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4种植物源性成分多重real-time PCR检测方法的建立及其在食用淀粉中的应用 被引量:3
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作者 范维 高晓月 +4 位作者 董雨馨 刘虹宇 李贺楠 赵文涛 郭文萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第1期210-216,共7页
建立一种可同时快速检测红薯、木薯、马铃薯、玉米源性成分的多重实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法。分别以红薯g3pdh基因、木薯g3pdh基因、马铃薯UGPase基因、玉米zSSIIb基因为靶基因设计... 建立一种可同时快速检测红薯、木薯、马铃薯、玉米源性成分的多重实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法。分别以红薯g3pdh基因、木薯g3pdh基因、马铃薯UGPase基因、玉米zSSIIb基因为靶基因设计特异性引物和TaqMan探针,以18S rRNA基因为内参基因,建立多重real-time PCR方法,开展方法学验证,并对不同掺入比例模拟样品和实际淀粉样品进行检测。结果显示,该方法具有高通量、特异性强、灵敏度高等优点。与15种非目标源性均无交叉反应;对目标DNA的检测灵敏度可达到3×10^(-3) ng/μL,且具有良好的线性关系和扩增效率;对淀粉样品的检出限可达0.1%,对50份实际样品进行检测,结果与参比方法一致,说明建立的多重real-time PCR法可用于食用淀粉种类掺假鉴别检测。 展开更多
关键词 多重实时聚合酶链式反应 食用淀粉 木薯 红薯 马铃薯 玉米
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基于病菌孢子捕捉和real-time PCR技术的田间空气中小麦白粉病菌孢子动态监测及病情估计模型研究
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作者 王奥霖 商昭月 +8 位作者 张美惠 王贵 胡小平 徐飞 孙振宇 曹世勤 刘伟 范洁茹 周益林 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期49-56,72,共9页
利用Burkard定容式孢子捕捉器结合real-time PCR定量技术,分别对种植高抗、中感和高感白粉病小麦品种的田间空气中白粉病菌分生孢子浓度进行监测,结果表明,real-time PCR定量与传统的显微观察计数两种方法测得的孢子浓度呈显著正相关(P... 利用Burkard定容式孢子捕捉器结合real-time PCR定量技术,分别对种植高抗、中感和高感白粉病小麦品种的田间空气中白粉病菌分生孢子浓度进行监测,结果表明,real-time PCR定量与传统的显微观察计数两种方法测得的孢子浓度呈显著正相关(P≤0.01),且两种病菌孢子计数方法在同一抗性品种上监测到的孢子浓度动态相近。此外,两种方法测得的孢子浓度与各气象因子的相关性分析结果一致,空气中的白粉病菌孢子浓度主要与空气相对湿度显著正相关。在此基础上,利用两种方法测定的田间空气中白粉病菌孢子浓度分别建立了基于累积孢子浓度的田间病情估计模型。分析发现,基于两种孢子浓度测定方法建立的病情估计模型间无显著性差异,表明real-time PCR定量技术测定的孢子浓度在构建白粉病病情估计模型上具有一定可行性。该结果为real-time PCR定量技术与病菌孢子捕捉技术相结合用于小麦白粉病的监测和预测提供理论依据。 展开更多
关键词 小麦白粉病 病菌孢子捕捉 实时荧光定量PCR 病原菌监测 病情估计模型
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马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种real-time PCR检测方法的建立与应用
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作者 吕厚姣 李欣媛 +3 位作者 白小佳 贾龙刚 耿伟涛 王艳萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第9期102-108,共7页
本研究建立了一种特异性实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法,根据模式菌株马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3的16S rDNA序列和全基因组序列设计筛选特异性引物,采用SYBR Green I荧光染料建立r... 本研究建立了一种特异性实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法,根据模式菌株马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3的16S rDNA序列和全基因组序列设计筛选特异性引物,采用SYBR Green I荧光染料建立real-time PCR方法,并对方法的特异性、灵敏度、重复性和混合体系等进行检测。结果表明,本研究所建立的方法特异性强、灵敏度高、重复性好,建立real-time PCR的标准曲线,其决定系数R2为0.965,具有良好的线性关系,且在马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种及混合体系中可以特异性检出。综上,本研究建立的real-time PCR法可以快速、准确地检测马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种,为马乳酒样乳杆菌的特异性定性定量检测提供了一种新的方法。 展开更多
关键词 马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种 实时聚合酶链式反应 特异性引物
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基于Real-time PCR法检测乳粉中牛源性成分定量研究
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作者 陈晨 史国华 +5 位作者 陈勃旭 张瑞 王玉欣 贾文珅 陈佳 周巍 《粮油食品科技》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期159-164,共6页
基于Real-timePCR建立了乳粉中牛源性成分相对定量检测方法,并对牛的特异性引物与探针进行了特异性、灵敏度和稳定性测试。通过模拟不同浓度牛乳粉与马乳粉混合样本,根据其△Ct值的函数关系进行线性拟合进而绘制标准曲线,建立乳粉中牛... 基于Real-timePCR建立了乳粉中牛源性成分相对定量检测方法,并对牛的特异性引物与探针进行了特异性、灵敏度和稳定性测试。通过模拟不同浓度牛乳粉与马乳粉混合样本,根据其△Ct值的函数关系进行线性拟合进而绘制标准曲线,建立乳粉中牛源性成分的相对定量检测。结果显示,该方法的最低检测限为0.00001 mg/mL,回收率为91.11%~119.2%,组间变异系数≤0.58%、组内变异系数≤1.44%。说明该方法在特异性与稳定性上适用于乳粉中牛源性成分及含量的掺假检测。 展开更多
关键词 牛乳粉 马乳粉 real-time PCR 掺假检测
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一种基于real-time PCR技术的TTV检测方法的建立及应用
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作者 贾毅博 王高玉 +4 位作者 邓宛心 林彩云 杨华 陈运春 尹飞飞 《海南医学院学报》 CAS 北大核心 2024年第7期489-497,共9页
目的:本研究旨在开发一种具有更高灵敏度和特异性的TTV检测技术,为揭示TTV在多种疾病过程中的作用提供重要的技术支持。方法:为了更精确、灵敏的检测TTV,本研究分析了目前公布的所有亚型的TTV基因序列,在此基础上建立了一种基于UTR区域... 目的:本研究旨在开发一种具有更高灵敏度和特异性的TTV检测技术,为揭示TTV在多种疾病过程中的作用提供重要的技术支持。方法:为了更精确、灵敏的检测TTV,本研究分析了目前公布的所有亚型的TTV基因序列,在此基础上建立了一种基于UTR区域的real-time PCR检测方法,并与文献报道应用较为广泛的PCR检测方法进行了对比。结果:本研究建立的方法在1×10^(7)~1×10^(1) copies/μL标准品浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为1.000,斜率为-3.446,检测下限为1×10^(1) copies/μL。重复性试验结果显示,组内变异系数为7.22%,表明本方法重复性、稳定性较强。针对30份临床样本,使用本研究建立的real-time PCR检测方法及目前被多个研究所使用的4套引物进行对比。结果表明,本研究所建立的方法灵敏度显著高于文献中报道的4种方法(P<0.01);Sanger测序结果表明,本方法检测出的30份阳性样本均为TTV,检测特异性为100%。结论:本研究采用基于TaqMan探针的real-time PCR检测方法,检测灵敏性高、覆盖基因型范围广,尤其对于TTV病毒载量较低的情况下能够进行定量检测,对于TTV病毒的致病性及作为免疫标志物的应用提供重要的技术支持。 展开更多
关键词 Torque teno virus 基因组扩增测序 real-time PCR检测
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Real-time Rescue Target Detection Based on UAV Imagery for Flood Emergency Response 被引量:1
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作者 ZHAO Bofei SUI Haigang +2 位作者 ZHU Yihao LIU Chang WANG Wentao 《Journal of Geodesy and Geoinformation Science》 CSCD 2024年第1期74-89,共16页
Timely acquisition of rescue target information is critical for emergency response after a flood disaster.Unmanned Aerial Vehicles(UAVs)equipped with remote sensing capabilities offer distinct advantages,including hig... Timely acquisition of rescue target information is critical for emergency response after a flood disaster.Unmanned Aerial Vehicles(UAVs)equipped with remote sensing capabilities offer distinct advantages,including high-resolution imagery and exceptional mobility,making them well suited for monitoring flood extent and identifying rescue targets during floods.However,there are some challenges in interpreting rescue information in real time from flood images captured by UAVs,such as the complexity of the scenarios of UAV images,the lack of flood rescue target detection datasets and the limited real-time processing capabilities of the airborne on-board platform.Thus,we propose a real-time rescue target detection method for UAVs that is capable of efficiently delineating flood extent and identifying rescue targets(i.e.,pedestrians and vehicles trapped by floods).The proposed method achieves real-time rescue information extraction for UAV platforms by lightweight processing and fusion of flood extent extraction model and target detection model.The flood inundation range is extracted by the proposed method in real time and detects targets such as people and vehicles to be rescued based on this layer.Our experimental results demonstrate that the Intersection over Union(IoU)for flood water extraction reaches an impressive 80%,and the IoU for real-time flood water extraction stands at a commendable 76.4%.The information on flood stricken targets extracted by this method in real time can be used for flood emergency rescue. 展开更多
关键词 UAV flood extraction target rescue detection real time
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Prevalence and Antibiotic Resistance of Urinary Tract Pathogens, with Molecular Identification of Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, and Acinetobacter spp., Using Multiplex Real-Time PCR
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作者 Hawa Tarnagda Djénéba Ouermi +12 位作者 Tani Sagna Wendyam Marie Christelle Nadembega Abdoul Karim Ouattara Lassina Traoré Rogomenoma Alice Ouedraogo Prosper Bado Bapio Valérie Elvira Jean Télesphore Bazie Nicole Bouda/Zongo Luc Zongo Albert Théophane Yonli Théodora Mahoukèdè Zohoncon Florencia Wendkuuni Djigma Jacques Simpore 《American Journal of Molecular Biology》 CAS 2024年第4期245-260,共16页
Urinary tract infections (UTIs) caused by uropathogens are a significant public health problem, and their treatment primarily relies on antibiotic therapy. However, the increasing global development of antibiotic resi... Urinary tract infections (UTIs) caused by uropathogens are a significant public health problem, and their treatment primarily relies on antibiotic therapy. However, the increasing global development of antibiotic resistance necessitates updating diagnostic techniques to ensure higher sensitivity and specificity, especially with advancements in science and medicine. This study aimed to evaluate the prevalence of UTIs and antibiotic resistance profiles through urine culture, as well as to identify Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, and Acinetobacter spp. in urine samples using a molecular approach with multiplex real-time PCR. From May 3 to July 25, 2023, at the Pietro Annigoni Biomolecular Research Center (CERBA) and Saint Camille Hospital of Ouagadougou (HOSCO), 209 urine samples collected from patients with suspected UTIs were analyzed using both urine culture and multiplex real-time PCR. Among the 209 patients, 52.15% were male and 47.85% female, with an average age of 46.87 ± 21.33 years. Urine cultures revealed an overall UTI prevalence of 23.44%, with a prevalence of 8.13% in men versus 15.31% in women (P = 0.023). The bacterial prevalence rates were as follows: Escherichia coli (12.92%), Klebsiella spp. (7.18%), Enterobacter cloacae (1.44%), Staphylococcus aureus (0.96%), and other bacteria. Klebsiella spp. demonstrated 100% resistance to Amoxicillin and Amoxicillin/Clavulanic Acid, while Escherichia coli showed 96.2% and 65.4% resistance to Amoxicillin and Amoxicillin/Clavulanic Acid, respectively. PCR analysis of the target bacteria revealed mono-infection prevalence rates of Klebsiella pneumoniae (10.39%), Klebsiella oxytoca (7.79%), and Acinetobacter spp. (7.79%), along with a co-infection prevalence rate of Klebsiella pneumoniae/Acinetobacter spp. (1.30%). This study demonstrated that PCR, with its high sensitivity and specificity, could effectively distinguish Klebsiella pneumoniae from Klebsiella oxytoca and detect Acinetobacter spp. in less than 24 hours—something urine culture alone could not achieve. The relative ease of automating urine PCR testing, combined with its diagnostic accuracy and rapid turnaround time, makes it a valuable addition to modern medical practice for the laboratory diagnosis of UTIs. 展开更多
关键词 Urinary Tract Infections Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Acinetobacter spp. Urine Culture real-time PCR
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24重荧光real-time PCR技术在食物中毒快速检测中的应用
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作者 卢媛 钟颖涛 《食品安全导刊》 2024年第6期85-88,共4页
目的:应用24重荧光real-time PCR检测技术快速筛检食物中毒病原菌,结合国家标准中的培养法探讨24重荧光real-time PCR检测技术符合性和应用价值。方法:采用高灵敏度、高特异性的24重荧光real-time PCR检测技术作为中毒病原菌的初筛方法... 目的:应用24重荧光real-time PCR检测技术快速筛检食物中毒病原菌,结合国家标准中的培养法探讨24重荧光real-time PCR检测技术符合性和应用价值。方法:采用高灵敏度、高特异性的24重荧光real-time PCR检测技术作为中毒病原菌的初筛方法,国标方法进行细菌分离培养,并对分离出的病原菌进行生化鉴定。结果:5份食物中毒患者肛拭子在增菌前检出4份霍乱弧菌核酸(非O1/非O139群,24重荧光real-time PCR),9份患者肛拭子在增菌后检出5株霍乱弧菌(非O1/非O139群,国标培养法),其中包含4份PCR技术初筛阳性样品,两个方法的符合率为80%。所有样本均未检出沙门氏菌、志贺菌、副溶血性弧菌、致泻性大肠埃希菌以及金黄色葡萄球菌。结论:应用24重荧光real-time PCR检测技术同时检测24种常见致病病原菌,能高效锁定中毒病原菌。将其与国标培养法相结合,对临床治疗和食物中毒快速处置能起到积极作用,值得应用和推广。 展开更多
关键词 24重荧光real-time PCR技术 培养法 食物中毒
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Real-Time Monitoring of Meteorological Data at In-Situ GCW Remediation Sites
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作者 Qinghai Wu Xiaofeng Yang +2 位作者 Jun Liu Ruiqi Wang Quanyou Fu 《Journal of Geoscience and Environment Protection》 2024年第9期152-166,共15页
To optimize the self-organization network, self-adaptation, real-time monitoring, remote management capability, and equipment reuse level of the meteorological station supporting the portable groundwater circulation w... To optimize the self-organization network, self-adaptation, real-time monitoring, remote management capability, and equipment reuse level of the meteorological station supporting the portable groundwater circulation wells, and to provide real-time and effective technical services and environmental data support for groundwater remediation, a real-time monitoring system design of the meteorological station supporting the portable groundwater circulation wells based on the existing equipment is proposed. A variety of environmental element information is collected and transmitted to the embedded web server by the intelligent weather transmitter, and then processed by the algorithm and stored internally, displayed locally, and published on the web. The system monitoring algorithm and user interface are designed in the CNWSCADA development environment to realize real-time processing and analysis of environmental data and monitoring, control, management, and maintenance of the system status. The PLC-controlled photovoltaic power generating panels and lithium battery packs are in line with the concept of energy saving and emission reduction, and at the same time, as an emergency power supply to guarantee the safety of equipment and data when the utility power fails to meet the requirements. The experiment proves that the system has the characteristics of remote control, real-time interaction, simple station deployment, reliable operation, convenient maintenance, and green environment protection, which is conducive to improving the comprehensive utilization efficiency of various types of environmental information and providing reliable data support, theoretical basis and guidance suggestions for the research of groundwater remediation technology and its disciplines, and the research and development of the movable groundwater cycling well monitoring system. 展开更多
关键词 Groundwater Circulation Well Weather Station real-time Monitoring Embedded Web Server
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垂体后叶粉中3种动物源性成分多重real-time PCR检测方法的建立及应用
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作者 邵长春 潘秀丽 +2 位作者 魏艳芸 王月玲 王蕙 《畜禽业》 2024年第8期1-6,共6页
目的基于三重实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)技术同时快速检测垂体后叶粉中的猪、牛、羊性动物源性成分。方法采用CTAB法提取样品及对照品DNA,以线粒体基因为靶基因设计并合成三重real-time PC... 目的基于三重实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)技术同时快速检测垂体后叶粉中的猪、牛、羊性动物源性成分。方法采用CTAB法提取样品及对照品DNA,以线粒体基因为靶基因设计并合成三重real-time PCR的引物探针,并对建立方法进行验证,用于检测垂体后叶粉样品是否与标识一致。结果猪、牛、羊源性成分的最低检测浓度为10 pg/μL,采用建立的方法检测3批垂体后叶粉样品,均只检测出猪源性成分。结论建立的方法可用于同时检测垂体后叶粉中的猪、牛、羊源性成分,可为相关工作提供技术支持。 展开更多
关键词 垂体后叶粉 多重实时聚合酶链反应 种属鉴定
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A CNN-Based Single-Stage Occlusion Real-Time Target Detection Method
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作者 Liang Liu Nan Yang +4 位作者 Saifei Liu Yuanyuan Cao Shuowen Tian Tiancheng Liu Xun Zhao 《Journal of Intelligent Learning Systems and Applications》 2024年第1期1-11,共11页
Aiming at the problem of low accuracy of traditional target detection methods for target detection in endoscopes in substation environments, a CNN-based real-time detection method for masked targets is proposed. The m... Aiming at the problem of low accuracy of traditional target detection methods for target detection in endoscopes in substation environments, a CNN-based real-time detection method for masked targets is proposed. The method adopts the overall design of backbone network, detection network and algorithmic parameter optimisation method, completes the model training on the self-constructed occlusion target dataset, and adopts the multi-scale perception method for target detection. The HNM algorithm is used to screen positive and negative samples during the training process, and the NMS algorithm is used to post-process the prediction results during the detection process to improve the detection efficiency. After experimental validation, the obtained model has the multi-class average predicted value (mAP) of the dataset. It has general advantages over traditional target detection methods. The detection time of a single target on FDDB dataset is 39 ms, which can meet the need of real-time target detection. In addition, the project team has successfully deployed the method into substations and put it into use in many places in Beijing, which is important for achieving the anomaly of occlusion target detection. 展开更多
关键词 real-time Mask Target CNN (Convolutional Neural Network) Single-Stage Detection Multi-Scale Feature Perception
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Cyber Resilience through Real-Time Threat Analysis in Information Security
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作者 Aparna Gadhi Ragha Madhavi Gondu +1 位作者 Hitendra Chaudhary Olatunde Abiona 《International Journal of Communications, Network and System Sciences》 2024年第4期51-67,共17页
This paper examines how cybersecurity is developing and how it relates to more conventional information security. Although information security and cyber security are sometimes used synonymously, this study contends t... This paper examines how cybersecurity is developing and how it relates to more conventional information security. Although information security and cyber security are sometimes used synonymously, this study contends that they are not the same. The concept of cyber security is explored, which goes beyond protecting information resources to include a wider variety of assets, including people [1]. Protecting information assets is the main goal of traditional information security, with consideration to the human element and how people fit into the security process. On the other hand, cyber security adds a new level of complexity, as people might unintentionally contribute to or become targets of cyberattacks. This aspect presents moral questions since it is becoming more widely accepted that society has a duty to protect weaker members of society, including children [1]. The study emphasizes how important cyber security is on a larger scale, with many countries creating plans and laws to counteract cyberattacks. Nevertheless, a lot of these sources frequently neglect to define the differences or the relationship between information security and cyber security [1]. The paper focus on differentiating between cybersecurity and information security on a larger scale. The study also highlights other areas of cybersecurity which includes defending people, social norms, and vital infrastructure from threats that arise from online in addition to information and technology protection. It contends that ethical issues and the human factor are becoming more and more important in protecting assets in the digital age, and that cyber security is a paradigm shift in this regard [1]. 展开更多
关键词 Cybersecurity Information Security Network Security Cyber Resilience real-time Threat Analysis Cyber Threats Cyberattacks Threat Intelligence Machine Learning Artificial Intelligence Threat Detection Threat Mitigation Risk Assessment Vulnerability Management Incident Response Security Orchestration Automation Threat Landscape Cyber-Physical Systems Critical Infrastructure Data Protection Privacy Compliance Regulations Policy Ethics CYBERCRIME Threat Actors Threat Modeling Security Architecture
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PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法 被引量:40
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作者 胡晓红 彭惠民 +2 位作者 刘昕 黄正根 袁科 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第2期155-158,共4页
目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提... 目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度。结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100+NP40法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度。结论:Chelex-100+NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR。 展开更多
关键词 DNA提取 PCR 实时荧光定量PCR
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检测粪便中GGⅡ型诺如病毒Real-time RT-PCR方法的建立 被引量:15
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作者 司红丽 王健伟 +3 位作者 徐樨巍 王建华 屈建国 洪涛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期166-171,共6页
诺如病毒是世界急性胃肠炎的重要病原之一。为加强其控制,通过序列比对设计出针对GGⅡ型诺如病毒保守序列的特异性引物与探针,建立了TaqMan Real-time RT-PCR方法。结果显示,此方法对诺如病毒核酸检测高度特异,与轮状病毒、腺病毒... 诺如病毒是世界急性胃肠炎的重要病原之一。为加强其控制,通过序列比对设计出针对GGⅡ型诺如病毒保守序列的特异性引物与探针,建立了TaqMan Real-time RT-PCR方法。结果显示,此方法对诺如病毒核酸检测高度特异,与轮状病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒等无交叉反应,最低检出限可达10^2拷贝,线性范围为100~100拷贝,标准曲线的相关系数为-1.00。针对标准品质粒检测的批内实验变异系数为0.28%~1.63%(n=6)、批间实验为0.28%~1.05%(n=3),对同一样品分6次进行RNA提取和逆转录,其变异系数为3增8%。对212份临床腹泻标本分别用常规RT-PCR和本文建立的TaqMan Real-time PCR进行检测,发现后者检出率略高于前者。这些结果提示此研究建立的诺如病毒的TaqMan Real-time RT-PCR检测方法可用于临床腹泻粪便标本的检测。 展开更多
关键词 real-time RT-PCR 人类杯状病毒 诺如病毒 检测
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Real-time PCR和PCR方法快速检测犬细小病毒 被引量:7
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作者 熊炜 李健 +5 位作者 邱璐 高莉华 蒋静 李春阳 黄忠荣 胡永强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期36-40,共5页
为适应出入境口岸对进出境宠物快速检疫的需要,本研究在建立PCR方法检测犬细小病毒(CPV)的基础上,进一步采用Taqman探针技术建立了快速检测CPV的Real-time PCR方法。通过灵敏度对比试验,证实Real-time PCR方法比PCR方法检测灵敏度显著... 为适应出入境口岸对进出境宠物快速检疫的需要,本研究在建立PCR方法检测犬细小病毒(CPV)的基础上,进一步采用Taqman探针技术建立了快速检测CPV的Real-time PCR方法。通过灵敏度对比试验,证实Real-time PCR方法比PCR方法检测灵敏度显著提高。通过对大量不同采样部位样品的检测证实,本研究建立的Real-time PCR和PCR方法具有较高的可靠性,并可显著提高CPV的阳性检出率。 展开更多
关键词 犬细小病毒 real—time PCR TAQMAN探针 PCR 犬病
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鲤疱疹病毒Ⅱ型TaqMan real-time PCR检测方法的建立及应用 被引量:18
16
作者 周勇 曾令兵 +2 位作者 张辉 范玉顶 徐进 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期607-613,共7页
针对鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)DNA解旋酶基因编码区序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增出长度为1 446 bp的基因编码区片段,克隆到pMD19T载体上,构建重组质粒。经PCR鉴定与测序分析确认正确后,以10倍梯度稀释重组... 针对鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)DNA解旋酶基因编码区序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增出长度为1 446 bp的基因编码区片段,克隆到pMD19T载体上,构建重组质粒。经PCR鉴定与测序分析确认正确后,以10倍梯度稀释重组质粒,作为标准模板进行TaqMan real-time PCR扩增,制作标准曲线,建立了鲤疱疹病毒Ⅱ型的荧光定量PCR检测方法。检测结果显示,标准曲线的相关系数(R2)达到0.999 1,斜率为-3.412;对初始模板定量检测的范围为1×101~1×107copies/μL;特异性试验结果表明,该方法可特异性地检测出鲤疱疹病毒Ⅱ型,而对大鲵虹彩病毒(GSIV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)以及空白对照无检测信号。取江苏射阳和宝应两地疑似患病鲫组织核酸作为模板进行荧光定量PCR,结果表明反应体系中的病毒量分别为6.89×104copies/μL和3.02×102copies/μL。本研究建立的鲤疱疹病毒Ⅱ型TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对因鲤疱疹病毒Ⅱ感染引起的养殖鲫造血器官坏死症的诊断与病毒病原定量检测有重要意义。 展开更多
关键词 造血器官坏死症 鲤疱疹病毒Ⅱ型 TAQMAN real-time PCR 检测方法
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空肠弯曲菌hipO基因的Real-time PCR检测研究 被引量:13
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作者 祝长青 蒋原 +6 位作者 刘秀梅 邵景东 唐泰山 郭云昌 马群飞 栾军 杨毓环 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期785-787,共3页
目的建立基于新型Taqman荧光探针的荧光实时(Real-time)PCR方法用于空肠弯曲菌的筛选检测与快速鉴定。空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是近十几年来在世界范围内广泛重视的人畜共患病原菌,可以导致人类的急性肠炎与食物中毒,并... 目的建立基于新型Taqman荧光探针的荧光实时(Real-time)PCR方法用于空肠弯曲菌的筛选检测与快速鉴定。空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是近十几年来在世界范围内广泛重视的人畜共患病原菌,可以导致人类的急性肠炎与食物中毒,并能引发格林-巴利综合征等并发症。为更好地利用分子生物学技术对空肠弯曲菌进行快速、准确的基因检测,本研究从样品增菌液与单菌落中提取细菌DNA,建立了针对空肠弯曲菌特异的hipo(hippuricase,马尿酸酶)基因的Real-timePCR方法,用于空肠弯曲菌的快速筛选检测与可疑菌落快速鉴定。试验结果表明,该方法检测细菌的灵敏度为110CFU.人工布菌鸡肉的检测灵敏度为1~10CFU。本研究所建立的空肠弯曲菌荧光实时PCR方法具有准确、可靠、快速的特点。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 hipO基因 荧光实时PCR
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用DGGE和Real-Time PCR对低温沼气池中产甲烷古菌群落的研究 被引量:23
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作者 王彦伟 徐凤花 +3 位作者 阮志勇 宋金龙 王庆 赵斌 《中国沼气》 北大核心 2012年第1期8-12,共5页
利用DGGE及Real-Time PCR技术对不同地区低温沼气池中沼泥行进发酵前期、后期产甲烷古菌群落变化进行了研究。DGGE技术用于分析发酵前后产甲烷古菌优势群落的变化;Real-Time PCR技术用于分析发酵前期、后期样品产甲烷古菌的数量变化。... 利用DGGE及Real-Time PCR技术对不同地区低温沼气池中沼泥行进发酵前期、后期产甲烷古菌群落变化进行了研究。DGGE技术用于分析发酵前后产甲烷古菌优势群落的变化;Real-Time PCR技术用于分析发酵前期、后期样品产甲烷古菌的数量变化。结果表明,沼气低温发酵的过程中,不同沼泥样品发酵前期、后期产甲烷古菌的优势群落差异明显且数量上也存在较大差异;主要变化的产甲烷古菌的优势群落为甲烷粒菌属(Methanocor-pusculum),甲烷八叠球菌属(Methanosarcina),甲烷鬃毛菌属(Methanosaeta)。甲烷八叠球菌属(Methanosarcina)在黑龙江沼泥样品(A1)发酵后期成为优势群落,甲烷鬃毛菌属(Methanosaeta)在山东发酵前期(B1),后期样品(B2)及安徽发酵前期样品(C1)中占有绝对优势。产甲烷古菌的数量介于104~105个.mL-1之间,其中黑龙江样品中产甲烷菌数量最多,而安徽样品中产甲烷菌数量最少。 展开更多
关键词 沼泥 产甲烷古菌 DGGE real-time PCR
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运用Real-time PCR方法研究日粮添加豆油与胡麻油对肉牛瘤胃纤维分解菌数量的影响 被引量:13
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作者 李旦 王加启 +3 位作者 卜登攀 杨舒黎 魏宏阳 周凌云 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期256-260,共5页
本研究分别以产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)、黄色瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens)、白色瘤胃球菌(Ruminobacter albus)和溶纤维丁酸弧菌(Butyrivibrio fibrisolvens)16S rDNA序列设计引物,运用Real-ti me PCR技术... 本研究分别以产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)、黄色瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens)、白色瘤胃球菌(Ruminobacter albus)和溶纤维丁酸弧菌(Butyrivibrio fibrisolvens)16S rDNA序列设计引物,运用Real-ti me PCR技术研究日粮中添加豆油与胡麻油对肉牛上述4种瘤胃纤维分解菌数量的影响。结果表明,与对照组(CK)相比,添加豆油组(LOC1)和胡麻油(LOC2)组,产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)、黄色瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens)、白色瘤胃球菌(Ruminobacter albus)和溶纤维丁酸弧菌(Butyrivibrio fibrisol-vens)数量显著减少(P<0.05),分别降低了78%和31%、30%和36%、27%和23%、6%和13%。通过该方法的结果表明日粮中添加4%的豆油和胡麻油显著减少了瘤胃中纤维分解菌,对产琥珀酸丝状杆菌的影响明显。而且采用Real-ti me PCR方法对瘤胃纤维分解菌进行定量,可以快速有效反映出在日粮改变的情况下菌的数量变化趋势,相对于传统计数方法更直观、快捷与准确。 展开更多
关键词 real-time PCR 瘤胃纤维菌 定量 肉牛
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草鱼呼肠孤病毒TaqManreal-time PCR检测方法的建立 被引量:15
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作者 周勇 曾令兵 +4 位作者 范玉顶 徐进 马杰 罗晓松 肖艺 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期774-779,共6页
利用RT-PCR技术扩增出草鱼呼肠孤病毒(GCRV)VP6蛋白编码区长度为1 250 bp的片段,克隆到pEGFP-N1载体上,构建重组质粒pEGFP-N1-VP6。经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pEGFP-N1-VP6重组质粒,作为标准模板进行TaqMan real-time PCR扩增... 利用RT-PCR技术扩增出草鱼呼肠孤病毒(GCRV)VP6蛋白编码区长度为1 250 bp的片段,克隆到pEGFP-N1载体上,构建重组质粒pEGFP-N1-VP6。经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pEGFP-N1-VP6重组质粒,作为标准模板进行TaqMan real-time PCR扩增,制作标准曲线,建立了草鱼呼肠孤病毒的荧光定量PCR检测方法。检测结果显示,标准曲线的相关系数(R2)达到0.998 09,斜率为-3.373;对初始模板定量检测的范围为1×101~1×106copies/μL;特异性试验结果表明,该方法可特异性地检测出草鱼呼肠孤病毒,而对鲤春病毒血症病毒(SVCV)、传染性造血器官坏死症病毒(IHNV)无检测信号。本研究建立的草鱼呼肠孤病毒TaqMan real-time PCR方法灵敏度高、特异性强,可进行定量分析,对草鱼出血病快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 VP6蛋白编码基因 TaqManreal-timePCR 检测
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