤以高剂量更为理想。

实验性脾虚证大鼠结肠和盲肠组织化学、免疫组织化学研究

成年雄性Wistar大鼠60只,分正常对照组;脾虚组;自然恢复组和四君子汤治疗组。四组动物取结肠和盲肠分别进行H-E;酶组织化学和5-羟色胺细胞PAP免疫组织化学观察。结果表明,脾虚组结肠和盲肠粘膜上皮的杯状细胞较对照组明显增多,淋巴细胞及淋巴集结也增多。固有层毛细血管充血并有炎症细胞的增多。上皮细胞和腺细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)减弱,乳酸脱氢酶(LDH)增强;结肠上皮细胞和腺细胞碱性磷酸酶(AIP)和三磷酸腺苷酶(ATPase)增强,而盲肠上皮细胞和腺细胞AIP和ATPase减弱。结肠和盲肠5-HT细胞免疫组化反应减弱。这些结果表明肠上皮细胞酶的变化和5-HT细胞分泌活性的变化与脾虚证的发生密切相关,可能是导致脾虚证原因之一。经四君子汤治疗后以上各项指标均比自然恢复组更接近于正常对照组,说明此药对消化道粘膜上皮酶活性和5-HT细胞分泌活性恢复正常有明显效果,从而起治疗作用。

应用代谢组学探讨脾气虚大鼠血清小分子代谢谱群特征变化

目的:运用代谢组学技术探究脾气虚模型大鼠血清小分子代谢谱群特征变化,从而探索脾气虚证的生物学本质。方法:14只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组和脾气虚证模型组各7只,模拟中医病因建立脾气虚大鼠模型。运用LC-Q/TOF-MS质谱技术对2组大鼠血清样本进行检测,通过主成分分析(PCA)、最小二乘判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘分析(OPLS-DA)比较2组大鼠血清代谢图谱,寻找差异性表达代谢物。结果:脾气虚大鼠与正常大鼠的血清代谢图谱间存在显著差异。与正常大鼠比较,脾气虚大鼠血清中葡萄糖、琥珀酸等小分子代谢物含量显著上升,雄酮、亚油酸等含量显著下降,通过OPLS-DA分析得到一些脾气虚证的潜在生物标志物。结论:脾气虚大鼠呈现出不同于健康大鼠的血清代谢谱群特征,该证型存在多种代谢通路异常,可能伴随机体能量供应障碍,也可能诱发糖尿病及心血管疾病。

四君子汤对脾气虚证大鼠血清胃泌素影响的实验研究

目的:探讨四君子汤对脾气虚证大鼠血清胃泌素(GAS)的影响。方法:以大黄法、游泳力竭法、饥饿法三因素复合方法复制脾气虚证大鼠模型,造模大鼠随机分成模型组和四君子汤组,在用药后不同时间(7d1、4d、21d)观察四君子汤对血清GAS含量的影响。结果:四君子汤组的血清GAS含量随着用药时间的延长呈递增的趋势,用药21d时与模型组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:四君子汤能改善脾气虚证大鼠的低GAS水平,这可能是其治疗脾气虚证的机理之一。

实验性脾虚证大鼠10种血清酶分析

目的:探讨脾虚导致水肿的病理生理机制。方法:采用劳倦加饥饱失常法塑造大鼠脾虚模型,比较其血清AST、ALT、ALP、CHE、5-NT、LDH、LDH1、α-HBD、CK、CK-MB10种酶活性与正常对照组之间的差异。结果:脾虚组LDH、LDH1、ALP、5-NT较正常对照组极显著降低(P<0.01),AST、CK-MB、α-HBD、CK显著降低(P<0.05),CHE明显增高(P<0.05),ALT减低但无显著性差异(P>0.05)。结论:脾虚引起大鼠血清中多种酶学变化,反映了肝脏和心脏的病理性损害,两脏器的功能受损可能是导致脾虚水肿的原因。

黄芪建中汤对脾虚大鼠胃粘膜组织代谢的影响

目的 :探讨黄芪建中汤调节脾胃的机能。方法 :用 2 %水杨酸钠灌胃诱导大鼠胃粘膜损伤同时 ,再用饥饱失常、劳倦过度的方法复制出脾气虚大鼠模型 ,观察黄芪建中汤对大鼠胃粘膜组织细胞中Mg -ATPase、SDH和CA等酶活性的影响。结果 :脾虚组大鼠的上述酶组织化学指标明显低于正常组 ;黄芪建中汤可使之提高至正常水平。结论 :组织细胞代谢低下是脾虚证的重要表现之一 ,黄芪建中汤对此有调整作用 。

衢枳壳不同加工饮片对脾虚型大鼠胃肠功能的影响

目的比较衢枳壳不同加工饮片对脾虚型大鼠胃肠功能的影响。方法SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组(四君子颗粒组),衢枳壳“一体化”饮片低、中、高剂量组,衢枳壳传统饮片低、中、高剂量组,每组各10只(雌雄各半)。脾虚大鼠模型采用苦寒泻下加饥饱失常法复制,连续灌胃给药7 d,给药期间观察大鼠精神状态并记录;末次给药后禁食18 h,用灌胃半固体糊的方法检测各组大鼠的胃排空率以及小肠推进率;用ELISA试剂盒检测大鼠血清中胃泌素(GAS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的含量;血浆中乙酰胆碱(ACh)、血管活性肠肽(VIP)、P物质(SP)、胃动素(MTL)的含量。结果与空白组比较,模型组除SP指标变化无显著性,其余各个指标均具有显著性,其中MTL、GAS、Ach、TNF-α和IL-6含量显著降低(P<0.01),VIP含量显著升高(P<0.01)。各组给药7 d后,与模型组比较,阳性给药组除SP指标无显著性差异,其余指标变化均具有显著性;传统饮片与“一体化”饮片中、高剂量组除SP指标无显著性差异,其余指标变化均具有显著性差异;传统饮片与“一体化”饮片低剂量组,除MTL、GAS、SP无显著性差异,其余指标均具有显著性差异。结论衢枳壳传统饮片与“一体化”饮片对脾虚型大鼠的胃肠功能障碍具有治疗作用,且治疗效果等效。

针刺健脾不同穴组对脾气虚大鼠血清胃泌素和D-木糖含量的影响

目的:针刺"足三里、气海";"脾俞、胃俞";"足三里、气海+脾俞、胃俞"3组不同健脾穴组对脾气虚大鼠血清胃泌素(GAS)、D-木糖浓度的影响。方法:以大黄法、饮食失节法二因素复制脾气虚证大鼠模型50只,后随机分成模型组和3个实验组,另取大鼠10只为正常对照组,在电针治疗8 d后,进行GAS、D-木糖等指标的比较。结果:3个治疗组大鼠血清GAS含量和D-木糖浓度与造模组相比,均显著提高,有统计学意义(P<0.01)。联合组效用较单用"足三里、气海"穴组相比无明显优势(P>0.05),但较单用背俞穴组效用明显(P<0.05)。单用"足三里、气海"穴组与背俞穴组相比无统计学意义(P>0.05)。空白组与造模组相比,有统计学意义(P<0.05),证明造模成功。结论:电针刺激3组健脾不同穴组均能升高大鼠血清GAS、D-木糖浓度,有效改善脾气虚证。但采用"足三里、气海"组和两组穴联合应用,要优于单用"脾俞、胃俞"组。

加味补中益气汤对肝郁脾虚型大鼠干预作用的机制

目的:研究加味补中益气汤对肝郁脾虚型大鼠干预作用的机制。方法:取60只Wistar大鼠随机平均分为空白组,模型组,加味补中益气汤高剂量组、中剂量组、低剂量组。除空白组外,各组接受15 d夹尾刺激(每次30 min,4次·d^(-1))和每天大黄灌胃(0.004 5 m L·g^(-1),1次·d^(-1),15 d)。建模后,加味补中益气汤高剂量组、中剂量组、低剂量组分别给予3.8 g·(kg·d)^(-1)、7.6 g·(kg·d)^(-1)和11.4 g·(kg·d)^(-1),空白组、模型组给予等体积的生理盐水溶液,连续10 d,末次给药后1 h,测定血清体积及血清生化指标,分析主要脏器系数。结果:加味补中益气汤高剂量组血清体积比为0.6012,显著高于模型组的血清体积比(0.411 1)(P<0.01);加味补中益气汤高剂量组肝脏系数为6.239 8、脾脏系数为0.4236,显著高于模型组的肝脏系数(4.502 6)和脾脏系数(0.317 1)(P<0.05);加味补中益气汤高剂量组血浆促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)为38.46 ng·L^(-1),显著低于模型组的ACTH(49.27 ng·L^(-1))(P<0.05)。加味补中益气汤中剂量组血清体积比为0.540 3,脾脏系数为0.451 7,均显著高于模型组以上指标(P<0.05);血浆ACTH为45.72 nmol·L^(-1),显著低于模型组ACTH(P<0.01)。加味补中益气汤低剂量组脾脏系数为0.412 8,显著高于模型组脾脏系数(P<0.05)。结论:加味补中益气汤可显著升高大鼠血清体积比、肝脏系数、脾脏系数,降低大鼠ACTH水平,可改善肝郁脾虚型大鼠的脾虚、焦虑、抑郁症状。

银杏叶复方和四君子汤对脾虚证小鼠血清消化酶活性的影响

为了研究3种不同银杏叶复方制剂对脾虚证小鼠血清消化酶活性的影响,试验选择体重20~22 g雌性清洁级KM小鼠180只,随机分为10组,每组6个重复,每个重复3只。1~5组分别为空白组、四君子汤组、银杏叶复方Ⅰ组、银杏叶复方Ⅱ组和银杏叶复方Ⅲ组,用于比较四君子汤和3种银杏叶复方制剂对正常小鼠血清消化酶活性的影响;6~10组分别为脾虚证模型组、利血平＋四君子汤组、利血平＋银杏叶复方Ⅰ组、利血平＋银杏叶复方Ⅱ组和利血平＋银杏叶复方Ⅲ组,用于研究四君子汤和3种银杏叶复方制剂对利血平所致脾虚证小鼠血清消化酶活性的影响。适应性饲养3 d,试验期15 d,测定脾虚证小鼠血清中淀粉酶（AMS）、脂肪酶（LPS）和胰蛋白酶（TPS）的活性。结果表明：淀粉酶活性6组显著低于1组（P〈0.05）,其他组与1组之间差异不显著（P〉0.05）,6~10组之间差异不显著（P〉0.05）,其中8,10组明显高于其他各组;脂肪酶活性7~10组均显著高于6组（P〈0.05）,8,10组显著高于1组（P〈0.05）;胰蛋白酶活性6~9组显著低于1组（P〈0.05）,6~9组之间差异不显著（P〉0.05）,10组低于1组,但差异不显著（P〉0.05）。说明3种银杏叶复方和四君子汤都可以在一定程度上提高脾虚证小鼠血清消化酶活性,其中银杏叶复方Ⅲ效果较优,甚至优于四君子汤,可以作为治疗脾虚证后续试验的研究对象。

脾虚四号方含药血清对功能性腹泻脾虚证大鼠离体结肠平滑肌细胞的影响

目的从细胞水平角度,观察脾虚四号方含药血清干预离体培养功能性腹泻脾虚证模型大鼠的结肠平滑肌细胞的变化。方法对功能性腹泻脾虚证模型大鼠进行提取离体结肠平滑肌细胞并原代培养,将其分为6组:空白对照组、模型组、脾虚四号方低、中、高剂量组、蒙脱石散组,各组分别5%含药血清干预48 h,用细胞增殖和毒性检测(CCK-8)法测定细胞增殖活性,实时荧光定量PCR检测各组相关脑肠肽的基因表达。结果 CCK-8法检测结果显示:与空白对照组相比,模型组结肠平滑肌细胞OD值极显著降低(P<0.01);与模型组相比,各含药血清干预组结肠平滑肌细胞OD值极显著升高(P<0.01)。实时荧光定量PCR检测结果显示:与空白对照组相比,模型组胆囊收缩素(CCK)、血管活性肠肽(VIP)、生长抑素(SS)mRNA表达均显著降低(P<0.05)。与模型组相比,各含药血清干预组均有表达升高趋势,脾虚四号方低剂量组较模型组CCK mRNA表达显著升高(P<0.05),脾虚四号方低、中、高剂量组较模型组VIP mRNA表达极显著升高(P<0.01)。结论脾虚四号方含药血清能够有效促进模型结肠平滑肌细胞的增殖活性,脑肠肽CCK、VIP、SS mRNA表达变化可能有利于进一步阐释功能性腹泻脾虚证在脑肠肽胃肠激素方面发病机制。

脾虚证模型大鼠腓肠肌损伤及其机制的探查

目的观察脾虚证模型大鼠腓肠肌损伤情况并对其机制进行研究。方法将雄性Wistar大鼠(SPF/VAF级)按体质量随机分为对照组和模型组,模型组采用饮食失节联合游泳劳倦法复制脾虚证模型,对照组予以正常饲养。定期观察并记录2组大鼠的外观表征、体质量、饮食量和粪便含水率。实验第2、3、4周末,测定各组大鼠的游泳力竭时间、抓握力、尿D-木糖排泄率、脾脏指数、胸腺指数及腓肠肌湿质量,HE染色观察腓肠肌病理结构,酶联免疫吸附测定法检测血清中胃动素、胃泌素、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和腓肠肌组织中柠檬酸合酶、Ca^(2+)-ATP酶、IL-1β、IL-6、TNF-α含量。实验第4周末,用免疫组织化学法检测腓肠肌IL-1β、IL-6、TNF-α阳性表达水平,免疫荧光法检测腓肠肌切割型天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase 3)阳性细胞。结果与对照组比较,第2~4周模型组大鼠体质量、饮食量、游泳力竭时间、抓握力、腓肠肌湿质量和尿D-木糖排泄率下降(P<0.05,P<0.01),粪便含水率增加(P<0.01);第3~4周模型组大鼠血清胃泌素下降(P<0.05,P<0.01);第2周模型组大鼠腓肠肌湿质量/体质量和血清IL-6增加(P<0.05,P<0.01);第4周模型组大鼠腓肠肌湿质量/体质量、脾脏指数、胸腺指数、腓肠肌柠檬酸合酶和Ca^(2+)-ATP酶水平、血清胃泌素、IL-1β和TNF-α含量下降(P<0.01),腓肠肌cleaved-caspase 3、IL-1β、IL-6、TNF-α含量增加(P<0.01)。结论饮食失节联合游泳劳倦法复制的脾虚证模型大鼠具有中医脾虚证的外观表征和实验室相关指标的变化特点,腓肠肌出现肌力减退和肌萎缩,并随造模时间延长而加重,伴有全身免疫功能减退与血清、腓肠肌炎性因子含量增加,提示脾虚证骨骼肌受损涉及线粒体损伤和细胞凋亡,并与炎性机制有关。