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肺炎克雷伯菌调控蛋白RcsAB的构建表达及活性鉴定
被引量:
1
1
作者
李璇
彭丹
+5 位作者
刘品
苏克文
何蔷
张仲双
邱景富
李迎丽
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期630-635,共6页
为了探讨转录调控子Rcs AB对靶基因的转录调控作用,构建肺炎克雷伯菌RcsA和RcsB的重组质粒,之后诱导蛋白表达,提取纯化后测定其活性。PCR得到rcsA、rcsB片段,分别将两DNA片段克隆至表达载体pMAL-C5X、pET28a,构建重组质粒。再将重组质...
为了探讨转录调控子Rcs AB对靶基因的转录调控作用,构建肺炎克雷伯菌RcsA和RcsB的重组质粒,之后诱导蛋白表达,提取纯化后测定其活性。PCR得到rcsA、rcsB片段,分别将两DNA片段克隆至表达载体pMAL-C5X、pET28a,构建重组质粒。再将重组质粒导入E. coli BL21(DE3)菌株中,经IPTG诱导后收集菌体,超声破碎。破碎后的上清过柱、透析纯化,得到高纯度的蛋白,通过EMSA进行蛋白活性鉴定。RcsA,RcsB蛋白成功表达纯化,并能够与靶基因结合,初步证明蛋白具有生物学活性。成功制备有生物学活性的RcsA、RcsB蛋白,为进一步研究RcsAB蛋白复合物特异的生物学功能提供物质基础。
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关键词
肺炎克雷伯菌
rcsab
蛋白表达
纯化
原文传递
肺炎克雷伯菌RcsAB蛋白对荚膜多糖相关基因wcaJ、wcaG和magA的调控关系
被引量:
1
2
作者
张加雪
彭丹
+5 位作者
袁灵月
赵航宇
杜玲
张仲双
何蔷
李迎丽
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期705-712,共8页
荚膜多糖(CPS)是肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)重要的毒力因子。Rcs系统是肠杆菌科(Enterobacteriacese)中重要的双组分信号转导系统,RcsAB是其中主要的转录调控蛋白。本研究选取了肺炎克雷伯菌NTUH-K2044 cps基因簇上的3个基因(...
荚膜多糖(CPS)是肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)重要的毒力因子。Rcs系统是肠杆菌科(Enterobacteriacese)中重要的双组分信号转导系统,RcsAB是其中主要的转录调控蛋白。本研究选取了肺炎克雷伯菌NTUH-K2044 cps基因簇上的3个基因(wcaJ,wcaG和mag A),研究RcsAB对上述3个基因可能存在的调控关系。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术和LacZ报告基因融合试验来确认RcsAB是否能够调控上述3个基因的转录表达。进而用凝胶阻滞试验(EMSA)验证RcsAB能否直接结合在靶基因的启动子区,对靶基因进行直接调控。结果表明RcsAB能够正向调控上述3个基因的转录表达,EMSA的结果提示RcsAB对这3个基因可能是通过间接的方式进行调控。RcsAB蛋白可能通过间接调控荚膜多糖基因wcaJ、wcaG和mag A的转录,从而影响菌株的荚膜多糖表型。
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关键词
肺炎克雷伯菌(Klebsiella
pneumoniae)
荚膜多糖
rcsab
cps相关基因
原文传递
题名
肺炎克雷伯菌调控蛋白RcsAB的构建表达及活性鉴定
被引量:
1
1
作者
李璇
彭丹
刘品
苏克文
何蔷
张仲双
邱景富
李迎丽
机构
重庆医科大学公共卫生与管理学院医学与社会发展研究中心
重庆医科大学公共卫生与管理学院健康领域社会风险预测治理协同创新中心
出处
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期630-635,共6页
基金
国家自然科学基金(31200064
31071093
31170129)共同资助
文摘
为了探讨转录调控子Rcs AB对靶基因的转录调控作用,构建肺炎克雷伯菌RcsA和RcsB的重组质粒,之后诱导蛋白表达,提取纯化后测定其活性。PCR得到rcsA、rcsB片段,分别将两DNA片段克隆至表达载体pMAL-C5X、pET28a,构建重组质粒。再将重组质粒导入E. coli BL21(DE3)菌株中,经IPTG诱导后收集菌体,超声破碎。破碎后的上清过柱、透析纯化,得到高纯度的蛋白,通过EMSA进行蛋白活性鉴定。RcsA,RcsB蛋白成功表达纯化,并能够与靶基因结合,初步证明蛋白具有生物学活性。成功制备有生物学活性的RcsA、RcsB蛋白,为进一步研究RcsAB蛋白复合物特异的生物学功能提供物质基础。
关键词
肺炎克雷伯菌
rcsab
蛋白表达
纯化
Keywords
Klebsiella pneumoniae
rcsab
Prokaryotic expression
Protein purification
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
肺炎克雷伯菌RcsAB蛋白对荚膜多糖相关基因wcaJ、wcaG和magA的调控关系
被引量:
1
2
作者
张加雪
彭丹
袁灵月
赵航宇
杜玲
张仲双
何蔷
李迎丽
机构
重庆医科大学公共卫生与管理学院
出处
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期705-712,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31200064,31071093,31170129)资助。
文摘
荚膜多糖(CPS)是肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)重要的毒力因子。Rcs系统是肠杆菌科(Enterobacteriacese)中重要的双组分信号转导系统,RcsAB是其中主要的转录调控蛋白。本研究选取了肺炎克雷伯菌NTUH-K2044 cps基因簇上的3个基因(wcaJ,wcaG和mag A),研究RcsAB对上述3个基因可能存在的调控关系。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术和LacZ报告基因融合试验来确认RcsAB是否能够调控上述3个基因的转录表达。进而用凝胶阻滞试验(EMSA)验证RcsAB能否直接结合在靶基因的启动子区,对靶基因进行直接调控。结果表明RcsAB能够正向调控上述3个基因的转录表达,EMSA的结果提示RcsAB对这3个基因可能是通过间接的方式进行调控。RcsAB蛋白可能通过间接调控荚膜多糖基因wcaJ、wcaG和mag A的转录,从而影响菌株的荚膜多糖表型。
关键词
肺炎克雷伯菌(Klebsiella
pneumoniae)
荚膜多糖
rcsab
cps相关基因
Keywords
Klebsiella pneumoniae
Capsular polysaccharide
rcsab
cps related genes
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
肺炎克雷伯菌调控蛋白RcsAB的构建表达及活性鉴定
李璇
彭丹
刘品
苏克文
何蔷
张仲双
邱景富
李迎丽
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
原文传递
2
肺炎克雷伯菌RcsAB蛋白对荚膜多糖相关基因wcaJ、wcaG和magA的调控关系
张加雪
彭丹
袁灵月
赵航宇
杜玲
张仲双
何蔷
李迎丽
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
原文传递
已选择
0
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引用分析
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引证文献
统计分析
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