Analysis of Rb gene in primary acute lymphoid leukemia

The structure of the Rb gene in 32 cases of acute lymphoid leukemia (ALL) were studied by Southern blotting using 32P-labeled Rb cDNA 3. 8 kb probe- Structural abnormalities of Rb gene were found in 8 cases of ALL, an incidence of 25%. Two novel fragments (3. 1 kb, 2- 3 kb)were observed in 5 of 8 cases. We used five pairs of Rb gene primers of exons 18, 19, 21, 22, 27 and amplified Rb gene from 6 cases of ALL with abnormal Rb gene- Only one case was free from products of exons 18 and 2l. The results seemed to indicate that abnormalities of Rb gene might be closely associated with initiation and/or promotion of ALL.

急性淋巴细胞白血病Rb基因的分析

应用限制性内切酶片段长度多态性分析了３２例原发急性淋巴细胞白血病Ｒｂ基因的等位基因变化，采用３２Ｐ－标记的ＲｂｃＤＮＡ３．８ｋｂ探针，结果在８例患者中发现Ｒｂ基因结构异常（２５％）．其中４例出现新的３．１ｋｂ和２．３ｋｂ片段，选用Ｒｂ基因外显子１８，１９，２１，２２，２７五对引物，对已发现Ｒｂ基因异常的６例患者进行了分析，发现１例在外显子１８和２１无扩增产物．结果提示：Ｒｂ基因异常与急性淋巴细胞白血病的疾病加剧的关系较疾病的始发关系更为密切。

急性髓系白血病Rb基因的研究

目的：研究Ｒｂ基因异常与急性髓系白血病发病的关系．方法：采用ＤＮＡ印迹杂交和ＰＣＲ技术．结果：在５／１８例原发急性髓系白血病中发现Ｒｂ基因结构异常（２８％），其中２例缺失５．４ｋｂ和出现新片段３．１ｋｂ和２．３ｋｂ．将其中１例用Ｒｂ基因外显子１８，１９，２１，２２，２７五对引物进行分析，未发现异常．结论：Ｒｂ基因异常可能与急性髓系白血病的始发和发展有关．

分化早期小儿急性白血病细胞免疫球蛋白和T细胞受体基因结构的变化

从29例免疫分型的小儿急性白血病中选出髓过氧化物酶染色阴性和不与细胞系相关或成熟细胞系相关的单克隆抗体反应的6例白血病细胞,进一步作免疫球蛋白(包括重链和κ轻链)和T细胞受体(包括δ、γ、β)基因结构的分析。所有6例均有IgH基因的重排,提示这些白血病细胞是β细胞来源。两例CD_(10)阴性和白病细胞.κ链基因没有重排,其中一例的TCRδ、γ、β基因也都处于胚系,另一例的TCRβ处于胚系。在CD_(10)阳性白血病细胞中,其中两例κ链基因丢失,TCR基因结构都有不同程度的变化(重排或丢失)。这些结果可能提示在CD_(10)阳性白血病细胞中能产生功能性IgH的重排,并可导致IgL和TCR基因结构的变化。

急性T淋巴细胞白血病中SIL-TAL1融合基因与6q缺失的相关性研究

本研究旨在探讨SIL-TAL1融合基因在急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)患者中的表达情况,分析伴有SILTAL1阳性的T-ALL患者的临床和细胞遗传学特征。运用巢式逆转录聚合酶链反应检测68例T-ALL患者骨髓标本中的SIL-TAL1的表达,以R显带核型分析和微阵列比较基因组杂交检测核型异常。结果表明:在12例T-ALL患者中检测到SIL-TAL1融合基因的表达,儿童检出率明显高于成人(38.5%vs 4.8%,P=0.001),其中50%(6/12)SIL-TAL1阳性患者存在两种转录本;SIL-TAL1阳性组核型异常率为54.5%(6/11),其中4例伴有6号染色体长臂大片段缺失;2例经array-CGH检测到1p32存在约90 kb的缺失,形成SIL-TAL1融合基因;6号染色体长臂共同缺失区域为6q14.1-q16.3,均为杂合性缺失;SIL-TAL1阳性组中位白细胞计数和乳酸脱氢酶水平均高于阴性组(P<0.05)。结论:SIL-TAL1融合基因与6q杂合性缺失有一定相关性(P=0.005),在儿童中SIL-TAL1的检出率明显高于成人,且常伴有白细胞计数升高、乳酸脱氢酶升高等不良预后因素。

淋巴细胞恶性肿瘤p16基因纯合缺失和突变的研究

为了探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)和急性淋巴细胞白血病(ALL)中p16基因纯合缺失和突变情况,应用聚合酶链反应(PCR)技术与DNA单链构象多态性分析(PCR-SSCP)及DNA测序技术,检测了45例NHL及20例ALL p16基因改变情况。结果发现45例NHL中有4例存在p16基因纯合缺失,占8.9％,20例ALL中有5例存在p16基因纯合缺失,占25％。1例NHL在第2外显子上游第49密码子出现错义突变,由GCC突变为GAC。1例ALL在第2外显子上游65密码子出现错义突变,由GCC改变为GCA。研究结果表明,NHL和ALL中存在一定比例的p16基因纯合缺失,而p16基因突变率较低,提示p16基因纯合缺失在NHL和ALL发生发展中起一定作用。

异基因造血干细胞移植治疗携带TP53、TET2、DNMT3A基因突变的急性白血病/MDS的挑战

随着二代测序技术临床应用逐渐成熟,在急性白血病/骨髓增生异常综合征(MDS)患者中不断有新的基因突变被发现,并在临床中被证实对预后有重要影响。携带TP53、TET2、DNMT3A基因突变的此类疾病患者化疗缓解时间短,3年无白血病存活率极低。异基因造血干细胞移植是唯一可能治愈此类疾病的手段,但疗效远差于未携带上述基因突变者。去甲基化药物、新型靶向药物及免疫靶向治疗有可能为此类疾病的综合治疗带来希望。本文就此类基因对于急性白血病/MDS的预后意义、对异基因造血干细胞移植疗效的影响以及可能的治疗突破进行综述。

急性淋巴细胞白血病p16基因纯合性缺失、点突变及启动子甲基化变异

目的 探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者p16基因的失活机制。方法 从29例患者外周血提取白细胞基因组DNA,采用PCR、PCR SSCP、MSP分析方法,对p16基因第二外显子的纯合性缺失、点突变及启动子区CpG岛的甲基化变异进行分析。结果 p16基因第二外显子的缺失率为27. 6% (8 /29),未见其点突变;p16基因启动子区CpG岛的甲基化率为13. 8% (4 /29)。结论 p16基因的失活和ALL的发生发展有一定的关系。

急性淋巴细胞白血病中DNA甲基转移酶3A剪切体的表达

目的:检测急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓标本中DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)各剪切体的表达情况,并分析其临床意义。方法:应用SYBR-Green RT-PCR方法检测成人初诊ALL患者及非恶性血液病对照患者骨髓有核细胞中DNMT3A各剪切体(DNMT3A1、DNMT3A2、DNMT3A2V)的表达情况,并分析其与ALL分型、ph染色体及预后的关系。结果:对照组DNMT3A2/DNMT3A1比值及DNMT3A2V/DNMT3A1比值均在1以下,ALL患者DNMT3A2V/DNMT3A1比值多数均高于1,显著高于对照组DNMT3A2V/DNMT3A1比值(P<0.001)及ALL患者DNMT3A2/DNMT3A1比值(P<0.01)。DNMT3A2V在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)及急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)患者中的表达均显著升高(P<0.01)。在ph(+)患者中,DNMT3A1及DNMT3A2表达均显著下降(P<0.05);在ph(-)患者中,DNMT3A2及DNMT3A2V表达均显著上升(P分别<0.01和<0.001)。以ALL患者中主要剪切体DNMT3A2V表达水平的中位值为界,分为低表达组(n=7)及高表达组(n=6),高表达组1年累积总生存率高于低表达组,但由于样本量较少,未见统计学差异(P=0.085)。结论:ALL中DNMT3A主要剪切体由DNMT3A1转换为DNMT3A2V,DNMT3A2V表达显著升高,且DNMT3A2V高表达可能与良好预后相关。这种剪切体转换及表达改变可能在ALL发病、预后及治疗选择中有一定价值,值得进一步深入研究。

急性白血病p16基因的研究(英文)

为研究p16抑癌基因在急性白血病中的变化,用ABC法研究了61例急性白血病细胞表面p16抗原的表达和用多重PCR法研究了51例急性白血病p16基因的结构缺陷。结果发现白血病患者p16抗原的表达明显低于正常人(P<0.001),其中急性淋巴细胞白血病(ALL)又明显低于急性髓细胞白血病(AML)(P<0.05);但在AML和ALL完全缓解组(CR)和未缓解组(NR),p16抗原表达均无差异(P>0.05)。在30例ALL中仅发现4例p16基因第二外显子纯合子缺失,在21例AML未发现pl6基因的结构变化,说明p16基因的表达缺陷是急性白血病发生和发展中的主要变化,而结构异常并不是其演变中的必需分子事件。

ALL病人P16基因的失活与mRNA表达的关系

目的 :探讨 AL L 和各亚型中 P16基因失活和纯合缺失的发生率及 m RNA表达。方法 :对 40例AL L (B- AL L2 8例 ,T- AL L7例 ,前 B- AL L5例 )和 15例对照组骨髓标本 ,采用 PCR法检测 P16基因的纯合缺失 ,REP法检测 P16基因的高度甲基化 ,RT- Nest- PCR法检测其 m RNA的表达。结果 :AL L P16基因高度甲基化或纯合缺失发生率为 80 % ,而对照组无一例 P16基因失活 ;T- AL L中 P16基因纯合缺失高于高度甲基化 ;B- AL L中高度甲基化多于纯合缺失。 5例 P16基因高度甲基化尚有 m RNA表达 ,其余均无表达。结论 :P16基因的异常是 AL L 的主要发病机制之一。 T- AL L P16基因的纯合缺失为主要表现 ,而 B- AL L P16的高度甲基化为主要表现。同时 ,无论 P16基因纯合缺失或高度甲基化 ,均能高度抑制 m

T 细胞受体δ、γ基因在小儿急性白血病中的变化

本文在细胞形态,表面抗原分析的基础上,对20例小儿急性白血症细胞进行TCRδ和γ基因结构的分析。11例属分化早期的白血病中有9例发生TCRδ基因的重排和缺失,其中5例也有TCRγ基因的重排。在5例属非淋巴细胞系的白血病中有3例发生TCRδ基因的重排.3例粒细胞性白血病细胞的TCR基因(δ和γ)均为胚系。有一例细胞表型仅有CD_2表达的白血病细胞,其TCR 基因(δ和γ)也为胚系。结果还显示:TCRδ基因结构发生变化的白血病细胞均有CD_(10)抗原表达。研究提示:TCRδ基因的重排不显示严格的细胞特异性,但是TCR 基因的变化与淋巴细胞系白血病细胞某些表面抗原的表达存在某种联系。

急性淋巴系白血病微小残留病的动态监测

本研究旨在建立免疫球蛋白重链基因重排的实时定量PCR(RQ-PCR)检测方法,并探讨其在急性淋巴系白血病(ALL)微小残留病(MRD)动态监测中的应用价值。采用多重PCR筛选初诊ALL患者的IgH基因单克隆重排,PCR产物测序并进行序列比对,据其连接区序列设计等位基因特异性寡核苷酸(ASO)前向引物,联合下游保守JH引物和保守JH探针,用Taqman探针法RQ-PCR监测ALL患者治疗过程中各时间点的MRD水平,分析其敏感性和特异性。结果表明,在51例ALL患者中鉴定出21例单克隆IgH重排,其中有条件定量的为15例,标准曲线的斜率在-3.1～-3.9,相关系数均>0.98,敏感性在10-4-10-5,仅1例敏感性为10-3,定量范围多在10-4以下,背景的非特异性扩增均在低水平,不影响定量。7例MRD水平在10-3以下的患者一直持续缓解,8例MRD水平>10-3,复发率较高。结论:RQ-PCR方法定量IgH基因单克隆重排用于监测ALL患者的MRD水平,具有敏感性高、特异性强、定量结果可靠的优点。IgH重排水平与ALL患者预后高度相关。

急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞中EZH2、PTEN mRNA表达及其相关性

目的观察急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞中果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)、张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)mRNA表达变化,并分析二者的相关性。方法选择AML患者60例纳入AML组,因贫血、不明原因出血等行骨髓穿刺检查者20例为正常对照组。获取两组骨髓单个核细胞,采用实时荧光定量PCR法检测骨髓单个核细胞中的EZH2、PTEN mRNA,分析AML患者骨髓单个核细胞中EZH2、PTEN mRNA表达的相关性。结果 AML组骨髓单个核细胞中EZH2 mRNA相对表达量高于正常对照组,PTEN mRNA相对表达量低于正常对照组(P均<0.01)。AML患者骨髓单个核细胞中EZH2 mRNA与PTEN mRNA表达呈负相关(r=-0.694,P<0.05)。结论 AML患者骨髓单个核细胞中EZH2 mRNA高表达、PTEN mRNA低表达,且二者表达呈负相关;EZH2与PTEN可能参与了AML的发病,且二者之间可能存在一定的相互作用。

成人急性白血病患者骨髓中p16基因的表达

目的:研究成人急性白血病患者p16基因纯合缺失和甲基化变化与其表达之间的关系,探讨其在成人急性白血病发生发展中的生物学意义。方法:分别用多重聚合酶联反应(PCR)技术及甲基化敏感限制性内切酶-PCR技术检测了71例成人急性白血病患者DNA中p16基因纯合缺失及甲基化情况;应用原位杂交及免疫化学技术检测p16mRNA及p16蛋白表达。结果:71例成人急性白血病患者中,2例检测出p16基因纯合缺失。在无p16基因纯合缺失的病例中,5例急性淋巴细胞白血病(5/26)和9例急性髓性白血病(9/43)患者测出p16基因甲基化。p16 mRNA及P16蛋白的阳性率分别为70.4％(50/71例)、61.9％(44/71例)。结论:在成人急性白血病的发生发展中,p16基因甲基化比p16基因纯合缺失更具有意义;p16基因表达异常与成人急性白血病的发生发展密切相关。

小儿急性淋巴细胞白血病p16基因缺失与临床特征相关性的研究

p16基因异常与人类多种肿瘤的发生与发展有关。作者用PCR方法检测了42例小儿急性淋巴细胞白血病(ALL)p16基因3个外显子缺失状况,初步探讨了pl6基因缺失与小儿ALL的发病、临床表现及预后的相关性。结果表明,p16基因缺失在小儿ALL的发生率为40％,其中1例为exon1单一缺失。T-ALL中p16基因缺失为12/13(92％),远高于B-ALL,后者为5/22(23％),临床高危型ALL pl6基因缺失为17/19(89％),20例标危型ALL均未检测到p16基因缺失。实验证明,pl6基因缺失在小儿ALL(尤其是T-ALL)的发病过程中起重要作用。与临床的相关性研究表明,pl6基因缺失提示预后不良。

DLC-1基因启动子甲基化对于B-ALL的预后价值

目的观察儿童急性淋巴细胞白血病中肝癌缺失-1(DLC-1)抑癌基因启动子甲基化状态,评估该基因甲基化对于急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的预后价值。方法对40例B-ALL患儿DLC-1启动子甲基化状态与白血病敏感预后指标白血病微小残留病灶(MRD),以及其他对B-ALL预后可能有影响的指标作一比较,评价DLC-1对于B-ALL的预后判断价值,以及是否可以作为B-ALL的独立预后危险因素。结果 DLC-1甲基化阳性的B-ALL患儿的复发率和5年无事件生存率均与DLC-1甲基化阴性患儿差异有统计学意义(P<0.05)。DLC-1启动子甲基化与MRD的结果分布并不一致(P>0.05)。但两者同为阳性结果的5例患儿在5年内全都复发,复发率为100%;而两者同为阴性结果的11例患儿,仅1例在5年内复发,复发率为9%。多因素分析显示仅MRD可作为独立的预后危险因素(P=0.017),DLC-1基因甲基化阳性患儿复发风险是甲基化阴性患儿的8.5倍。结论 DLC-1甲基化和MRD都是B-ALL有意义的预后指标,两者结合可为临床提供覆盖面更广的预后信息。DLC-1甲基化也显示了该指标有成为独立预后危险因素的趋势。

急性髓系白血病患者PTEN、miR-195、BCL-2的表达及临床意义

目的探讨人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白的基因(PTEN)、microRNA-195(miR-195)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)等基因的表达在急性髓系白血病(AML)患者中的临床意义。方法选取咸阳市中心医院2017年1月至2018年11月间收治的60例AML患者作为研究对象,根据病情情况分为初发组(40例)、复发组(8例)、缓解组(12例),并选择60例体检健康成年人作对照组,采用RT-PCR检测两组受检者骨髓中PTEN、miR-195、BCL-2的mRNA及蛋白表达水平,并分析三者的表达与AML的关系。结果RT-PCR结果显示,初发组患者骨髓单个核细胞中PTEN mRNA、miR-195 mRNA表达量分别为4.25±1.11、1.07±0.23,复发组患者分别为2.91±0.77、0.96±0.21,复发组的PTEN mRNA、miR-195 mRNA表达量低于初发组,且均低于缓解组患者的10.53±2.63、3.85±1.14及对照组的10.76±2.62、3.93±0.88,差异均具有统计学意义(P<0.05);初发组患者的骨髓单个核细胞中的BCL-2 mRNA表达量为9.08±2.08,复发组患者为9.40±2.56,复发组的BCL-2 mRNA表达量高于初发组,且均高于缓解组患者的3.68±1.03及对照组的3.24±0.76,差异均具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,PTEN、miR-195的表达与AML呈负相关(r=-0.694、-0.735,P<0.01),而BCL-2 mRNA的表达与AML呈正相关(r=0.747,P<0.01)。结论PTEN、miR-195在AML中表达量低,而BCL-2在AML中表达量高,三者的表达均可作为AML的发生、发展的预测指标,且PTEN、miR-195的表达与AML呈负相关,而BCL-2的表达与AML呈正相关,表明靶向调控PTEN、miR-195,从而抑制BCL-2表达,可作为新的AML基因治疗靶点。

抑癌基因p16、Rb在急性淋巴细胞白血病患者中的表达及其临床意义

目的观察抑癌基因p16、Rb在急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中的蛋白表达水平,探索其在ALL发病中的临床意义。方法应用Western Blot及SP免疫组织化学染色技术检测抑癌基因p16、Rb在ALL患者白血病细胞中的蛋白表达水平。结果32.14%ALL患者p16蛋白表达缺失,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学染色白血病细胞阳性率降低为11.3%,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);28.57%ALL患者pRb蛋白表达缺失,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学染色白血病细胞阳性率降低为41.6%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);ALL患者p16与pRb蛋白表达水平经等级相关分析呈负相关(r_s=-0.9247,P<0.001)。结论p16、Rb基因的异常表达在ALL的发生及演变过程中有重要意义,两者之间可能存在着负反馈调节机制。

p16基因缺失在成人Ph染色体阳性急性淋巴细胞白血病中的临床意义

目的探讨p16基因缺失在成人Ph染色体阳性急性淋巴细胞白血病（Ph＋ALL）中的临床意义。方法回顾性分析80例Ph＋ALL伴p16基因缺失患者的临床特征、免疫表型、细胞遗传学、分子生物学改变及其预后。结果31．3％Ph＋ALL患者合并p16基因缺失；p16基因缺失组与非缺失组相比，初诊时高白细胞计数（WBC30×10^9／L）更常见，高表达CD20，更易出现附加染色体异常，其中以累及7、8、19号染色体以及der（22）较为常见；两组诱导缓解率比较差异无统计学意义（P=0．033），p16基因缺失组患者治疗3个疗程后获BCR—ABL融合基因主要分子学反应（MMR）率和完全分子学反应（CMR）率均明显低于非缺失组（P值分别为0．034和0．036），且复发率明显高于非缺失组（P=0．033）；p16基因缺失组使用伊马替尼联合化疗者和使用达沙替尼联合化疗者的MMR、CMR率及复发率差异均无统计学意义（P值均〉0．05）；p16基因缺失组患者3年总体生存（OS）率及无病生存（DFS）率分别为37．1％和12．4％，显著低于非缺失组的54．1％和45．9％（P值分别为0．037和0．026）；25例p16基因缺失患者中14例行异基因造血干细胞移植（allo-HSCT），其中位OS时间为21个月，明显长于非移植组患者的12个月（P=0．030）。结论成人Ph’ALL伴p16基因缺失患者预后相对较差，二代酪氨酸激酶抑制剂不能明显改善其疗效，但allo-HSCT能够改善部分患者的生存，明确p16基因缺失状态对于评估预后和指导临床治疗有重要意义。