中国林蛙核糖核酸酶Rdrlec的原核表达及抗菌活性检测

Rdrlec是从中国林蛙基因组中克隆得到的核糖核酸酶新基因(GenBank登录号EU384704),其生物学活性仍未知。为了探索其编码的蛋白产物的生物学活性,将此基因按照大肠杆菌偏好的密码子进行优化后,人工合成基因,通过EcoR I和HindIII限制酶位点定向克隆到pET-28a(+)中构建重组表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在34℃以0.5 mmol/L IPTG诱导表达出包涵体形式的融合蛋白,通过包涵体复性、肠激酶切割、Ni-NTA亲和层析纯化等步骤获得了具有酶活性的野生型Rdrlec重组蛋白,并检测到其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有显著的抗菌活性。

中国林蛙核糖核酸酶Rdrlec新基因的原核可溶表达

来源于蛙属的核糖核酸酶由于具有显著的抗肿瘤活性而备受关注,Rdrlec是从中国林蛙基因组中克隆得到的核糖核酸酶新基因。获得大量高纯度野生型重组蛋白是研究其功能的基础。按照大肠杆菌偏好的密码子人工合成Rdrlec基因,通过EcoR I和Hind III位点插入到表达载体pET-32a(+)中构建pET32-Rdrlec重组表达质粒,转化到Escherichia coli BL21(DE3)中,0.4 mmol/L IPTG 30℃诱导6 h后,融合蛋白主要以可溶形式表达,经过Ni-NTA亲和纯化和Sephadex G75层析纯化,得到电泳纯融合蛋白。肠激酶切割后得到Rdrlec野生型重组蛋白,具有降解RNA的酶活性,证明分子的空间结构已经正确形成。Rdrlec野生型重组蛋白表达成功,为后续蛋白结构与功能的研究以及进一步的开发应用提供了原料。