实时荧光PCR法快速检测急性上呼吸道感染病原体

【目的】利用实时荧光定量PCR技术,建立一套快速可靠的急性上呼吸道感染病毒/细菌检测方法,对杭州市某学校暴发的一起群体性急性上呼吸道感染进行病原学分析。【方法】用甲、乙型流感病毒核酸联合测定试剂盒、呼吸道合胞病毒核酸测定试剂盒、腺病毒核酸测定试剂盒、B型流感嗜血杆菌核酸测定试剂盒对20例上呼吸道感染疑似患者样品进行实时荧光定量PCR检测。【结果】20例样本中有7例为腺病毒病毒阳性,无其它病毒或细菌阳性。【结论】实时荧光定量PCR法能快速准确地检测急性上呼吸道感染的病原体;本次暴发的急性上呼吸道感染是由腺病毒病毒引起的。

荧光定量PCR检测急性呼吸道感染患者常见呼吸道病毒的研究

目的分析2011年8月至2012年8月期间惠州市急性呼吸道感染病毒性病原谱的构成及流行特征,为临床诊断、治疗和呼吸道传染病的预防控制提供病原学依据。方法应用荧光定量PCR方法,对485例鼻咽拭子样本同时进行甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、博卡病毒、副流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、人冠状病毒的检测,并进行统计学分析。结果 485份样本中检出228份呼吸道病毒阳性的样本,阳性率为47.01%,其中混合感染20份,占阳性样本的8.77%。病毒病原谱构成前三位为乙型流感病毒、鼻病毒和甲型流感病毒。病毒检出阳性率的时间分布有一定规律性:1月至次年2月阳性率较高,不同月份检出的优势病毒不同。各年龄组病毒阳性率差异有统计学意义(χ2=19.414,P<0.05),不同年龄组病毒感染的病原谱构成也不同:0～5岁年龄组以鼻病毒为主;5岁以上各年龄组均以流感病毒为主。不同性别患者之间病毒核酸检出率差异无统计学意义(χ2=0.522,P>0.05)。结论乙型流感病毒、鼻病毒和甲型流感病毒是惠州市急性呼吸道感染主要病原体。部分病原体的感染与年龄和季节有一定的关联;ARTI患者中部分合并感染其他呼吸道病毒,应长期监测呼吸道病毒的活动水平。

大理州某医院儿童急性下呼吸道感染病原学分析

目的 分析住院儿童急性下呼吸道感染(ALRTI)病原体感染情况及流行规律,为临床诊治和疾病预防控制提供参考。方法 选取2021-05-01-2022-04-30大理大学第一附属医院儿科住院部收治的402例临床诊断为ALRTI患儿作为研究对象,收集病例基本信息并采集呼吸道标本。采用多重实时荧光PCR技术对35种常见呼吸道病原体进行核酸检测,采用χ^(2)检验、Fisher精确概率法进行统计学分析。结果 402例ALRTI标本中,391例(97.26%)检出病原体,其中37例为单一感染,354例为多重感染。检出的主要病原体为肺炎链球菌(SP,82.34%),其次为流感嗜血杆菌(Hib,34.08%)、巨细胞病毒(CMV,23.63%)、呼吸道合胞病毒A型(RSV-A,20.40%)、呼吸道合胞病毒B型(RSV-B,19.40%)等。在不同年龄间,RSV-A、RSV-B、副流感病毒(PIV)、腺病毒(ADV)、CMV、EB病毒(EBV)、6型疱疹病毒(HHV-6)、7型疱疹病毒(HHV-7)、金黄色葡萄球菌(SA)、SP、Hib、鲍曼不动杆菌(ABA)、肺炎克雷伯杆菌(KPN)、肺炎支原体(MP)、肺炎衣原体(CP)检出率差异有统计学意义,均P<0.05。在不同季节间,RSV-A、RSV-B、PIV、乙型流感病毒(INFB)、鼻病毒(RV)、ADV、1型单纯疱疹病毒(HSV-1)、HHV-6、HHV-7、百日咳杆菌(B.pertussis)、CP检出率差异有统计学意义,均P<0.05。在不同民族间,除PIV(P=0.011)、INFB(P=0.004)外,其余病原体检出率差异无统计学意义,均P>0.05。在不同海拔间,仅229E型冠状病毒(CoV-229E)检出率差异有统计学意义,P=0.011。结论 本院儿童ALRTI的主要病原体为SP、Hib、CMV、RSV-A和RSV-B等;不同病原体检出率存在年龄、季节、民族及海拔的差异。

长沙地区急性下呼吸道感染住院儿童的病毒病原学分析

目的 :了解长沙地区急性下呼吸道感染(ALRTI)住院儿童中常见呼吸道病毒的流行特点,为本地区儿童ALRTI的防治提供依据。方法 :收集2013年4月~2014年3月诊断为ALRTI的住院患儿鼻咽抽吸物(NPA)标本603份,采用实时荧光PCR方法检测呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(HRV)、流感病毒A(IFVA)、流感病毒B(IFVB)、副流感病1-4(PIV1-4)、人偏肺病毒(h MPV)、肠道病毒(EV)、冠状病毒HKU1(HCo V-HKU1)、冠状病毒NL63(HCo V-NL63)、腺病毒(ADV)及人博卡病毒(HBo V),结合临床资料进行统计分析。结果 :603份标本中有527份检出病毒,总检出率87.4%,RSV检出率居首位为42.6%,其次HRV为25.4%、HBo V为17.7%、PIV3为15.4%,ADV为14.76%。病毒总检出率在男女之间差异无统计学意义;病毒阳性检出率在各年龄段之间差异有统计学意义,以6个月至1岁以内年龄段检出率最高。病毒总检出率季节分布差异有统计学意义,以冬季检出率最高。结论:病毒病原在长沙地区儿童ALRTI中占重要地位,其中RSV、HRV、HBo V、PIV3、ADV是常见病毒病原,易感人群以低年龄段儿童为主,冬春季为高发季节。

2011-2013年深圳市某医院急性上呼吸道感染门诊患者中腺病毒的检测分析

目的了解深圳市某医院急性上呼吸道感染门诊患者中的腺病毒(HAd V)感染状况及流行特征。方法采用荧光定量PCR法对深圳市宝安区人民医院门诊就诊的急性上呼吸道感染患者的990份咽拭子进行HAd V检测核酸,并分析HAd V的流行特征。结果 2011-2013年该医院急性上呼吸道感染患者HAd V的阳性率为6.33%(63/990),HAd V感染主要集中在5岁以下儿童,占58.73%(37/63),以学龄前儿童检出率最高,其次为婴幼儿和学龄儿童。HAd V感染者体温均大于38℃。HAd V合并其他呼吸道病毒的混合感染率为23.81%。结论 HAd V是深圳市某医院急性上呼吸道感染门诊患者的重要病原体之一,随着季节和年龄的不同,HAd V具有一定的流行规律。

急性呼吸道感染患儿人冠状病毒NL63检测与分析

目的建立人冠状病毒NL63(human coronavirus NL63)的实时荧光定量PCR(real-time fluorescentquantitative PCR,FQ-PCR)方法,了解呼吸道疾病患儿感染人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的情况。方法收集2008年10月至2009年4月因急性呼吸道感染(ARTI)而就诊于福建医科大学省立临床医学院患儿的咽拭子、鼻咽抽吸物、痰标本共151份,设计多聚酶蛋白1a基因的引物和Taqman探针,扩增1a基因片段,并将其克隆到PMD18-T载体上,构建质粒标准品,建立FQ-PCR检测方法,进行敏感性、特异性试验。扩增核衣壳蛋白N基因,对其序列进行初步分析。结果所建立的FQ-PCR方法特异性好,线性范围为101～1010copies/μL,变异系数小于5%。151份临床标本中共检测到2份HCoV-NL63阳性,阳性率为1.3%(2/151)。结论采用FQ-PCR方法可以检测急性呼吸道疾病患儿感染HCoV-NL63的情况。

一种多重呼吸道病毒检测试剂在儿童急性下呼吸道感染病毒病原检测中的初步应用评价

目的对一种六重呼吸道病毒real-time PCR试剂在儿童急性下呼吸道感染病毒病原检测中的应用效果进行评价。方法采用多重荧光探针real-time PCR法,对下呼吸道感染患儿的300份鼻咽拭子进行常见6种呼吸道病毒检测(甲型/乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感Ⅰ型和副流感Ⅲ型病毒),并应用液相悬浮芯片试剂进行对比检测;另外对136份免疫荧光法抗原检测阳性的下呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物标本进行验证分析。结果300份鼻咽拭子中,该六重荧光探针real-time PCR试剂检出阳性标本173例,液相芯片法检出阳性标本159例,该real-time PCR试剂检出率高于液相芯片法。此外,在136份抗原检测阳性标本中,该试剂还检测出22例抗原法未检到的2种或2种以上病毒病原混合感染样本。结论该多重呼吸道病毒real-time PCR试剂在儿童下呼吸道病毒病原检测中具有较高的灵敏度和特异性,在儿童下呼吸道感染的临床诊疗方面具有良好的应用价值。