蓖麻矮化相关RcDof蛋白的原核表达及纯化

目的原核表达并纯化蓖麻矮化相关RcDof蛋白。方法利用SignalP 4.0 server和Iprscan软件分别预测RcDof基因的信号肽和结构域。从pMD-18T-RcDof质粒中PCR扩增RcDof(44-101)基因,克隆入原核表达载体pETMBP-XE,构建原核表达质粒pETMBP-XE-RcDof(44-101),IPTG诱导表达重组蛋白,利用亲和层析、阳离子交换层析以及分子筛层析对目的蛋白进行纯化。结果RcDof基因无信号肽剪切序列,在44~101个碱基之间存在1个锌指保守结构域。重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约43000,以可溶形式存在于上清中。纯化的重组蛋白纯度较高,浓度为10 mg/mL。结论获得了高纯度可溶RcDof蛋白,为解析其晶体结构及探索其在蓖麻中作用的分子机制提供了实验依据。